能同时增殖肉制品中多种致病菌的培养基及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种能同时增殖肉制品中多种致病菌的培养基及其制备方法，其成分为：蛋白胨20.0g/L、氯化钠10.0g/L、磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）18.0g/L和磷酸二氢钾3.0g/L。制备方法是：将上述成分混合加热搅拌至完全溶解后冷却至室温，调节pH=7.2±0.1，121℃高压灭菌15min。本培养基可同时对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、致泻大肠埃希氏菌进行复合增菌，避免了各自增菌的繁琐程序，提高了工作效率，在肉制品致病菌检疫中发挥了重要作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种细菌培养基，特别是涉及一种能同时增殖肉制品中多种致病菌的培养基及其制备方法。
技术介绍
目前，致病菌检测一般都是按照有关标准方法进行，标准方法首先要进行分别增菌，即一种菌按照一套增菌培养基进行增菌。致病菌检测一般同时要检测多种致病菌，如果每一种致病菌采用一套增菌培养基，会造成检测工作繁琐。表1 国标增菌方法与复合增菌方法的比较检测方法检测时限灵敏度操作性基因组提取国标增菌方法6～24h10～3000繁琐（6次增菌）提取4个复合增菌法6～24h10～2000简单（1次增菌）提取1个
技术实现思路
基于以上不足之处，本专利技术提供一种能同时增殖肉制品中多种致病菌的培养基及其制备方法，可同时对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、致泻大肠埃希氏菌等多种致病菌进行增菌的培养，提高了增菌的效率。本专利技术的目的通过如下技术实现：1、一种能同时增殖肉制品中多种致病菌的培养基，培养基成分为：蛋白胨 20.0g/L、氯化钠 10.0g/L、磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）18.0g/L和磷酸二氢钾 3.0g/L。本专利技术还具有如下技术特征：1、如上所述的一种能同时增殖肉制品中多种致病菌的培养基，配制方法如下：（1）将蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾加入到蒸馏水中，加热搅拌至完全溶解；（2）冷却至室温后，调pH 值至7.2±0.1；（3）121℃高压灭菌15min；冷却。2、如上所述的一种能同时增殖肉制品中多种致病菌的培养基，在肉制品致病菌检疫中的应用。本专利技术的有益效果体现在：本培养基可同时对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、致泻大肠埃希氏菌进行复合增菌，避免了各自增菌的繁琐程序，提高了工作效率；增菌后的培养物可以进行分离培养和生物鉴定实验，也可以直接用于PCR 检测。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1复合増菌培养基的选择依据肉制品中致病菌的生长特性，种属差异，查找复合增菌培养基，并结合食品中致病菌易受损伤需要修复等特点，筛选出两种培养基。两种培养基分别增菌培养沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、致泻大肠埃希氏菌。根据增菌情况分析菌落总数与培养时间，确定增菌效率高的培养基为最适培养基。实施例2复合増菌培养基成分的确立及其配制方法1、复合増菌培养基成分的确立培养基成分为：蛋白胨 20.0g、氯化钠 10.0g、磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）18.0g、磷酸二氢钾 3.0g、蒸馏水 1000mL。2、复合増菌培养基的制备方法具体制备方法和培养方法如下：（1）将蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾加入到蒸馏水中，加热搅拌至完全溶解；（2）冷却至室温后，调pH 值至7.2±0.1；（3）121℃高压灭菌15min；（4）培养基冷却后，可在36℃培养18～24h。实施例3复合増菌培养基的应用1、用复合増菌培养基分别稀释沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增菌李斯特氏菌、致病性大肠埃希氏菌、产肠毒性大肠埃希氏菌、出血性大肠埃希氏菌O157：H7、肠道侵袭性大肠埃希氏菌的培养液至一定浓度，进行计数。然后36℃培养24h再计数，复合增菌效果见表2。可见，经过复合增菌能够满足检测需求。   表2  致病菌复合增菌效果（单位：CFU/mL）菌株增菌前菌落总数增菌后菌落总数沙门氏菌505800000EHECO157：H760610000金黄色葡萄球菌9087000致病性大肠埃希氏菌70640000产肠毒性大肠埃希氏菌56530000单核细胞增菌李斯特氏菌70710000肠道侵袭性大肠埃希氏菌767300002、以无菌操作取肉制品25g，粉碎后加入装有225mL复合培养基的无菌三角瓶或拍击式均质袋中，复合培养基中接种了沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增菌李斯特氏菌、出血性大肠埃希氏菌O157：H7，摇晃3～5min或拍击1min，将三角瓶或均质袋封口后在36℃培养6h。从培养基中取出10 mL加入到装有10mL复合培养基的试管中，混匀后在36℃培养24h。从复合培养基中提取致病菌的核酸，进行沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增菌李斯特氏菌、出血性大肠埃希氏菌O157：H7的PCR检测，结果接种的阳性菌皆检出。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种能同时增殖肉制品中多种致病菌的培养基，其特征在于，培养基成分为：蛋白胨 20.0g/L、氯化钠 10.0g/L、磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）18.0g/L和磷酸二氢钾 3.0g/L。

【技术特征摘要】
1.一种能同时增殖肉制品中多种致病菌的培养基，其特征在于，培养基成分为：蛋白胨 20.0g/L、氯化钠 10.0g/L、磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）18.0g/L和磷酸二氢钾 3.0g/L。
2.根据权利要求1所述的一种能同时增殖肉制品中多种致病菌的培养基，其特征在于，配制方法如下：
（1）将...

【专利技术属性】
技术研发人员：李苏龙，王金玲，徐义刚，刘忠梅，肖性龙，
申请(专利权)人：黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23