齐墩果烷型三萜皂苷类化合物、其制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及从鸡冠花成熟的种子中提取分离的三种新的齐墩果烷型三萜皂苷类化合物，即青葙苷K、青葙苷L和青葙苷M以及这些化合物的制备方法，还涉及青葙苷K和青葙苷L在制备预防或治疗抗肝纤维化的药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于天然药物化学及医药
，尤其涉及从鸡冠花(CelosiacristataL.)的成熟种子中提取分离得到了三种齐墩果烷型三萜皂苷类新化合物、这些化合物的制备方法及这些化合物在制备治疗抗肝纤维化药的药物中的应用。
技术介绍
鸡冠花(CelosiacristataL.)，中文别名：鸡髻花、老来红、芦花鸡冠、笔鸡冠、小头鸡冠、凤尾鸡冠、大鸡公花、鸡角根、红鸡冠，为一年生苋科草本植物，夏秋季开花，花多为红色，呈鸡冠状，故称鸡冠花。鸡冠花子即鸡冠花的成熟种子，始载于《嘉佑本草》。《本草纲目》载“味甘，凉，无毒。治痔漏下血，赤白下痢，崩中，赤白带下，分赤白用”。祖国传统医学认为鸡冠花性凉，味甘涩，具有清热除湿、收敛涩肠、凉血止血、止泻止带之功效，适用于赤白痢疾、功能性子宫出血、痔漏下血、吐血、咯血、衄血、血淋、白带过多、崩漏、遗精、乳糜尿等病症；鸡冠花子可清肝明目，主治目赤肿痛，翳障等症。此外，鸡冠花还是一种可以食用的植物，元代李果编辑、明代李时珍参订、姚可成补辑的《食物本草》中记载了不少人们食用鸡冠花积累的经验方。现代药理学研究表明，鸡冠花子有止血、抗衰老、增强机体耐受力、防治动脉粥样硬化、预防骨质疏松和增强机体免疫力等作用，具有较高的药用价值。姜氏等研究了鸡冠花子对S180荷瘤鼠免疫器官的影响。结果表明，鸡冠花子提取物对S180肿瘤细胞的生长有抑制作用，可增加免疫器官的重量，而且不同剂量鸡冠花子提取物的抑瘤作用及增强免疫系统活性的能力也不同。李氏等研究了鸡冠花子黄酮类化合物对成骨细胞增殖和转化生长因子-β1(TGF-β1)的作用，从细胞水平探讨鸡冠花子黄酮类化合物在预防骨质疏松中的作用，该研究还显示，鸡冠花子黄酮类化合物具有促进大鼠成骨细胞矿化及成骨细胞胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达的作用，说明鸡冠花子黄酮类化合物可促进大鼠成骨细胞的代谢，在预防骨质疏松方面可能具有一定的作用。郭氏等分别以小鼠和家兔为研究对象，通过灌胃给药的方法，测定小鼠的出血时间(BT)及家兔凝血时间(CT)、血浆复钙时间(PRT)、凝血酶原时间(PT)、优球蛋白溶解时间(ELT)，结果表明给药后小鼠(断尾法)BT明显缩短(P＜0.01)，家兔(试管法)的CT、PRT、PT明显缩短(均P＜0.05)，而ELT明显延长(P＜0.01)，表明鸡冠花子“收涩止血”的作用与其促进凝血和抑制纤溶活性有关，同时其促凝血因子生成或抑制纤维系统亢进的作用，为鸡冠花子止血作用尤其在妇科出血病证上的应用提供了依据。有关鸡冠花子化学成分研究的报道显示，鸡冠花含有黄酮、酚酸、脂肪类和三萜皂苷等成分。但是，到目前为止，没有一篇文献报道本专利技术所述的从鸡冠花成熟的种子中提取分离的三种新的齐墩果烷型三萜皂苷类化合物，即青葙苷K、青葙苷L和青葙苷M；也没有报道把该青葙苷K和青葙苷L用于制备预防和治疗抗肝纤维化药的药物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供从鸡冠花成熟的种子中提取分离的三种新的齐墩果烷型三萜皂苷类化合物，即青葙苷K、青葙苷L和青葙苷M；同时，发现青葙苷K和青葙苷L具有抗肝纤维化的活性，具有制备保肝护肝药物的用途，从而完成本专利技术。因此，本专利技术的目的之一是提供三种齐墩果烷型三萜皂苷类化合物，即青葙苷K、青葙苷L和青葙苷M。其中，青葙苷K具有式(1)所示的化学结构；青葙苷L具有式(2)所示的化学结构；青葙苷M具有式(3)所示的化学结构。式(1)式(2)式(3)。本专利技术所述的青葙苷K或青葙苷L或青葙苷M是从苋科植物鸡冠花子CelosiacristataL.提取得到。本专利技术的另一目的是提供青葙苷K、青葙苷M和青葙苷M的制备方法，所述方法包括：回流提取鸡冠花种子粗粉，减压浓缩得到总浸膏，总浸膏用水分散后，采用有机溶剂萃取得到萃取物，萃取物经分离得到所述青葙苷K、青葙苷L和青葙苷M。在优选实施方式中，本专利技术所述的方法包括：鸡冠花子5kg粉碎后，用5倍量60％乙醇加热回流提取3次，每次2h，过滤，提取液减压浓缩至浸膏，用适量水分散后依次以等体积石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分别萃取4次，减压回收得各相萃取浸膏分别为62g、8g和40g；正丁醇相浸膏40g经MCI微孔树脂柱以乙醇-水(0:100-100:0)梯度洗脱，分别收集20:80，40:60，60:40和80:20四个部分的洗脱液；取第3部分洗脱液(60:40)经过C-18反相硅胶柱层析以乙腈-水(32:68)洗脱，洗脱液薄层色谱检视后，得到3个组分；将第3组分经过SephadexLH-20凝胶色谱柱层析(甲醇:水＝80:20)及高效液相色谱分离纯化得到所述青葙苷K、青葙苷L和青葙苷M。所述色谱分离条件为：高效液相色谱仪：安捷伦1260Infinity系统；色谱柱：(YMC-PackODS-A,10×250mm,5μm)；洗脱剂：乙腈-水(33:67)，流速2ml/min，检测波长：203nm。本专利技术的另一目的是提供一种药物组合物，其包含作为活性成分的本发明所述青葙苷K或所述青葙苷L，以及一或多种药学上可接受的载体。在本专利技术的另一方面，本专利技术的包含所述青葙苷K或所述青葙苷L的药物组合物可被制成片剂、胶囊、颗粒剂、口服液等任意一种药学上可接受的剂型，用于临床治疗。本专利技术的进一步目的还在于提供所述青葙苷K或所述青葙苷L或所述药物组合物在制备预防或治疗抗肝纤维化的药物中的应用。本专利技术的青葙苷K、L和M结构新颖，制备方法简单，成本低廉，为开发保肝护肝药物提供了先导化合物。附图说明图1为本专利技术的青葙苷K的化学结构式，其中碳原子用数字编号；图2为本专利技术的青葙苷L的化学结构式，其中碳原子用数字编号：图3为本专利技术的青葙苷M的化学结构式，其中碳原子用数字编号；图4为本专利技术的青葙苷K的HMBC、1H-1HCOSY关键信号；图5为本专利技术的青葙苷L的HMBC、1H-1HCOSY关键信号；图6为本专利技术的青葙苷M的HMBC、1H-1HCOSY关键信号；图7为青葙苷K、L和M对肝星状细胞活力的影响比较图；图8为青葙苷K、L和M对肝星状细胞I型胶原的影响比较图；图9为青葙苷K、L和M对肝星状细胞TGFβ1蛋白水平的影响比较图。具体实施方式以下将结合具体实施例对本专利技术作进一步的详细说明。应理解的是，本专利技术不应被解释为限制至所述具体实施例或受到所述具体实施例的限制。1、提取物的制备<本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种青葙苷K，具有式(1)所示的化学结构：

【技术特征摘要】
1.一种青葙苷K，具有式(1)所示的化学结构：
2.一种青葙苷L，具有式(2)所示的化学结构：
3.一种青葙苷M，具有式(3)所示的化学结构:
4.如权利要求1至3任一权利要求所述的一种化合物，其特征在于其是
从苋科植物鸡冠花子CelosiacristataL.提取得到。
5.一种制备青葙苷K、青葙苷L和青葙苷M的方法，所述方法包括：
回流提取鸡冠花种子粗粉，减压浓缩得到总浸膏，总浸膏用水分散后，采用
有机溶剂萃取得到萃取物，萃取物经分离得到所述青葙苷K、所述青葙苷L
和所述青葙苷M。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：鸡冠花子5kg粉碎后，用5
倍量60％乙醇加热回流提取3次，每次2h，过滤，提取液减压浓缩至浸膏，
用适量水分散后依次以等体积石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分别萃取4次，减
压回收得各相萃取浸膏分别为62g、8g和40g；
正丁醇相浸膏40g经MCI微孔树脂柱以乙醇-水(0:100-100:0)梯度洗
脱，分别收集20:80，40:60，60:40和80:20四个部分的洗脱液；取第3部分<...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙振亮，
申请(专利权)人：上海市奉贤区中心医院，
类型：发明
国别省市：上海;31