一种甾体皂苷化合物及其制备方法和用途技术

本发明专利技术提供一种甾体皂苷化合物，该甾体皂苷化合物具有式(I)所示的结构。本发明专利技术所述的甾体皂苷化合物对人类肿瘤细胞包括H460人类肺癌细胞，AGS人类胃癌细胞，MNA-MB-468人类乳腺癌细胞，Hela人类子宫颈癌细胞等均具有不同程度的抑制作用，可应用于防治肿瘤疾病。临床可单独使用或制成其他临床可用的不同剂型的药物，剂型包括散剂、注射剂、胶囊剂、丸剂、微胶囊、片剂、膜剂、软胶囊剂、膏剂、栓剂、气雾剂、酊剂、口服液、颗粒剂。

【技术实现步骤摘要】
一种甾体皂苷化合物及其制备方法和用途
本专利技术涉及天然产物化学领域，具体地说，涉及一种新的C21甾体化合物的分离制备方法，以及单体化合物或者含有它们的药物组合物作为抗肿瘤药物的用途。
技术介绍
傣百解为萝摩科南山藤属植物苦绳DregeasinensisHemsl.的干燥根。全年可采，除去杂质，切片，晒干，生于海拔500-3000m的山地疏林中或灌木丛中。在我国西双版纳、德宏、西盟、孟连、新平、元江等地，以及老挝、缅甸等国家的傣族居住区使用极其广泛。傣百解以根入药，性凉、味苦，入火、土、风塔，具有清火解毒、消肿止痛之功效，药用于治疗风湿痹痛，咳嗽痰喘，跌打骨折，痈疮疖肿、乳汁不通等症。随着傣药研究的深入，已经有很多的科研工作者研究傣百解的化合物成分和药物机理研究。目前已有多位科研工作者对其含有的化学成分进行了研究，对于傣百解提取分离的研究已经比较成熟，已经分离提取出多种的化合物，如，甾体皂苷类，苯丙素类，糖类等活性成分。从傣百解中分离的得到的甾体皂苷类化合物主要是C21甾体类，C21甾体衍生物是植物中一类重要的生物活性物质。
技术实现思路
本专利技术首次从傣百解(苦绳根茎)中分离、纯化、鉴定出一种具有抗肿瘤的生物活性和药理作用的新型C21甾体化合物。本专利技术的第一个目的是提供一种甾体皂苷化合物。本专利技术的第二个目的是提供上述甾体皂苷化合物的制备方法。本专利技术的第三个目的是提供上述甾体皂苷化合物的用途，所述用途为在制备用于治疗肿瘤细胞疾病的药物中的应用。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种甾体皂苷化合物，具有式(I)所示的结构：其中R1为R2为其中，所述化合物(I)提取自傣百解。所述提取方法包括如下步骤：(1)傣百解用70％-100％乙醇加热回流提取，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取，收集乙酸乙酯萃取部分；乙醇优选为95％乙醇(体积比)；(2)乙酸乙酯萃取部分溶于氯仿中，过160-200目的硅胶柱色谱，采用氯仿-甲醇系统以体积比100:1、50:1、15:1、7:1、4:1、纯甲醇系统梯度洗脱，收集7:1的洗脱部分；(3)7:1的洗脱部分溶于氯仿中，过200-300目的硅胶柱色谱，采用氯仿-甲醇系统以体积比60:1等度洗脱；待有样品洗脱下来，每个馏分收集20ml，并依次将其命名为1#，2#，3#，4#......并将含有相似组分的馏分旋转蒸发，得到待分离的洗脱馏分2-6#合并液；(4)将待分离的洗脱馏分2-6#合并液溶于氯仿中，过200-300目的硅胶柱色谱，采用石油醚-乙酸乙酯系统以体积比2:1等度洗脱；待有样品洗脱下来，每个馏分收集20ml，并依次将其命名为1#，2#，3#，4#……并将含有相似组分的馏分旋转蒸发，得到待分离的洗脱馏分8-15#合并液；(5)将待分离的洗脱馏分8-15#合并液溶于甲醇中，过ODS反相色谱柱，采用78％甲醇系统等度洗脱；待有样品洗脱下来，每个馏分收集10ml，并依次将其命名为1#，2#，3#，4#……并将含有相似组分的馏分旋转蒸发，得到待分离的洗脱馏分11-32#合并液；(6)将待分离的洗脱馏分11-32#合并液溶于甲醇中，采用反相C18柱经行73％甲醇的等度洗脱，紫外检测器的检测波长为230-280nm，收集141-146min出现的化合物吸收峰；此馏分即为本专利技术所述甾体皂苷化合物。其中所述步骤(1)具体可以为：取傣百解15kg，粉碎成粗粉,用9倍量95％乙醇加热回流提取3次，每次1h，过滤，合并滤液，减压浓缩除去乙醇，搅拌加水稀释至40L，静置过夜，过滤；所得沉淀干燥、粉碎后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取；收集萃取液，旋转蒸发，得到乙酸乙酯萃取部分。所述步骤(2)-(6)中萃取部分或洗脱馏分溶于溶剂的浓度为30-80mg/ml；优选为50mg/ml。所述步骤(2)中梯度洗脱的方法如下：1-2个柱体积采用氯仿-甲醇100:1洗脱；3-4个柱体积采用氯仿-甲醇50:1洗脱；5-6个柱体积采用氯仿-甲醇15:1洗脱；7-8个柱体积采用氯仿-甲醇7:1洗脱；8-9个柱体积采用氯仿-甲醇4:1洗脱；最后纯甲醇冲洗残余样品。上述提取方法得到的化合物，经核磁解析图谱验证其结构如式(I)所示。本专利技术提取得到的化合物，经抗肿瘤活性实验、体外、体内抑瘤实验检测后，证明其对人类肿瘤细胞包括H460人类肺癌细胞，AGS人类胃癌细胞，MNA-MB-468人类乳腺癌细胞，Hela人类子宫颈癌细胞等均具有不同程度的抑制作用，故而可作为防治肿瘤疾病的药物应用。药物中可以直接含有所述甾体皂苷化合物、或其溶剂化物、立体异构体、互变异构体及前药。可单独使用或制成其他临床可用的不同剂型的药物，剂型包括散剂、注射剂、胶囊剂、丸剂、微胶囊、片剂、膜剂、软胶囊剂、膏剂、栓剂、气雾剂、酊剂、口服液、颗粒剂。可按照药物制剂学添加医学上可接受的药用辅料，包括填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、pH调节剂或润滑剂等。附图说明图1为本专利技术所述化合物(I)的1H-NMR图谱；图2为本专利技术所述化合物(I)的13C-NMR图谱；图3为本专利技术所述化合物(I)的HMBC图谱；图4为本专利技术所述化合物(I)的HSQC图谱；图5为本专利技术所述化合物(I)的COSY图谱；图6为本专利技术所述化合物(I)的NOESY图谱；图7为本专利技术所述化合物(I)的ESI-MS谱图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术做进一步描述。除非特别说明，本专利技术中所有百分比均为体积百分比。实施例1化合物(I)的制备方法及结构鉴定(1)取傣百解15kg，粉碎成粗粉，用9倍量95％乙醇加热回流提取3次，每次1h，过滤，合并滤液，减压浓缩除去乙醇，搅拌加水稀释至40L，静置过夜，过滤。所得沉淀干燥、粉碎后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取。收集萃取液，旋转蒸发，得到乙酸乙酯萃取部分。(2)将乙酸乙酯萃取部分溶于氯仿中使其浓度达到20-50mg/ml，过160-200目的硅胶柱色谱，采用氯仿-甲醇系统以100：1(v/v)、50:1(v/v)、15:1(v/v)、7:1(v/v)、4:1(v/v)、纯甲醇系统梯度洗脱。收集洗脱液，旋转蒸发，得到7:1的洗脱部分。(3)将7:1的洗脱部分溶于氯仿中使其浓度达到50mg/ml，过200-300目的硅胶柱色谱，采用氯仿-甲醇系统以60:1(v/v)等度洗脱。每个馏分收集20ml，旋转蒸发，得到待分离的洗脱馏分2-6#。(4)将待分离的洗脱馏分2-6#溶于氯仿中使其浓度达到50mg/ml，过200-300目的硅胶柱色谱，采用石油醚-乙酸乙酯系统以2:1(v/v)等度洗脱。每个馏分收集20ml，旋转蒸发，得到待分离的洗脱馏分8-15#。(5)将待分离的洗脱馏分8-15#溶于甲醇中使其浓度达到50mg/ml，过ODS反相色谱柱，采用78％甲醇系统。每个馏分收集10ml，旋转蒸发，得到待分离的洗脱馏分11-32#。(6)将待分离的洗脱馏分11-32#溶于甲醇中使其浓度达到50mg/ml，采用反相C18柱经行73％甲醇的等度洗脱，紫外检测器的检测波长为230-280nm，收集141-146min出现的化合物吸收峰。馏分即为本专利技术的化合物(I)。其中步骤(2)的梯度洗脱的方法如下：1-2个柱体积采用氯仿-甲醇100:1洗脱；3-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甾体皂苷化合物，其特征在于：所述甾体皂苷化合物具有式(I)所示的结构：其中R1为R2为

【技术特征摘要】
1.一种甾体皂苷化合物，其特征在于：所述甾体皂苷化合物具有式(I)所示的结构：其中R1为R2为2.制备权利要求1所述化合物的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：(1)傣百解用70％-100％乙醇加热回流提取，再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水萃取，收集乙酸乙酯萃取部分；(2)乙酸乙酯萃取部分溶于氯仿中，过160-200目的硅胶柱色谱，采用氯仿-甲醇系统以体积比100:1、50:1、15:1、7:1、4:1、纯甲醇系统梯度洗脱，收集7:1的洗脱部分；(3)7:1的洗脱部分溶于氯仿中，过200-300目的硅胶柱色谱，采用氯仿-甲醇系统以体积比60:1等度洗脱；待有样品洗脱下来，每个馏分收集20ml，并依次将其命名为1#，2#，3#，4#……并将含有相似组分的馏分旋转蒸发，得到待分离的洗脱馏分2-6#合并液；(4)将待分离的洗脱馏分2-6#合并液溶于氯仿中，过200-300目的硅胶柱色谱，采用石油醚-乙酸乙酯系统以体积比2:1等度洗脱；待有样品洗脱下来，每个馏分收集20ml，并依次将其命名为1#，2#，3#，4#……并将含有相似组分的馏分旋转蒸发，得到待分离的洗脱馏分8-15#合并液；(5)将待分离的洗脱馏分8-15#合并液溶于甲醇中，过ODS反相色谱柱，采用78％甲醇系统等度洗脱；待有样品洗脱下来，每个馏分收集10ml，并依次将其命名为1#，2#，3#，4#……并将含有相似组分的馏分旋转蒸发，得到待分离的洗脱馏分11-32#合并液；(6)将待分离的洗脱馏分11-32#合并液溶于甲醇中，采用反相C18柱经行73％甲醇的等...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕芳，刘秀洁，邓玉林，戴荣继，贾少华，孟薇薇，陈艳，
申请(专利权)人：北京理工大学，
类型：发明
国别省市：北京;11