【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药提取，具体涉及一种基于熵权法和响应面法对治疗膝骨关节炎的中药组合物的有效成分—青藤碱、木兰花碱、芍药内酯苷、芍药苷和薯蓣皂苷进行的联合提取方法。
技术介绍
1、膝骨关节炎作为一种骨关节疾病，是引起老年人腿疼的主要原因。近年来在中老年人群中的发病率呈现增加趋势，是临床常见病之一。其临床症状有膝部酸痛、膝关节肿胀弹响、膝关节处僵硬发冷等。辽宁中医药大学附属医院骨科专家以古典经方鹿角丸为基础，根据临床反馈不断调整剂量研发出的中药方剂膝痛康。该方采用鹿角、牛膝、青风藤、穿山龙、白芍五味中药材。鹿角具有温肾阳、强筋骨、行血消肿之功效，为君药。牛膝性平，味苦、甘、酸，归肝、肾二经，其功效为补肝肾、强筋骨，主治腰膝酸痛，筋骨无力。《医略六书》云：“淮牛膝壮肝肾以雄筋骨也”。青风藤性平，味苦、辛，归肝、脾二经，其功效为祛风湿、通经络，主治风湿痹痛，关节肿胀。其有效成分青藤碱主要通过抑制肿瘤抑制因子(tnf)和白细胞介素(il)的表达和合成、抑制前列腺素的合成和环氧化酶-2的活性等环节发挥作用。牛膝和青风藤可辅助鹿角治疗膝骨关节炎之膝部无力，关节肿胀，麻木等症状，为臣药。穿山龙性温，味甘、苦，归肝、肾、肺三经，有祛风除湿、舒筋通络、活血止痛之效，主治关节麻木、风湿痹病。其有效成分穿山龙总皂苷通过下调白细胞介素-1β(il-1β)和白细胞介素-6(il-6)的水平，抑制滑膜细胞的增生，清除炎性细胞，减少组织破坏和减轻滑膜细胞炎症反应。白芍性微寒，味苦、酸，归肝、脾二经，有养血敛阴之效。白芍入肝促进血的运行，从而达到活血的功效。其有
2、实验室常用于优化提取工艺的方法很多，包括单因素试验、正交试验、box-behnken响应面试验等。与其他方法相比，响应面法可以实现连续水平的优化，具有较好的预测性，数据的可视化让试验结果更加直观，可以清楚地揭示各因素之间的相互作用，广泛应用于中药的提取研究。基于此，本专利技术整合熵权法和box-behnken响应面法，在单因素实验的基础上，优化提取过程中的液料比、浸泡时间、回流时间、回流次数、乙醇浓度，以期为中药方剂中药组合物(青风藤、穿山龙、炒白芍)的生产应用提供参考。本专利技术方法具有设备简单、成本低、提取工艺稳定等特点。此外，本专利技术方法对各类中药材的提取工艺具有较好的应用价值，可为治疗膝骨关节炎的中药组合物生产应用及拓展提供理论依据。
技术实现思路
1、本专利技术旨在提供一种治疗膝骨关节炎的中药组合物的提取工艺，以解决现有技术中存在的问题。
2、为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案为：
3、一种基于熵权法和响应面法的治疗膝骨关节炎的中药组合物(青风藤、穿山龙、炒白芍)有效成分的提取方法，包括以下步骤：
4、本专利技术根据响应面原理和预实验结果，采用design-expert 13软件中的box-benhnken响应面设计方法，设计试验方案。以乙醇浓度、液料比、浸泡时间为考察因素，对中药组合物进行提取。以高效液相色谱法对中药组合物中青藤碱、木兰花碱、芍药内酯苷、芍药苷和薯蓣皂苷进行含量测定，并进行方法学考察。再通过熵权法计算青藤碱、木兰花碱、芍药内酯苷、芍药苷和薯蓣皂苷含量的综合评分作为评价指标，采用3因素3水平共17个试验点的box-behnken响应面法进行实验，并记录各指标结果；
5、计算各指标权重系数：根据17组实验测得的各指标结果，应用评价指标综合赋权对指标赋权。计算权重系数wj，j＝1，2，3，4，5，依次分别对应中药组合物中青藤碱含量w1、木兰花碱含量w2、芍药内酯苷含量w3、芍药苷含量w4、薯蓣皂苷含量w5；
6、计算综合评分h：根据求得的各指标权重系数wj，采用公式h＝(青藤碱含量/青藤碱含量max)×w1+(木兰花碱含量/木兰花碱含量max)×w2+(芍药内酯苷含量/芍药内酯苷含量max)×w3+(芍药苷含量/芍药苷含量max)×w4+(薯蓣皂苷含量/薯蓣皂苷含量max)×w5，计算综合评分h；其中，青藤碱含量max、木兰花碱含量max、芍药药内酯苷含量max、芍药苷含量max、薯蓣皂苷含量max分别表示17组实验数据中青藤碱含量、木兰花碱含量、芍药内酯苷含量、芍药苷含量及薯蓣皂苷含量的最大值；
7、模型建立与方差分析：应用design-expert 13软件对所得综合评分h结果进行多元拟合分析，得综合评分h与乙醇浓度、液料比、浸泡时间这3个自变量的多元二次回归方程模型及方差分析结果；
8、工艺预测及验证：应用design-expert 13软件对得到的回归方程模型进行分析。得到中药组合物最佳提取工艺参数及模型预测h值。对此工艺进行验证，求其实际h值，并与预测h值进行比较，证明工艺的稳定可行性。
9、具体步骤如下：
10、步骤1：青藤碱、木兰花碱、芍药内酯苷、芍药苷和薯蓣皂苷的提取
11、称取青风藤、穿山龙、炒白芍药材置于反应容器中，加入乙醇浸泡，加热回流，过滤，向残渣中再次加入乙醇，加热回流，过滤，合并两次滤液，浓缩，得提取物；
12、步骤2：青藤碱、木兰花碱、芍药内酯苷、芍药苷和薯蓣皂苷的含量测定
13、青藤碱、木兰花碱、芍药内酯苷和芍药苷的色谱条件：色谱柱是welchxb-c18色谱柱，尺寸是4.6mm×250mm，5μm；流速为1.0ml/min；柱温是20℃；检测波长为203nm；进样体积是3μl；梯度洗脱程序如下：初始流动相比例0.2％磷酸水溶液-乙腈(88:12v/v)，保持13min，在35min时流动相比例降到0.2％磷酸水溶液-乙腈(83:17v/v)；
14、薯蓣皂苷的色谱条件：色谱柱是welchxb-c18色谱柱，尺寸是4.6mm×250mm，5μm；流速为1.0ml/min；柱温是30℃；检测波长为203nm；进样体积是5μl；等度洗脱程序如下：流动相水-乙腈(45:55v/v)，保持15min；
15、对照品溶液制备：精密称定青藤碱、木兰花碱、芍药内酯苷、芍药苷和薯蓣皂苷，分别加入甲醇溶解，制得对照品储备液，精密移取对照品储备液，加入甲醇稀释得到系列质量浓度的混合对照品溶液备用；
16、供试品溶液制备：将步骤1中浓缩得到的提取物用乙醇定容至50ml，超声20min，取200μl定容后，加入乙醇稀释，涡旋，离心，过滤，即得供试品溶液。以高效液相色谱法对提取物中的青藤碱、木兰花碱、芍药内酯苷、芍药苷和薯蓣皂苷进行含量测定；
17、步骤3：方法学验证
18、专属性：将供试品本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于熵权法和响应面法的用于膝骨关节炎治疗的中药组合物有效成分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的基于熵权法和响应面法的用于膝骨关节炎治疗的中药组合物有效成分的提取方法，其特征在于，对中药组合物进行提取，具体包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的基于熵权法和响应面法的用于膝骨关节炎治疗的中药组合物有效成分的提取方法，其特征在于，以高效液相色谱法对提取物中青藤碱、木兰花碱、芍药内酯苷、芍药苷和薯蓣皂苷进行含量测定，具体包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的基于熵权法和响应面法的用于膝骨关节炎治疗的中药组合物有效成分的提取方法，其特征在于，进行方法学考察，具体包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的基于熵权法和响应面法的用于膝骨关节炎治疗的中药组合物有效成分的提取方法，其特征在于，所述的低、中、高三种浓度是指加入的对照品与供试品中各成分的含量之比为0.5:1、1:1、1.5:1。
6.根据权利要求3所述的基于熵权法和响应面法的用于膝骨关节炎治疗的中药组合物有效成分的提取方法，其特征在于，
7.根据权利要求1所述的基于熵权法和响应面法的用于膝骨关节炎治疗的中药组合物有效成分的提取方法，其特征在于，所述综合评分与乙醇浓度、液料比、浸泡时间这3个自变量的多元二次回归方程：H＝0.9581-0.0074A-0.0040B-0.0041C-0.0003AB-0.0172AC-0.0135BC-0.0256A2-0.0114B2-0.0295C2；A代表乙醇浓度、B代表液料比、C代表浸泡时间、H代表芍药苷内酯、芍药苷、木兰花碱、青藤碱和薯蓣皂苷含量的综合评分H。
8.根据权利要求1所述的基于熵权法和响应面法的用于膝骨关节炎治疗的中药组合物有效成分的提取方法，其特征在于，中药组合物最佳提取工艺为：液料比为10:1-14:1mL/g，乙醇浸泡为60-80min，乙醇浓为70％-90％。
...【技术特征摘要】
1.一种基于熵权法和响应面法的用于膝骨关节炎治疗的中药组合物有效成分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的基于熵权法和响应面法的用于膝骨关节炎治疗的中药组合物有效成分的提取方法，其特征在于，对中药组合物进行提取，具体包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的基于熵权法和响应面法的用于膝骨关节炎治疗的中药组合物有效成分的提取方法，其特征在于，以高效液相色谱法对提取物中青藤碱、木兰花碱、芍药内酯苷、芍药苷和薯蓣皂苷进行含量测定，具体包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的基于熵权法和响应面法的用于膝骨关节炎治疗的中药组合物有效成分的提取方法，其特征在于，进行方法学考察，具体包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的基于熵权法和响应面法的用于膝骨关节炎治疗的中药组合物有效成分的提取方法，其特征在于，所述的低、中、高三种浓度是指加入的对照品与供试品中各成分的含量之比为0.5:1、1:1、1.5:1。
6.根据权利...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。