本发明专利技术公开了一种从吉祥草中分离制备的甾体皂苷RCE-4在制备预防或治疗肿瘤的药物中的用途。本发明专利技术所分离得到的RCE-4对正常细胞具有较弱的细胞毒性，而对人肝癌细胞H22和HepG2具有较强的细胞毒性；对H22荷腹水瘤和实体瘤小鼠均具有显著的抗肿瘤作用，而且对液血液常规指标、血液生化指标和组织形态学均没有显著性的副作用；与当前的临床上使用的抗癌药相比，具有效果相当，但毒副作用小的优势。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药
，具体涉及一种具有抗肿瘤活性化合物留体皂苷RCE-4 在制备预防或治疗肿瘤的药物中的用途。
技术介绍
吉祥草（Reineckia carnea (Andr. ) Kunth.)为百合科铃兰族吉祥草属单种属多年 生常绿草本植物，又名观音草、松寿兰、小叶万年青、竹根七、蛇尾七等。其性味甘平，具有 润肺止咳、理血、解毒、补肾接骨、祛风除湿的功效，主要用于肺结核、咳嗽咯血、慢性支气管 炎、哮喘，风湿性关节炎，外用治跌打损伤、骨折等疾病的治疗，被土家、苗家民间看着是"神 圣的草"。据分析其主要化学成分包括：留体皂苷类、黄酮类、三萜类、脂肪酸类、生物碱、神 经酰胺、环醇、烷烃及Ca、Fe、Cu、Zn、Mn、Mg、Na、K等金属元素。是一种很具有开发价值的 少数民族的草药资源。 当前恶性肿瘤成为了严重威胁人口健康的重大疾病。当前全球每年恶性肿瘤死亡 人数约为700万人，到2030年每年因癌症死亡的人数将可能达到1700万。据世界卫生组织 统计，目前全球平均每8个死亡病例中就有1人死于癌症，这比艾滋病、结核病和疟疾导致 的死亡人数总和还要高。而且，每年全球还有超过1200万人被确诊患上癌症。其中中国癌 症死亡人数占全球24%，且成低龄化趋势。手术、放疗和化疗仍然是临床上肿瘤治疗的主要 手段，其中化疗为其重要手段之一，然后其高额的费用和严重的毒副作用，成为了限制其临 床应用的瓶颈。近年来，来源于少数民族的许多草药，由于其抗肿瘤疗效确切、毒副作用小、 在民间临床用药历史悠久等多方面综合优势，而成为了治疗肿瘤活性先导化合物的宝库。【专利技术内容】 本专利技术专利技术人经过广泛深入的研究，从土家、苗家民间草药吉祥草中分离 制备得到的甾体皂苷成分：（1 β，3 β，5 β，25S)-螺甾烷-1，3-二醇1-，即 25 (S) -5 β -spirostan-l β，3 β -dioll-〇- a -L-rhamn opyranosyl-(I - 2) - β -D-xylopyranoside (RCE-4)，并且经研究发现该成分对Η22 和 HepG2 肝癌细胞及对荷H22瘤昆明小鼠均具有较好的抗肿瘤作用，通过与治疗肝癌的阳性药卡培 他滨比较，与其抗肿瘤效果类似，但未见有明显的毒副作用。目前还未见有此化合物的制备 分离及治疗肝癌相关的报道。 本专利技术的一个目的是提供一种从吉祥草中制备分离留体皂苷RCE-4方法。本专利技术 方法包括吉祥草样品的提取及RCE-4的分离和纯化。 本专利技术具体地是通过以下技术方案实现的： 本专利技术提供了一种分离制备留体皂苷RCE-4的方法，包括下面步骤： a)用溶剂提取吉祥草，过滤，浓缩； b)将a)步得到的浓缩产物用水溶解，用乙酸乙酯萃取一段时间，优选超声萃取 1~4小时； c)将b)步萃取得到的乙酸乙酯萃取物浓缩，用氯仿-甲醇梯度洗脱分离，收集馏 分1-16,将所得的其中馏分15经凝胶色谱分离纯化。 甾体皂苷RCE-4为针状晶体，呈白色。化学名称为：（10，3|3,5|3,253)-螺甾 烷-1，3-二醇l-，是一种螺旋留烷醇皂苷，分 子式为C38H62012。溶解之后为无色透明液体。其分子结构如下式所示： 甾体皂苷RCE-4分子结构 在本专利技术一种具体的实施方案中，用常用溶剂提取吉祥草的根茎。吉祥草优选 为洁净、干燥的粉碎形式；提取溶剂可以为水、乙醇或其混合物，优选60~95%乙醇，例如 75%乙醇；采用回流提取方式，优选在40~70°C例如65°C条件下常压回流提取；或者过滤 采用中药提取领域常用的过滤方法，浓缩可以在40~70°C条件下，通过旋转蒸发进行浓 缩。 本专利技术专利技术人发现，将提取得到的浓缩物用水溶解后，只有用乙酸乙酯萃取一段 时间，最后才能得到目标产物；采用其他溶剂例如石油醚或丁醇萃取将得不到该产物。超声 萃取可以缩短萃取时间，例如1~4小时。 将上述萃取得到的乙酸乙酯萃取物浓缩和分离才能得到目标产物。本专利技术采用氯 仿-甲醇梯度洗脱分离，收集馏分1-16,将所得的其中馏分15经凝胶色谱分离纯化后得到 目标产物。这里，浓缩可以采用本领域常用的浓缩方法，例如旋转蒸发。梯度洗脱优选恒梯 度，不仅操作简便，而且简单快速、高效地分离目标产物。 本专利技术专利技术人发现，只有第15个馏分才能分离得到目标产物。吉祥草中的化学成 分通过各种柱色谱色谱分离后得到的皂苷成分中仍然含有一些色素成分；采用凝胶色谱法 除色素比大孔树脂吸附法和活性炭吸附法更有效。 按照本专利技术一种具体的实施方案，其中步骤c)的分离条件为下面一种或多种： 1)将上述得到的乙酸乙酯萃取物进行层析分离； m)氯仿-甲醇洗脱梯度为恒梯度15:1 ;和 η)凝胶为葡聚糖凝胶，优选羟丙基葡聚糖凝胶。 按照本专利技术一种具体的实施方案，其中步骤c)中所述的色谱分离纯化后还包括 一重结晶步骤，纯化得到更纯的无色针状结晶。 按照本专利技术一种具体的实施方案，其中步骤b)中用乙酸乙酯萃取之前用石油醚 萃取，残余物再用乙酸乙酯萃取。这样可以提高最终产物留体皂苷RCE-4的产率。 按照本专利技术一种具体的实施方案，其中步骤a)中所述的溶剂为95%乙醇。 按照本专利技术一种具体的实施方案，其中步骤a)中还包括回收乙醇的步骤；优选 地，过滤提取液后，在大约55°C条件下，回收乙醇。 按照本专利技术一种更具体的实施方案， 原料预处理：将吉祥草根茎洗净晒干，于40~60°C恒温鼓风箱中干燥至恒重； 吉祥草化学成分的提取：①回流提取：样品切成小片，以60~95%乙醇为溶剂，在 40~70°C条件下常压回流提取，提取液过滤后，在40~70°C条件下，用旋转蒸发仪浓缩； ②萃取：将浓缩所得的浸膏，用蒸馏水溶解，用乙酸乙酯超声萃取1~4小时； 吉祥草中RCE-4的分离纯化：将萃取得到乙酸乙酯浸膏用氯仿-甲醇梯度洗脱，收 集流分，将所得的其中一流份15经Sephadex LH-20洗脱，即得。 本专利技术分离制备得到的RCE-4在H22和!fepG2人肝癌细胞上和荷H 22瘤昆明小鼠上 进行实验，表明其具有抗肝癌的治疗作用。 本专利技术还从细胞和动物水平上也证明了 RCE-4具有很好的治疗肝癌的作用。 本专利技术的另一个目的是提供所述的留体皂苷RCE-4或含有它的药物组合物在制 备预防或治疗肿瘤的药物中的用途。 按照本专利技术一种具体的实施方案，其中所述肿瘤为食道癌、胃癌、结肠癌、肝癌、乳 腺癌、肺癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、子宫颈癌、阴茎癌、膀胱癌、胰腺癌、白血病、淋巴瘤、脑 肿瘤、卵巢癌或子宫癌。 按照本专利技术一种具体的实施方案，其中所述肿瘤为肝癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、 子宫颈癌。 按照本专利技术一种具体的实施方案，其中所述肿瘤为肝癌。 按照本专利技术一种具体的实施方案，其中所述药物包含自噬抑制剂（优选6-氨 基-3-甲基嘌呤3-MA);任选地还含有其他抗癌药物活性成分和/或载体、稀释剂或赋形 剂。 按照本专利技术一种具体的实施方案，其中所述药物中RCE-4浓度在2~4 μΜ之间， 优选4 μΜ。 本专利技术的有益效果 本专利技术提供了一种从土家、苗家族民间草药一吉祥草中分离制备RCE-4的方法， 研究显示RCE-4对正常细胞如猴肾细胞、犬肾细胞的细胞毒性较小，但是对人肝癌细胞（H 22 和!fe本文档来自技高网...
【技术保护点】
甾体皂苷RCE‑4在制备预防或治疗肿瘤的药物中的用途。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：贺海波，邹坤，杨小姣，刘呈雄，白彩虹，王倩，汪鋆植，郭志勇，薛艳红，杨进，
申请(专利权)人：三峡大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。