使用ICOS基CARS增强抗肿瘤活性和CAR持久性制造技术

本发明专利技术提供用于治疗人中癌症的组合物和方法。本发明专利技术包括施用基因修饰的Th17细胞以表达CAR，其具有抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术提供用于治疗人中癌症的组合物和方法。本专利技术包括施用基因修饰的Th17细胞以表达CAR，其具有抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域。【专利说明】使用I COS基CARS增强抗肿瘤活性和CAR持久性 相关申请的交叉引用 本申请要求2012年2月22日提交的美国临时申请系列号61/601，910的优先权， 其内容通过引用以它们的整体并入本文。 专利技术背景 基因修饰的表达嵌合抗原受体（CAR)的T细胞的开发已经为许多新的用于癌症和 其他病症的潜在的疗法找到了出路。一般而言，CARs包括细胞外抗原识别结构域和细胞内 结构域。细胞内结构域精确的组成可为CAR和表达CAR的细胞群体提供独特的特征。 ⑶278或可诱导的-T-细胞共刺激分子（IC0S)是一般在活化的T细胞上表达的共 刺激分子。已经显示，除了⑶28,经可诱导的共刺激分子（IC0S，也称为⑶278)的信号传导 对于最佳的细胞因子分泌是必要的，因为两种分子对于通过鼠 Thl7细胞的最佳的IL-17A 分泌是必须的（Park等，2005Nat. Immunol. 6:1133 - 1141)。最近鼠模型中的发现已经揭示 IC0S通过诱导转录因子c-MAF表达和所以反式激活IL-21产生而放大Thl7反应（Bauquet 等，2009Nat. Immunol. 10:167 - 175)。尽管已经产生了包括IC0S的嵌合受体（美国专利出 版US2006/0247191)，但是不知道IC0S结构域在影响CAR介导的抗肿瘤活性，CAR介导的 Treg增殖，或T细胞持久性中起什么作用。 取决于存在的微环境线索，天然CD4+T细胞可分化成数种T辅助（TH)细胞系，包括 THl、TH2、Thl7、TH22 之一和调节 T (Treg)细胞（O' Shea 等，2010Science327:1098 - 1102; Murphy等，2010Nat. Immunol. 11:674 - 680)。加强宿主防御的Thl7细胞在粘膜免疫性中 起主要作用，增强许多自身免疫病，并且释放细胞因子，包括IL-17A和IL-17F(Korn等， 2009Annu. Rev. Immunol. 27:485 - 517)。Thl7细胞对肿瘤免疫性的贡献不同，显示对抗肿 瘤发生和原致癌性活性二者的潜能（Zou等，2010Nat. Rev. Immunol. 10:248 - 256)。所以， 识别控制Thl7应答的机制对于理解肿瘤免疫性是至关重要的。尽管最近在用于治疗癌症 的CAR基疗法中取得了进展，但是现在已经有了任何已知的使用遗传改变的Thl7细胞的疗 法。 因此，本领域非常需要使用增加遗传改变的Thl7细胞抗肿瘤活性和持久性的CAR 治疗癌症的组合物和方法。本专利技术解决了该需求。
技术实现思路
本专利技术提供编码嵌合抗原受体（CAR)的分离的核酸序列，其中CAR包括抗原结合 结构域、跨膜结构域和IC0S细胞内信号传导结构域。 在一个实施方式中，CAR的核酸序列进一步包括⑶3 ζ信号传导结构域。 在一个实施方式中，分离的CAR的核酸序列包括SEQ ID Ν0:8的核酸序列。 在一个实施方式中，抗原结合结构域是抗体或其抗原结合片段。 在一个实施方式中，抗原结合片段是Fab或scFv。 在一个实施方式中，抗原结合结构域结合肿瘤抗原。在一个实施方式中，肿瘤抗原 与血液恶性肿瘤相关。在一个实施方式中，肿瘤抗原与实体瘤相关。 在一个实施方式中，肿瘤抗原选自⑶19、⑶20、⑶22、R0R1、间皮蛋白、⑶33/IL3Ra、 c-Met、PSMA、糖脂 F77、EGFRvIII、⑶-2、NY-ES0-1TCR、MAGE A3TCR，和其任意组合。 在一个实施方式中，CAR的核酸序列进一步包括包含共刺激分子的细胞内结构域 的共刺激信号传导区，所述共刺激分子选自CD27、CD28、4-1BB、0X40、CD30、CD40、PD-1、淋 巴细胞功能相关抗原-1 (LFA-1)、⑶2、⑶7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、特异性结合⑶83的配体， 和其任意组合。 在一个实施方式中，IC0S细胞内信号传导结构域由SEQ ID N0:6的核酸序列编码。 在一个实施方式中，⑶3 ζ信号传导结构域由SEQ ID N0:7的核酸序列编码。 本专利技术也提供载体，其包括编码嵌合抗原受体（CAR)的核酸序列，其中CAR包括抗 原结合结构域、跨膜结构域和IC0S细胞内信号传导结构域。 本专利技术也提供细胞，其包括编码嵌合抗原受体（CAR)的核酸序列，其中CAR包括抗 原结合结构域、跨膜结构域和IC0S细胞内信号传导结构域。 本专利技术也提供用于哺乳动物中刺激T细胞介导的对靶细胞群体或组织的免疫应 答的方法，所述方法包括向哺乳动物施用有效量的基因修饰以表达CAR的细胞，其中CAR包 括抗原结合结构域、跨膜结构域和IC0S细胞内信号传导结构域。 本专利技术也提供哺乳动物中提供抗肿瘤免疫性的方法，所述方法包括向哺乳动物施 用有效量的基因修饰以表达CAR的细胞，其中CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和IC0S 细胞内信号传导结构域，从而在哺乳动物中提供抗肿瘤免疫性。 本专利技术也提供治疗具有与升高的肿瘤抗原表达相关的疾病、病症或状况的哺乳动 物的方法，所述方法包括向哺乳动物施用有效量的基因修饰以表达CAR的细胞，其中CAR包 括抗原结合结构域、跨膜结构域和IC0S细胞内信号传导结构域，从而治疗哺乳动物。 在一个实施方式中，细胞选自自体Thl7细胞和自体Tcl7细胞。 本专利技术也提供治疗具有癌症的人的方法，所述方法包括向人施用基因改造的表达 CAR的细胞，其中CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和IC0S细胞内信号传导结构域，其 中细胞选自Thl7细胞和Tcl7细胞。 在一个实施方式中，人抵抗至少一种化疗剂。 本专利技术也提供在诊断有癌症的人中产生基因改造的T细胞的持续性群体的方法， 所述方法包括向人施用基因改造的表达CAR的细胞，其中CAR包括抗原结合结构域、跨膜结 构域和IC0S细胞内信号传导结构域，其中基因改造的细胞的持续性群体在施用之后在人 中持续至少一个月，和其中细胞选自Thl7细胞和Tcl7细胞。 在一个实施方式中，基因改造的T细胞的持续性群体包括选自下述的至少一种细 胞：施用至人的细胞、施用至人的细胞的子代，和其组合。 在一个实施方式中，基因改造的T细胞的持续性群体包括记忆T细胞。 在一个实施方式中，基因改造的T细胞的持续性群体在施用之后在人中持续至少 三个月。 在一个实施方式中，基因改造的T细胞的持续性群体在施用之后在人中持续至少 四个月、五个月、六个月、七个月、八个月、九个月、十个月、i^一个月、十二个月、两年或三 年。 本专利技术也提供在诊断有癌症的人中扩张基因改造的T细胞群体的方法，所述方法 包括向人施用基因改造的表达CAR的细胞，其中CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和 ICOS细胞内信号传导结构域，其中施用的基因改造的细胞选自Thl7细胞和Tcl7细胞，进一 步其中施用的基因改造的细胞在人中产本文档来自技高网...

【技术保护点】
编码嵌合抗原受体(CAR)的分离的核酸序列，其中所述CAR包括抗原结合结构域、跨膜结构域和ICOS细胞内信号传导结构域。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·H·琼，S·格丹卡里奥，Y·赵，J·朔勒，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：美国;US