磁性复合载体固定化磷脂酶A2用于甾醇制备甾醇酯的方法技术

本发明专利技术涉及磁性复合载体固定化磷脂酶A2用于甾醇制备甾醇酯的方法。磁性复合载体进行磷脂酶A2的固定化，赋予了固定化酶较强的磁响应性，从而可借助外部磁场从反应体系中快速简便回收固定化酶，提高酶的使用效率。另外，还可以有效改善酶的稳定性。本发明专利技术的关键是磁性复合载体固定化磷脂酶A2在甾醇制备甾醇酯的过程中其条件的确定，磁性复合载体固定化磷脂酶A2的添加量为0.7g、植物甾醇为1.5g、水为0.007g、反应温度为75℃、时间为4.5h。按照最佳工艺参数试验，得到甾醇酯13.5g，磁性复合载体固定化磷脂酶回收率很高,重复使用10次后酶活力仍保留很高，证明了磁性复合载体固定化磷脂酶A2用于甾醇酯的制备中是很有实用价值的。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及磁性复合载体固定化磷脂酶A2用于甾醇制备甾醇酯的方法。
技术介绍
 植物甾醇是广泛存在于生物体组织内的一类重要的天然有机化合物，性激素、肾上腺皮质激素、甾醇、胆汁酸、强心苷、甾体皂苷、甾体生物碱等均属于此类。植物油是植物甾醇含量较为丰富的食品之一，其中玉米油中的植物甾醇含量较高。性状为白色粉末，也可有酯状溶于油脂。具有防止冠心动脉粥样硬化、促进胆固醇的降解代谢等药用和保健价值；合成维生素D3等甾类药物重要中间体；生发、养发和皮肤营养剂；化纺工业中的分散剂、柔软剂、抗氧剂等。植物甾醇是植物中的一种活性成分,在结构上与动物性甾醇如胆甾醇相似，广泛存在于各种植物油、坚果和植物种子中。它是油脂中不皂化物的主要成分。现已提出的用游离酶法水解脱除非水化磷脂，但在实际生产中发现磷脂酶对反应环境敏感，易变性失活，反应条件不易控制。从现有的信息看，将磷脂酶进行固定化，可提高它的稳定性和利用效率。目前对磁性复合载体固定化酶的研究很受关注，但用于制取甾醇酯中还未发现相应报道。磁性复合载体固定化酶具有较强的磁场响应性，从而可以借助外部磁场从反应体系中快速简便地富集、分离、回收固定化酶，随时控制酶催化反应，提高酶的使用效率。另外，它还可有效地提高酶的活力，改善酶的稳定性。
技术实现思路
本专利技术是磁性复合载体固定化磷脂酶A2用于制取甾醇酯的方法。取一定量的卵磷脂和相应的豆甾醇，加入适量的水，再加入脂质酰基转移酶，使反应在一定植物甾醇、反应温度、反应时间、水的添加量及酶的添加量的条件下反应一段时间后，测定生成甾醇酯的含量。本专利技术的有益点：磁性复合载体进行磷脂酶A2的固定化，赋予了固定化酶较强的磁响应性，从而可借助外部磁场从反应体系中快速简便回收固定化酶，提高固定化酶的使用效率。另外，还可以改善酶的稳定性。磁性复合载体固定化磷脂酶更易回收，回收率很高，从而，提高了酶的重复利用性，降低了生产成本。本专利技术的步骤如下：步骤一：取一定量的卵磷脂和相应的豆甾醇，加入适量的水，再加入脂质酰基转移酶，使反应在温度为60~90℃，一定植物甾醇、反应时间、水的添加量及酶的添加量的条件下反应一段时间后，测定生成甾醇酯的含量；步骤二：选择植物甾醇添加量为0.5~2.5g，过程同步骤一，确定反应中植物甾醇的添加量；步骤三：选择磁性复合载体固定化磷脂酶A2的添加量为0.5~1.0g，过程同步骤一，确定磁性复合载体固定化磷脂酶A2的添加量；步骤四：选择水的添加量分别为磁性复合载体磷脂酶A2添加量的0~2%，过程同步骤一，确定反应搅拌中水的添加量；步骤五：选择反应时间分别为1~8h，过程同步骤一，确定反应时间。本专利技术的关键是磁性复合载体固定化磷脂酶A2在甾醇制备甾醇酯的过程中其条件的确定，包括磁性复合载体固定化磷脂酶A2的添加量、植物甾醇、水、反应温度、和时间。按照最佳工艺参数试验，得到甾醇酯，磁性复合载体固定化磷脂酶回收率很高；重复使用后酶活力仍保留很高，证明了磁性复合载体固定化磷脂酶A2用于甾醇酯的制备中是很有实用价值的。具体实施方式：具体实施方式一：本专利技术的目的是固定化磷脂酶A2用于甾醇制取甾醇酯的一种方法。本实施方式的步骤如下：步骤一：取一定量的卵磷脂和相应的豆甾醇，加入适量的水，再加入脂质酰基转移酶，使反应在温度为60~90℃，一定植物甾醇、反应时间、水的添加量及酶的添加量的条件下反应一段时间后，测定生成甾醇酯的含量；步骤二：选择植物甾醇添加量为0.5~2.5g，过程同步骤一，确定反应中植物甾醇的添加量；步骤三：选择磁性复合载体固定化磷脂酶A2的添加量为0.5~1.0g，过程同步骤一，确定磁性复合载体固定化磷脂酶A2的添加量；步骤四：选择水的添加量分别为磁性复合载体磷脂酶A2添加量的0~2%，过程同步骤一，确定反应过程中水的添加量；步骤五：选择反应时间分别为1~8h，过程同步骤一，确定反应时间。具体实施方法二：本实施方法与具体实施方法一不同点在于步骤一中将反应温度控制在65~85℃，其它组成和步骤与具体实施方法一相同。具体实施方法三：本实施方法与具体实施方法一不同点在于步骤二中选择植物甾醇添加量为0.8~2.0g，其它组成和步骤与具体实施方法一相同。    具体实施方法四：本实施方法与具体实施方法一不同点在于步骤三中选择磁性复合载体固定化磷脂酶A2的添加量为0.6~0.8g，其它组成和步骤与具体实施方法一相同。具体实施方法五：本实施方法与具体实施方法一不同点在于步骤四中选择水的添加量分别为磁性复合载体进行磷脂酶A2添加量的0.5~1.5%，其它组成和步骤与具体实施方法一相同。具体实施方法六：本实施方法与具体实施方法一不同点在于步骤五中选择反应时间分别为2~7h，其它组成和步骤与具体实施方法一相同。本文档来自技高网...

【技术保护点】
磁性复合载体固定化磷脂酶A2用于甾醇制备甾醇酯的方法，其特征如下：步骤一：取一定量的卵磷脂和相应的豆甾醇，加入适量的水，再加入脂质酰基转移酶，使反应在温度为60~90℃，一定植物甾醇、反应时间、水的添加量及酶的添加量的条件下反应一段时间后，测定生成甾醇酯的含量；步骤二：选择植物甾醇添加量为0.5~2.5g，过程同步骤一，确定反应中植物甾醇的添加量；步骤三：选择磁性复合载体固定化磷脂酶A2的添加量为0.5~1.0g，过程同步骤一，确定磁性复合载体固定化磷脂酶A2的添加量；步骤四：选择水的添加量分别为磁性复合载体进行磷脂酶A2添加量的0~2%，过程同步骤一，确定反应搅拌中水的添加量；步骤五：选择反应时间分别为1~8h，过程同步骤一，确定反应时间。

【技术特征摘要】
1.磁性复合载体固定化磷脂酶A2用于甾醇制备甾醇酯的方法，其特征如下：
步骤一：取一定量的卵磷脂和相应的豆甾醇，加入适量的水，再加入脂质酰基转移酶，使反应在温度为60~90℃，一定植物甾醇、反应时间、水的添加量及酶的添加量的条件下反应一段时间后，测定生成甾醇酯的含量；
步骤二：选择植物甾醇添加量为0.5~2.5g，过程同步骤一，确定反应中植物甾醇的添加量；
步骤三：选择磁性复合载体固定化磷脂酶A2的添加量为0.5~1.0g，过程同步骤一，确定磁性复合载体固定化磷脂酶A2的添加量；
步骤四：选择水的添加量分别为磁性复合载体进行磷脂酶A2添加量的0~2%，过程同步骤一，确定反应搅拌中水的添加量；
步骤五：选择反应时间分别为1~8h，过程同步骤一，确定反应时间。
2. 根据权利要求1所述的一种用固定化磷脂酶A2制备甾醇酯的方法，其特征在于步骤一中...

【专利技术属性】
技术研发人员：于殿宇，赵贵兴，葛洪如，江连洲，王立琦，齐晓芬，李相昕，李俊，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23