用于制备抗猪瘟病毒转基因乳酸菌制剂的重组表达载体制造技术

本发明专利技术涉及一种用于制备抗猪瘟病毒转基因乳酸菌制剂的重组表达载体。该重组表达载体命名为pYG-Tα1-E2，如序列表SeqNo.1所示。本发明专利技术还涉及一种抗猪瘟病毒转基因乳酸菌制剂，依据猪瘟病毒主要经肠道黏膜感染途径入侵机体，继而引发动物疾病，增强机体特异性黏膜免疫，是阻止病原入侵的首要防线，利用乳酸菌作为介导黏膜免疫传递疫苗抗原的安全级活菌载体，以猪瘟病毒主要免疫保护性抗原E2蛋白作为免疫原，胸腺肽为免疫增强剂，构建了具有抗猪瘟病毒功能的转基因乳酸菌制剂。相比于传统猪瘟疫苗生产具有安全性好、生产成本低、产量高、易于操作的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于制备抗猪瘟病毒转基因乳酸菌制剂的重组表达载体。
技术介绍
猪痕(Classical swine fever, CSF)是由猪痕病毒(Classical swine fevervirus, CSFV)引起猪的一种以急性出血和发热为主要特征的烈性传染病，是危害养猪业发展的主要传染病之一。自然条件下，猪是唯一易感动物，死亡率高，给养猪业造成了巨大的经济损失。目前CSF的主要流行区有:(1)东南亚疫区，由于控制措施不力，疫情仍然较重；(2)中南美洲疫情稳定区，疫病流行逐年减少；(3)欧洲特别是西欧属疫情活跃区，虽然采取了严密的控制措施，仍经常爆发，是近年来CSF流行的中心。在我国，CSF流行呈现典型和非典型共存、持续感染和隐性感染共存、免疫耐受和带毒综合征共存等，疫苗接种仍是防控CSF的主要措施。一些发达国家，如美国、加拿大及一些欧盟成员国等采取严格防疫措施和剔除CSF感染猪净化猪群的方法控制和消灭CSF，成果虽显著，但经济损失较大。早期的CSF灭活疫苗因免疫期短、产生免疫保护力慢、生产成本高且繁殖CSF强毒潜在散毒危险等缺陷，自1982年起我国本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于制备抗猪瘟病毒转基因乳酸菌的重组表达载体pYG?Tα1?E2，其特征在于，如序列表Seq?No.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种用于制备抗猪瘟病毒转基因乳酸菌的重组表达载体pYG-Τα 1-E2，其特征在于，如序列表Seq N0.1所示。2.一种抗猪瘟病毒转基因乳酸菌制剂，其特征在于，将以胸腺肽Ta I作为免疫增强齐U，猪瘟病毒主要免疫保护性抗原E2蛋白作为免疫原，构成的重组表达载体pYG-Ta 1-E2电转化入乳酸菌中。3.根据权利要求2所述的一种抗猪瘟病毒转基因乳酸菌制剂的制备方法，用于胸腺肽Tal基因PCR扩增引物对，其特征在于， 上引物T-F:如序列表Seq N0.2所示， 下引物T-R:如序列表Seq N0.3所示。4.根据权利要求2所述的一种抗猪瘟病毒转基因乳酸菌制剂的制备方法，用于猪瘟病毒E2蛋白基因PCR扩增引物对，其特征在于， 上引物E-F:如序列表Seq N0.4所示， 下引物E-R:如序列表Seq N0.5所示。5.根据权利要求2所述的一种抗猪瘟病毒转基因乳酸菌制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)、参照Genbank中发布的胸腺肽(Τα I)基因序列设计PCR引物对，上引物T-F:如序列表Seq N0.2所示；下引物T-R:如序列表Seq N0.3所示； (2)、根据猪瘟病毒Ε2蛋白基因设计PCR扩增引物对，上引物E-F:如序列表Seq N0.4所示，下引物E-R:如序列表Seq N0.5所示； (3)、进行常规链式聚合酶反应分别扩增Tα I基因及Ε2基因； (4)、构建重组表达载体PYG-Tα 1- Ε2 ； (5)、构建转基因乳酸菌。6.根据权利要求2所述的一种抗猪瘟病毒转基因乳酸菌制剂，其特征在于，用于预防猪瘟的口服疫苗。7.根据权利要求5所述的一种抗猪瘟病毒转基因乳酸菌制剂的制备方法，其特征在于:所述步骤(3)采用常规链式聚合酶反应扩增Ta I基因的具体步骤如下:将混合液在70°C加热5min，25°C退火5min，37°C延伸30m...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐义刚，李丹丹，刘忠梅，吴岩，李苏龙，刘新亮，
申请(专利权)人：黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：