DNAH14基因在制备肿瘤诊治产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种与肺腺癌相关的基因的应用，所述肿瘤为肺腺癌，本发明专利技术首次发现了DNAH14的差异表达与肺腺癌发生发展相关，并通过QPCR验证了DNAH14在肺腺癌患者中显著上调，同时通过体外实验证明了沉默DNAH14基因的表达可以有效的抑制肺腺癌细胞的增殖，降低肺腺癌细胞的迁移和侵袭率，提示DNAH14基因可用于肺腺癌细胞的鉴别诊断，评估相关人群肺腺癌的患病风险，同时也提示DNAH14基因可作为药物靶点用于治疗肺腺癌及其转移。

The application of DNAH14 gene in the diagnosis and treatment of tumor

The invention discloses an application associated with lung adenocarcinoma gene, the tumor of lung adenocarcinoma, the invention first discovered the development of related differential expression in lung adenocarcinoma and DNAH14, and DNAH14 was significantly up-regulated in lung adenocarcinoma patients was verified by QPCR, at the same time through in vitro experiments and clear expression of silence the DNAH14 gene can effectively inhibit the proliferation of lung adenocarcinoma cells, reduce the migration and invasion of lung adenocarcinoma cell rate, suggesting that the DNAH14 gene can be used for differential diagnosis of lung adenocarcinoma cells, and assess the risk of lung cancer among people, but also suggest that DNAH14 gene can be used as a drug target for the treatment of lung adenocarcinoma and transfer.

【技术实现步骤摘要】
DNAH14基因在肿瘤诊治中的应用
本专利技术属于生物医药领域，涉及DNAH14基因在肿瘤诊治中的应用，具体的涉及DNAH14基因在肺腺癌诊治中的应用。
技术介绍
肺癌是呼吸系统最常见的恶性肿瘤之一，其恶性程度高，预后差。据流行病学调查分析男性肺癌的发病率较女性高，并与吸烟、地理、环境和种族等因素有关。在欧洲，北美和澳大利亚等发达国家因这几年吸烟率的下降而肺癌发病率逐年降低，而中国等一些亚洲国家和非洲等国家的肺癌发病率逐年上升。肺癌的发病与很多因素有关，研究资料表明肺癌的危险因素包括家族遗传史、免疫因素、内分泌功能失调等内在因素和吸烟、环境污染、电离辐射、职业因素等外在因素。肺癌的组织类型主要分为两大类，即小细胞肺癌(Smallcelllungcancer，SCLC)和非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer，NSCLC)，其中NSCLC占多数，约75％-80％。NSCLC又分为腺癌和鳞状细胞癌两种主要亚型。肺腺癌是我国肺癌的主要发病类型。肺腺癌起源于支气管粘膜上皮，少数起源于大支气管的粘液腺，其发病年龄较小，而且在不吸烟的女性中多见。腺癌具有高度浸润和破坏性生长的生物学特征，易侵犯血管和淋巴管壁，出现血行及淋巴转移，且恶性度较高，在临床上早期一般没有明显的症状而不易被发现，当多数患者发现时已属于晚期或已有远处转移。目前，在肺腺癌的治疗上早期多选择手术切除的治疗方法，而晚期患者多选择联合化疗、放疗、生物学治疗等综合治疗方法，但其疗效仍不佳且后期较易复发。研究表明影响患者的预后及疗效的因素很多，如年龄、肿瘤大小、肿瘤的TNM分期、组织学类型、肿瘤分化程度、脉管浸润、转移等。近年，随着对肺癌发病分子机制的深入研究，在分子靶向治疗上有了初步的效果，但还存在缺乏特异性和低灵敏性，耐药等一些问题，疗效仍然不很满意，因此，有必要寻找特异性的生物标志物分子，进行个体化靶向治疗，以便能降低肺癌的病死率，提高生存率。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的之一是提供一种与肺腺癌发生发展相关的特异性分子标志物。本专利技术的目的之二是提供一种诊断肺腺癌的产品和手段，通过检测分子标志物的表达水平来判断患者是否患有肺腺癌或者患肺腺癌的风险，具有特异性和敏感性。本专利技术的目的之三，提供一种治疗肺腺癌的药物组合物和手段，通过特异性的下调分子标志物的表达来治疗肺腺癌。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了检测DNAH14基因表达的试剂在制备诊断早期肺腺癌的产品中的应用。进一步，所述试剂选自：特异性识别DNAH14的探针；或特异性扩增DNAH14的引物；或特异性结合DNAH14编码的蛋白的抗体或配体。优选的，所述特异性扩增DNAH14基因的引物序列如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。本专利技术提供了一种诊断肺腺癌的产品，所述产品包括通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术、免疫测定检测样本中DNAH14基因的表达水平。其中，所述产品包括(但不限于)芯片、制剂或试剂盒。进一步，所述核酸扩增技术选自聚合酶链式反应、逆转录聚合酶链式反应、转录介导的扩增、连接酶链式反应、链置换扩增和基于核酸序列的扩增。本专利技术提供了DNAH14基因在制备预防或治疗肺腺癌的药物组合物中的应用。进一步，所述药物组合物包括DNAH14的下调剂。一方面，所述下调剂选自：核酸抑制物，蛋白抑制剂，蛋白水解酶，蛋白结合分子，其能够在蛋白或基因水平上下调DNAH14基因或其编码的蛋白的表达或活性。另一方面，，所述的DNAH14基因或其编码的蛋白的下调剂选自：以DNAH14基因或其转录本为靶序列、且能够抑制DNAH14基因表达或基因转录的干扰分子，包括：shRNA(小发夹RNA)、小干扰RNA(SiRNA)、dsRNA、微小RNA、反义核酸，或能表达或形成所述shRNA、小干扰RNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸的构建物；或特异性与DNAH14编码的蛋白结合的结合分子(如能够抑制DNAH1蛋白活性的抗体或配体)。进一步，所述的下调剂为siRNA。优选的所述siRNA序列如SEQIDNO.8、SEQIDNO.9所示。进一步，所述药物组合物还包括与所述下调剂配伍的其他药类以及药学上可接受的载体和/或辅料。本专利技术提供了DNAH14基因在筛选预防或治疗肺腺癌的潜在物质中的应用。本专利技术提供了一种筛选预防或治疗肺腺癌的潜在物质的方法，所述方法包括：用候选物质处理表达或含有DNAH14基因或其编码的蛋白的体系；和检测所述体系中DNAH14基因或其编码的蛋白的表达或活性；其中，若所述候选物质可降低DNAH14基因和/或编码的蛋白的表达或活性，(优选显著降低，如低20％以上，较佳的低50％以上；更佳的低80％以上)，则表明该候选物质是预防或治疗肺腺癌的潜在物质。所述体系选自：细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系。所述候选物质包括(但不限于)：针对DNAH14基因或其编码的蛋白或其上游或下游基因或蛋白设计的干扰分子、核酸抑制物、结合分子(如抗体或配体)、小分子化合物等。进一步，所述的方法还包括：对获得的潜在物质进行进一步的细胞实验和/或动物试验，以从候选物质中进一步选择和确定对于预防或治疗肺腺癌有用的物质。附图说明图1是利用QPCR检测DNAH14基因在肺腺癌组织中的表达情况图；图2是利用QPCR检测DNAH14在肺腺癌细胞中的转染情况图；图3是用CCK-8法检测DNAH14基因对肺腺癌细胞增殖的影响图；图4是用流式细胞仪检测DNAH14基因对肺腺癌细胞凋亡的影响图；图5是利用Transwell小室检测DNAH14对肺腺癌细胞迁移和侵袭的影响图；其中图A是DNAH14对肺腺癌细胞迁移的影响图；图B是DNAH14对肺腺癌细胞侵袭的影响图。具体的实施方式本专利技术经过广泛而深入的研究，通过高通量测序方法，，检测肺腺癌标本中基因在肿瘤组织和癌旁组织的表达，发现其中具有明显表达差异的基因片段，探讨其与肺腺癌的发生之间的关系，从而为肺腺癌的早期检测及靶向治疗寻找更好的途径和方法。通过筛选，本专利技术首次发现了肺腺癌中DNAH14显著性上调。实验证明，siRNA干扰沉默DNAH14，能够有效地抑制肺腺癌细胞的增殖和侵袭，为肺腺癌的个性化治疗提供了新途径。分子标志物“分子标志物”是其在组织或细胞中的表达水平与正常或健康细胞或组织的表达水平相比发生改变的任何基因或蛋白。本领域技术人员将认识到，本专利技术的实用性并不局限于对本专利技术的标志物基因的任何特定变体的基因表达进行定量。作为非限制性的实例，标志物基因可具有SEQIDNO.1和SEQIDNO.2指定的核苷酸序列和氨基酸序列。在一些实施方案中，其具有与所列的序列至少85％相同或相似的cDNA序列诸如上述所列的序列至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％相同或相似的cDNA序列。本专利技术可以利用本领域内已知的任何方法测定基因表达。本领域技术人员应当理解，测定基因表达的手段不是本专利技术的重要方面。可以在转录水平上检测生物标志物的表达水平。DNAH14基因DNAH14基因位于人1号染色体长臂4区上，其编码的蛋白是由几条重链、轻链和中间链组成的微管相关的动力蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测DNAH14基因表达的试剂在制备诊断早期肺腺癌的产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测DNAH14基因表达的试剂在制备诊断早期肺腺癌的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂选自：特异性识别DNAH14的探针；或特异性扩增DNAH14的引物；或特异性结合DNAH14编码的蛋白的抗体或配体。3.一种诊断肺腺癌的产品，其特征在于，所述产品包括通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术、免疫测定检测样本中DNAH14基因的表达水平。4.根据权利要求3所述的产品，其特征在于，所述核酸扩增技术选自聚合酶链式反应、逆转录聚合酶链式反应、转录介导的扩增、连接酶链式反应、链置换扩增和基于核酸序列的扩增。5.DNAH14基因在制备预防或治疗肺腺癌的药物组合物中的应用。6.根据权利要求5所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：边洋，李曙光，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11