人类可溶性CD146、其制备和应用制造技术

本发明专利技术涉及人类可溶性CD146、其制备和应用。本发明专利技术涉及用于在体内、离体或体外调节血管发生的组合物和方法。更具体来说，本发明专利技术涉及可用于人类治疗情形中的可溶性CD146蛋白以及相应的抗体。本文描述的特定形式的CD146，可用于在体内或离体带动成熟和未成熟内皮细胞两者，以及增加它们对血管发生的影响。本发明专利技术还涉及包含这些化合物的组合物，特别是药物或诊断组合物，包括试剂盒等，以及使用所述化合物、组合物和细胞的治疗或诊断方法。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及人类可溶性CD146、其制备和应用。本专利技术涉及用于在体内、离体或体外调节血管发生的组合物和方法。更具体来说，本专利技术涉及可用于人类治疗情形中的可溶性CD146蛋白以及相应的抗体。本文描述的特定形式的CD146，可用于在体内或离体带动成熟和未成熟内皮细胞两者，以及增加它们对血管发生的影响。本专利技术还涉及包含这些化合物的组合物，特别是药物或诊断组合物，包括试剂盒等，以及使用所述化合物、组合物和细胞的治疗或诊断方法。【专利说明】人类可溶性CD146、其制备和应用专利
本申请是申请日为2010年I月29日、中国国家申请号为201080006283.0、专利技术名称为“人类可溶性CD146、其制备和应用”申请的分案申请。本专利技术涉及用于在体内、离体或体外调节血管发生的组合物和方法。更具体来说，本专利技术涉及可用于人类治疗情形中的可溶性CD146蛋白以及相应的抗体。本文描述的特定形式的CD146，可用于在体内或离体带动成熟和未成熟内皮细胞两者，以及增加它们对血管发生的影响。它们还可用于制备组合物，特别是药物、诊断或美容组合物以及相应的试剂盒。本专利技术还涉及使用上面提到的化合物、组合物和细胞的治疗或诊断方法以及美容性处理。_5] 专利技术背景在高等生物体中，在胚胎发育过程中从分化的内皮细胞形成新血管(血管生成)或在成年期中从现有血管形成新血管(血管发生)，是器官发育、再生和伤口愈合的基本特征。治疗性血管发生是治疗患有导致组织局部缺血的疾病或障碍的患者的有效手段。由于发现了有利于新血管形成的促血管生成因子，使用非手术疗法治疗局部缺血已成为可能。到目前为止 已经描述了几种候选促血管生成因子，它们成为临床试验的主题。然而，热情受到一系列负面临床结果的阻碍。例如，对于VEGF来说，尽管该因子具有强的血管生成效应，但其表达不能有效增加患者中的肌肉血流。这由渗漏血管腔隙和动静脉短路的形成干扰了下游微循环来解释。已经在成人外周血、骨髓和脐带血中鉴定到内皮祖细胞(EPC) (AsaharaT, Murohara T, Sullivan A, Silver M, van der Zee R, Li T, Witzenbichler B, SchattemanG, Isner JM.推测的用于血管发生的内皮细胞祖细胞的分离(Isolation of putativeprogenitor endothelial cells for angiogenesis.)Science.1997275:964-7)。在从骨髓带动后，循环系统中的EPC参与新生儿新生血管化。已发现移植从血液或自体骨髓单核细胞获得的培养扩增的EPC，能够在体内增加局部缺血诱导的新生血管化。然而，在患者中使用培养细胞作为治疗方法，受到外周血中EPC的低比例、需要收获大量骨髓以分离足够数量的EPC以及回收到的EPC的非均质性的相当大的限制。尽管其存在缺点，但使用血管生成生长因子至今仍是用于治疗患者、例如表现出严重外周动脉疾病(也称为外周血管病)或局部缺血性心脏病的患者的治疗性血管发生的主要策略。⑶146，也称为MCAM、MUC18或Mel_CAM，是属于免疫球蛋白超家族的内皮连接的 组分(Bardin N, Anfosso F，MasseJM, Cramer E, Sabatier F，Le Bivic A, SampolJ, Dignat-George F.将⑶146鉴定为参与细胞-细胞内聚控制的内皮连接的组分(Identification of CD146as a component of the endothelial junction involved in thecontrol of cell-cell cohesion.) Blood.2001;98:3677-84)。作为该家族的成员，它由 5个Ig结构域、一个跨膜结构域和一个细胞质区组成。已知⑶146主要以两种不同形式出现，其差别在于它们的细胞质结构域的长度:长同工型(在本文中鉴定为“长⑶146”)和短同工型(在本文中鉴定为“短⑶146”)，二者都存在于细胞、主要是内皮细胞的膜中。⑶146参与细胞和组织体系结构的控制，正如通过在内皮单层形成过程中其表达的调控、其参与细胞旁通透性的控制(Bardin N, Anfosso F，MasseJM, Cramer E, SabatierF, Le Bivic A, Sampol J, Dignat-George F.将CD 146鉴定为参与细胞_细胞内聚控制的内皮连接的组分(Identification of CD146as a component of the endothelial junctioninvolved in the control of cell-cell cohesion.) Blood.2001;98:3677-84)及其与肌动蛋白细胞骨架的共定位(Anfosso F，Bardin N, Vivier E, Sabatier F，SampolJ, Dignat-George F.与人类内皮细胞中⑶146结合相关的由外至内的信号传导途径(Outside-1n signaling pathway linked to CD146engagement in human endothelialcells.) JBiol Chem.2001;276:1564-9)所证实的。已报道，膜⑶146在人类黑素瘤中促进肿瘤生长、血管发生和转移。在人类恶性黑素瘤中，膜⑶146的表达水平和分布与肿瘤发展和转移的发生密切相关。已描述了抗膜CD146抗体能够在裸鼠中显著抑制人类黑素瘤细胞的生长和转移性质(MillsL, Tellez C，Huang S，Baker C, McCarty M, Green L, Gudas JM, Feng X, Bar-Eli M.针对MCAM/MUC18的全人类抗体抑制人类黑素瘤的肿瘤生长和转移(Fully human antibodiesto MCAM/MUC18inhibit tumor growth and metastasis of human melanoma.) CancerRes.2002;62:5106-14.)。已经显示，在人类脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外模型(KangY, Wang F，Feng J, Yang D, Yang X，Yan X.⑶146的抑制降低了人类内皮细胞的迁移和增殖(Knockdown of CD146reduces the migration and proliferation of human endothelialcells.)Cell Res.2006; 16 (3):313-8)和鸡绒毛尿囊膜(CAM)测定与小鼠肿瘤生长的体内模型(Yan X, Lin Y, Yang D, Shen Y, Yuan M, Zhang Z, Li P, Xia Η, Li L, Luo D, LiuQ, Mann K，Bader BL.新的抗⑶146单克隆抗体AA98抑制血管发生和肿瘤生长(A novelant1-CD146monoclonal antibody, AA98, inh本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人类可溶性CD146蛋白，其由选自SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6的氨基酸序列构成。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：马塞尔·布罗特查宝德，卡里姆·哈尔霍里，纳萨莉·巴丁，本杰明·吉列特，弗兰克斯·迪格纳特乔治，
申请(专利权)人：艾克斯马赛大学，法国国家卫生及研究医学协会，
类型：发明
国别省市：法国;FR