本发明专利技术属于医药技术领域，涉及从延龄草的根及根茎中提取分离的一种新甾体皂苷类化合物及其在制备炎症细胞抑制剂中的应用。该化合物具有式Ⅰ化学结构式，实验结果表明，它能抑制LPS刺激小鼠单核巨噬细胞RAW264.7中炎症介质NO的产生，且其制备方法简易，有利于对其进行进一步的药理和临床研究，开发其在抗炎药物中的应用。
Steroidal saponin compound, preparation method and application thereof
The invention belongs to the technical field of medicine, and relates to a new steroidal saponins extracted from the roots and rhizomes of Trillium and its use in preparing inhibitors in inflammatory cells. The compound has a chemical structure of type, the experimental results show that it can inhibit inflammatory mediators NO LPS stimulated mouse macrophage RAW264.7 production, and the preparation method is simple, is conducive to further research and clinical pharmacology of its development, its application of anti-inflammatory medicine.
【技术实现步骤摘要】
一种甾体皂苷类化合物及其制备方法和应用
本专利技术属于医药
，涉及一种甾体皂苷类化合物及其制备方法和应用，具体涉及从延龄草根茎中提取分离得到的一种新的甾体皂苷及其制备方法和在制备抗炎药物中的用途。
技术介绍
炎症是指机体对于外界刺激而利用系统的活体组织对外界致炎因子产生防御的一种十分重要而又常见的病理过程。非甾体类药物是目前临床上常用的抗炎药物,在我国,其消耗量仅次于抗感染药。但是,有诸多的不良反应,如影响消化系统,长期使用可导致胃溃疡。近年来，由于中药良好的抗炎作用和毒副作用小而受到广泛的关注。延龄草为百合科延龄草属植物，以干燥根茎及成熟果实入药，为著名的土家族七药之一，已被列入国家三级保护植物。该药味甘、性平，有小毒，具有镇静安神、活血止血、散淤疗伤、止痛等功效，主治高血压、神经衰弱、眩晕头痛、跌打损伤、外伤出血等症，尤其在土家族民间治疗各种炎性疾病，如疼痛，溃疡，发烧和风湿性疼痛。延龄草富含甾体皂苷，有抗炎、降血脂、抗肿瘤、镇痛止血、免疫调节等作用，本专利技术所涉及的具有呋喃环的甾体皂苷化合物及其活性，迄今为止尚未见有专利或文献报道。
技术实现思路
本专利技术提供一种从延龄草根茎中提取分离得到的一种新的甾体皂苷和制备方法及其在制备抗炎药物中的用途。本专利技术所述化合物的结构如式Ⅰ所示，本专利技术的制备方法的技术方案包括如下步骤：以延龄草根茎干燥药材为原料，以乙醇水溶液加热回流提取，浓缩得浸膏状乙醇提取物，将乙醇提取物混悬于水中得混悬液，依次加入与混悬液体积相等的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，将各个萃取溶液浓缩，得到浸膏，将正丁醇萃取物经硅胶柱色谱，用体积配比为100:0-0:100的二氯甲烷/三氯甲烷-甲醇溶液进行梯度洗脱，其中二氯甲烷/三氯甲烷-甲醇合适配比的洗脱物经ODS柱色谱，用体积比为10:90-100:0的甲醇-水溶剂梯度洗脱，将其中甲醇-水合适体积比的洗脱部分经半制备ODS高效液相色谱进行纯化，以合适体积比的甲醇-水溶液为流动相，得式Ⅰ化合物。所述制备方法中，所述乙醇为浓度为：60％-70％的乙醇水溶液。所述回流提取次数为2-3次，提取时间为每次1.5-2小时。所述二氯甲烷/三氯甲烷-甲醇合适的配比为100:25-100:35。所述ODS柱色谱洗脱剂甲醇-水合适的体积比为68:32-72:28。所述半制备ODS高效液相色谱流动相甲醇-水溶液合适的体积比为65:35-75:25。式Ⅰ化合物为白色无定型粉末(甲醇)，[α]20D–73.8(c0.60,C5H5N)，Liebermann-Burchard反应阳性，Molish反应阳性，10％硫酸乙醇显浅红色。HR-ESI-MS给出其准分子离子峰1175.5809[M+H]+，确定式Ⅰ化合物的分子式为C57H90O25(不饱和度为13)。化合物的IR(KBr)谱显示在3395，1646cm-1处有吸收，提示该化合物结构中含有羟基、碳碳双键官能团。1H-NMR(400MHz,pyridine-d5)谱中，在高场区给出四个甾体皂苷特征甲基峰信号，即：δH0.89(3H,s,CH3-18)，0.98(3H,d,J＝6.3Hz,CH3-27)，1.08(3H,s,CH3-19)和1.97(3H,s,CH3-21)，及13C-NMR(400MHz,pyridine-d5)谱中，高场区δC9.0(C-21)、17.3(C-27)、18.3(C-18)、19.4(C-19)为苷元上四个甲基信号；δH1.58(3H,d,J＝5.8Hz)，1.59(3H,d,J＝5.8Hz)，1.76(3H,d,J＝6.1Hz)为三个鼠李糖基的甲基质子信号；低场区δH4.81(1H,d,J＝7.8Hz)，4.94(1H,d,J＝7.8Hz)，5.83(1H,brs)，6.28(1H,brs)和6.39(1H,brs)为5个糖的端基质子信号。13CNMR共有57个碳，其中5个单糖片段有30个碳，所以苷元的分子式为C27H40O3，提示苷元是含有三个氧原子的甾体骨架。1HNMR中δH5.32(1H,brd,J＝3.2Hz,H-6)为烯烃质子信号；3.57(1H,dd,J＝9.4,5.5Hz,H-26)，3.94(1H,m,H-26)，3.87(1H,m,H-3)分别为26位与3位连氧质子信号，结合13CNMR中，6个烯碳信号δC112.0(C-20)、121.7(C-6)、137.2(C-17)、141.2(C-5)、153.8(C-22)和155.3(C-16)，故推测式Ⅰ化合物的苷元为Δ5,16,20(22)-furostatriene-3,26-diol。苷元的结构进一步通过HMBC相关确定，如Ⅱ所示，δH1.08(3H,s,Me-19)与C-1(δC37.4),C-5(δC141.2)和C-9(δC51.1)相关，说明Me-19连接在10位碳上；δH0.89(3H,s,Me-18)与C-12(δC35.7)，C-14(δC60.9)和C-17(δC137.2)相关，说明Me-18连接在13位碳上；δH1.97(3H,s,Me-21)与C-17(δC137.2)，C-20(δC112.0)和C-22(δC153.8)相关，说明Me-21连接在20位碳上；δH0.98(3H,d,Me-27)与C-24(δC33.2)，C-25(δC33.6)和C-26(δC75.0)相关，说明Me-27连接在25位碳上；δH5.32(1H,d,H-6)与C-4(δC39.1),C-8(δC30.5)和C-10(δC37.4)相关。26位亚甲基的△(δH26b–δH26a)＝0.37ppm<0.48，根据文献报道，为25R构型，推断式Ⅰ化合物的苷元立体构型为(25R)-Δ5,16,20(22)-furostatriene-3β,26-diol。对式Ⅰ化合物进行酸水解，所得的糖残基通过HPLC分析，确定化合物含有D-葡萄糖和L-鼠李糖。糖链片段数据显示有5个端基质子信号，3个甲基信号，5个端基碳信号(δC100.4,102.2,102.3,103.3和104.9)，提示含有两个2个葡萄糖基和3个鼠李糖基。根据葡萄糖端基质子3J1,2>7.0Hz，判断苷键构型为β-构型。根据13CNMR谱中鼠李糖基C-3(δC-RI72.9,δC-RII72.9和δC-RIII72.9)及C-5(δC-RI69.6,δC-RII68.4和δC-RIII70.5)与文献对比，得出苷键构型为α-构型。在HMBC谱中，δH4.94(1H,d,J＝7.8Hz)和δC78.1(C-3)相关，表明四个糖基链连接在C-3，δH4.81(1H,d,J＝7.8Hz)和δC75.0(C-26)相关，表明β-吡喃葡萄糖连接在C-26。通过以上解析，最终确定式Ⅰ化合物即为本专利技术的具有呋喃环的甾体皂苷。表1：式Ⅰ化合物的1H-NMR(400MHz,pyridine-d5)和13C-NMR(400MHz,pyridine-d5)数据对所得到的式Ⅰ化合物进行体外LPS刺激RAW264.7巨噬细胞的抑制作用，体外实验结果表明式Ⅰ化合物在体外对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞具有较好的抑制作用，其IC50值为17.78μM。因此，本发本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种甾体皂苷类化合物，其特征在于，该化合物具有式Ⅰ的结构：
【技术特征摘要】
1.一种甾体皂苷类化合物，其特征在于，该化合物具有式Ⅰ的结构：2.根据权利要求1所述的甾体皂苷类化合物，其特征在于，该化合物从延龄草的根及根茎中分离得到的。3.如权利要求1所述的甾体皂苷类化合物的制备方法，其特征在于：以延龄草根茎干燥药材为原料，以乙醇加热回流提取，浓缩得浸膏状乙醇提取物，将乙醇提取物混悬于水中得混悬液，依次加入与混悬液体积相等的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，将各个萃取溶液浓缩，得到浸膏，将正丁醇萃取物经硅胶柱色谱，用体积配比为100:0-0:100的二氯甲烷/三氯甲烷-甲醇溶液进行梯度洗脱，其中二氯甲烷/三氯甲烷-甲醇体积比为100:25-100:35的洗脱物经ODS柱色谱，用体积比为10:90-100:0的甲醇-水溶剂梯度洗脱，将其中甲醇-水体积比为68:32-72:28的洗脱...
【专利技术属性】
技术研发人员：贾景明，阎婷，胡高升，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
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