本发明专利技术公开了一种酶法制备甾体消炎药中间体醋酸四烯物的方法，该方法以化合物Ⅱ为反应底物，使其在甾体1,2脱氢酶的作用下，在温度为15~30℃、pH为6.0~8.0的缓冲溶液中，反应生成甾体消炎药中间体Ⅰ。该方法解决了现有技术中无酶法制备甾体消炎药中间的问题，与传统方法相比，该方法的底物浓度高、酶用量低，制备步骤简单、对环境友好且生产成本低，适合规模化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及生物制药和生物化工
，尤其设及一种酶法制备酱体消炎药中 间体醋酸四締物的方法。
技术介绍
醋酸四締物(化合物I，又名teraene，3TR)，其结构式为醋酸四 締物作为中间体可W制备得到多种具有良好消炎作用的酱体化合物，如曲安奈德 (Triamcinolone Acetonide)、泼尼松龙（商品名Donison)和地塞米松(Dexamethasone)等， 运些药物在临床中有广泛和大量的应用（Bioorganic &Medicinal Qiemishy 21(2013) 2241-2249'Steroids 78(2013)1281-1287等）。 专利CN 201210038066、200910070841 和文献Steroids 78(2013)1281-1287中公 开了数种制备化合物I的化学方法，通常需要多步反应来进行制备，且在反应过程中需使用 大量有机溶剂和金属催化剂，而文献Steroids 68(2003)415-421公开了发酵法制备化合物 I类似物的方法，但是反应底物浓度低(5g/L)，产物分离复杂(细胞量为底物的4倍，难W转 化完全）。综上所述，目前尚无高效生产化合物I的生物方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种酶法制备酱体消炎药中间体醋酸四締物的方法，通过此 方法克服了现有技术中采用化学方法制备酱体消炎药中间体过程中存在的步骤复杂、使用 大量的有机溶剂与金属催化剂所带来的环境不友好问题；同时克服了采用发酵法制备过程 中，反应底物浓度低、产物分离复杂的问题。 为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案是:一种酶法制备酱体消炎药中间体醋 酸四締物的方法，W化合物Π 为反应底物，使其在酱体1，2脱氨酶的作用下，在溫度为15~ 30心抑为6.0~8.0的缓冲溶液中，反应生成酱体消炎药中间体I， 所述的化合物Π 的结构式为：[000引所述的酱体消炎药中间体I的结构式为：优选地，所述缓冲溶液的抑为7.0~8.0。 优选地，在溫度20~30°C条件下进行所述反应。 进一步优选地，在溫度25~30°C条件下进行所述反应。 优选地，所述的酱体1，2脱氨酶为购自苏州汉酶生物技术有限公司的牌号为 EW1145的酱体1，2脱氨酶。 进一步优选地，所述的酱体1，2脱氨酶的投料质量为所述化合物Π 投料质量的 0.1%~100%。 更进一步优选地，所述的酱体1，2脱氨酶的投料质量为所述化合物Π 投料质量的 1% ~10%。 优选地，所述的缓冲溶液为憐酸盐缓冲溶液。 进一步优选地，具体实施过程如下:将所述的化合物Π 与酱体1，2脱氨酶加入到所 述的缓冲溶液中，控制反应溫度在15~30°C间，震荡反应，利用HPLC检测反应进程，反应结 束后，对反应体系进行离屯、操作，弃上清液，沉淀洗涂、过滤、旋蒸获得化合物I。 由于上述技术方案的运用，本专利技术与现有技术相比具有下列优点： 1)解决了采用化学法制备醋酸四締物过程中，步骤多，且在制备过程中使用大量 的有机溶剂与金属催化剂，对环境不友好的问题； 2)解决了采用发酵法制备醋酸四締物过程中，反应底物浓度低、产物分离复杂的 问题； 3)本专利技术解决了现有技术中无酶法制备醋酸四締物的问题，且本专利技术的制备步骤 简单、对环境友好、底物浓度高、酶用量少且生产成本低。【具体实施方式】 下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细的说明，但本专利技术并不限于W下实施 例。实施例中采用的实施条件可W根据具体使用的不同要求做进一步调整，未注明的实施 条件为常规实验中的条件。 实施例1酱体1，2脱氨酶的筛选 将lOmg化合物Π 加入到2mL pH7.0的憐酸盐缓冲溶液中，而后分别加入购自苏州 汉酶生物技术有限公司生产的不同牌号的酱体1，2脱氨酶lOmg，于30°C震荡化，检测底物的 转化率如表1。 表 1从表1中可看出，在其他条件相同的情况下，采用牌号为EW1145的酱体1，2脱氨酶' 作为酱体1，2脱氨酶时，底物转化率最高。[002引实施例2不同溫度条件下的底物转化率情况 将lOmg化合物Π 加入到2mL PH7.0的憐酸盐缓冲溶液中，加入酱体1，2脱氨酶(购 自苏州汉酶生物技术有限公司，牌号为EW 1145,下同）lmg，于不同溫度条件下，震荡反应 12h，检测底物的转化率如表2。 表 2 ~从表2中可W看出，在其他条件相同的情况下，反应溫度控制在30°C时，化合物Π 的转化率最高。 实施例3不同pH条件下的底物转化率情况 将lOmg化合物Π 加入至lj2mL不同抑的憐酸盐缓冲溶液中，加入酱体1，2脱氨酶Img， 于30°C震荡反应12h，检测底物的转化率如表3。 表 3 ~从表3中可W看出，在其他条件相同的情况下，在pH为7.0的缓冲溶液中进行上述' 反应，底物的转化率最高。 实施例4放大反应 将20g化合物Π 加入到500mL pH7.0的憐酸盐缓冲溶液中，加入酱体1，2脱氨酶Ig， 于30°C震荡12h，检测转化率为100 %。而后对产物进行lOOOOg离屯、lOmin，弃上清，加入50mL Ξ氯甲烧洗涂沉淀，过滤、旋蒸得到产物醋酸四締物19.8g，其纯度为98%，含量为99%。 在运里，转化率的分析方法具体如下:采用HPLC(岛津LC-2010)装备有C18色谱柱 (4.6*50mm，5皿），流动相：0-5min，40 %乙腊，50 %浓度为0.1 %甲酸水溶液，流速0.3mL/ min，检测波长254nm，柱溫30°C，出峰时间为:底物3.2min，产物3.8min。 上述实施例只为说明本专利技术的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人 ±能够了解本专利技术的内容并加 W实施，并不能W此限制本专利技术的保护范围，凡根据本专利技术 精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本专利技术的保护范围内。【主权项】1. 一种酶法制备酱体消炎药中间体醋酸四締物的方法，其特征在于，W化合物π为反 应底物，使其在酱体1，2脱氨酶的作用下，在溫度为15~30°C、ρΗ为6.0~8.0的缓冲溶液中， 反应生成酱体消炎药中间体I， 所述的化合物Π 的结构式为：所述的酱体消炎药中间体I的结构式为：2. 根据权利要求1所述的酶法制备酱体消炎药中间体醋酸四締物的方法，其特征在于： 所述缓冲溶液的pH为7.0~8.0。3. 根据权利要求1所述的酶法制备酱体消炎药中间体醋酸四締物的方法，其特征在于： 在溫度20~30°C条件下进行所述反应。4. 根据权利要求3所述的酶法制备酱体消炎药中间体醋酸四締物的方法，其特征在于： 在溫度25~30°C条件下进行所述反应。5. 根据权利要求1所述的酶法制备酱体消炎药中间体醋酸四締物的方法，其特征在于： 所述的酱体1，2脱氨酶为购自苏州汉酶生物技术有限公司的牌号为EW1145的酱体1，2脱氨 酶。6. 根据权利要求1或5所述的酶法制备酱体消炎药中间体醋酸四締物的方法，其特征在 于:所述的酱体1，2脱氨酶的投料质量为所述化合物Π 投料质量的0.1 %~100%。7. 根据权利要求6所述的酶法制备酱体消炎药中间体醋酸四締物的方法，其特征在于： 所述的酱体1，2脱氨酶的投料质量为所述化合物Π 投料质量的1 %~10%。8. 根据权利要求1所述的酶法制备酱本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种酶法制备甾体消炎药中间体醋酸四烯物的方法，其特征在于，以化合物Ⅱ为反应底物，使其在甾体1,2脱氢酶的作用下，在温度为15～30℃、pH为6.0～8.0的缓冲溶液中，反应生成甾体消炎药中间体Ⅰ，所述的化合物Ⅱ的结构式为：所述的甾体消炎药中间体Ⅰ的结构式为：
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陶军华，梁晓亮，杨锴，
申请(专利权)人：苏州汉酶生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。