一种检测食源性动物组织中抗生素的试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种检测食源性动物组织中抗生素的试剂盒及其检测方法，属于食品安全检测领域。检测试剂盒由检测主体、xx和xx组成。检测主体为均匀分散的检测菌体、酸碱指示剂及供菌体生长所需营养物质的固体培养基。检测试剂盒分为96孔检测板或单支检测管两种形式。采用本发明专利技术的试剂盒，操作者在使用时只需针对预测试的组织样品进行一次简单的预处理，再在特定的温度下孵育3h便可实现对动物组织中残留的抗生素总体情况的检测，可检测多类抗生素，检测项目多达几十种以上，对部分抗生素的检出限最低可达1-2ppb。因此，本发明专利技术可以实现对食源性动物组织中抗生素残留的总体情况进行简单、快捷、准确度较高的半定量检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种检测食源性动物组织中抗生素的试剂盒及其检测方法，属于食品安全检测领域。
技术介绍
抗生素是动物性食品安全中最常见和最重要的污染源。人长期摄入含抗生素的食品后，不断在人体内蓄积，当积累到一定程度后，就会对人体产生毒性作用，导致人的过敏反应、致畸、致突变和激素样作用等诸多方面不利影响。近年来，动物性食品的安全已经成为社会共同关注的问题。目前，国内外用于检测药物残留的方法有微生物法、免疫分析法、气相、液相色谱法、高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱质谱联用法(LC-MS)等。也有很多用了生化试剂盒来检测抗生素残留。HPLC法前处理较复杂，所需仪器也较昂贵，但具有高效、灵敏、准确等特点，是该类药物残留检测最常用的方法；LC-MS法分析范围广，不须衍生化步骤但所需仪器要求高，价格昂贵多用于残留确证；免疫分析法特异性比微生物法强，但由于存在一定交叉反应，仅适用于快速筛选。营养法典委员会对于快速筛选方法的定义，即：(1)这些方法能检测出最高残留限量浓度水平的样品浓度；(2)能进行大批量样品的检测，快速，灵敏性高；(3)在非实验室环境下可方便操作。与其他方法相比较，微生物法具有样品前处理简单、操作方便、具备一定灵敏度和特异性等优点，可作为一种筛选方法对大批样品同时检测。目前以微生物检测动物组织中抗生素残留的方法很多，如德国三碟法、欧盟四碟法、七碟法、STOP法、FAST法、CAST法等等。但均是通过对抑菌圈大小的观察进行判读，使得对结果的判断不够明朗，导致检出限偏高，且存在人为因素导致的误差。本专利技术基于微生物生长抑制法，将菌体生长的抑制情况与颜色的变化向结合，从而间接的反映了动物组织中抗生素残留的状况，并使得对结果的判读更为明朗；检测过程中只用到两种不同温度的保温设备，无需特定较精密的仪器；操作简便无需专业性操作且灵敏度较高，最低检出限可达1-2ppb。因此本专利技术可以实现对食源性动物组织中抗生素的残留情况进行简便、快捷、高效、准确的检测。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种简便、快捷、高效、准确的检测食源性动物组织中抗生素的残留情况。一种食源性动物组织中抗生素的检测试剂盒，由检测主体、xx和xx组成。检测主体为均匀分散的检测菌体、酸碱指示剂及供菌体生长所需营养物质的固体培养基。检测试剂盒分为96孔检测板或单支检测管两种形式。所述检测菌体为嗜热脂肪芽孢杆菌悬液；所述酸碱指示剂为溴甲酚紫；进一步，芽孢菌悬液的制备过程可分为平皿法、菌体浓缩平皿法和摇菌法，具体步骤如下：1.平皿法：1)从已活化的嗜热脂肪芽孢杆菌的菌落群中取一菌落接种至含无菌液体培养基的试管中，并置于56-65℃环境下摇菌24h左右；2)次日将菌液以一定接种量均匀涂布于含固体培养基的培养皿中，并置于56-65℃环境下培养2-3d；3)将平皿置于37℃或70℃再次培养3-4d；4)用PBS缓冲液将菌体从培养基上洗脱下来，置于离心管中并置于80-85℃条件下15-20min以得到较纯的芽孢菌悬液。2.菌体浓缩平皿法：1)从已活化的嗜热脂肪芽孢杆菌的菌落群中取一菌落接种至200ml液体培养基中并于56-65℃环境下摇菌24h左右；2)次日将菌液在离心，用PBS缓冲液将菌液浓缩为原体积的1/20-1/5；3)再将浓缩的菌液涂布接种至含固体培养基的平皿上，并置于56-65℃环境下培养1d左右；4)用PBS缓冲液将菌体从培养基上洗脱下来，置于离心管中并置于80-85℃条件下15-20min以得到较纯的芽孢菌悬液。3.摇菌法：1)从已活化的嗜热脂肪芽孢杆菌的菌落群中取一菌落接种至200ml液体培养基中并于56-65℃环境下摇菌24h左右；2)将菌液离心，用PBS缓冲液将菌液浓缩为原体积的1/20-1/5，并于64℃培养24-36h；3)次日于80-85℃条件下15-20min以得到较纯的芽孢菌悬液(注：此法操作较为简单，但芽孢产出率较前两种方法要低)。进一步，制备芽孢菌悬液的固体培养基的组分为蛋白胨8％-12％、酵母提取物2％-5％、氯化钠3％-10％、琼脂10％-17％、超纯水适量；液体培养基的组成为蛋白胨8％-11％、酵母提取物1％-8％、氯化钠2％-10％、超纯水适量。进一步，检测主体的制备，包括如下步骤：将制备好的检测培养基在110-120℃条件下高温灭菌30min，待培养基温度降至60-70℃时，加入一定量的芽孢菌悬液使得芽孢在培养基中的总浓度在6*105-4*106CFU/ml范围内，均匀混合后将培养基加入96孔板的酶标板中，用热封铝膜进行热封，并置于4-8℃环境下存放；进一步，检测培养基组分为：：蛋白胨5％-15％、葡萄糖2％-10％、氯化钠2％-10％、琼脂2％-15％、羧甲基纤维素钠2％-10％、瓜尔胶2％-10％、溴甲酚紫1％-5％、乙醇溶液0.1％-1％。使用上述试剂盒检测食源性动物组织中抗生素，具体步骤如下：第一步，将待检的动物组织均质，取一定量的均质组织进行速冻，再将组织迅速解冻(使组织液从细胞中释放出来)，在高于10000r/min的速度下离心10-15min。第二步，取一定量的上清液加至检测微孔或检测管中并密封，置于64℃的环境下孵育3h左右。若待测组织中某种抗生素含量在检出限以上，则菌体生长受到抑制，从而使结果保持蓝色、蓝紫色或灰褐色；反之，若待测组织中不含抗生素或含量在检出限以下，则微生物生长产酸，使得检测结果呈现的黄色或黄绿色。本专利技术涉及食源性动物组织中抗生素总体含量的检测。采用本专利技术的试剂盒，操作者在使用时无需对所需检测的组织样品进行多次预处理，只需针对预测试的组织样品进行一次简单的预处理，再在特定的温度下孵育3h便可实现对动物组织中残留的抗生素总体情况的检测，可检测多类抗生素，检测项目多达几十种以上，对部分抗生素的检出限最低可达1-2ppb。因此，本专利技术可以实现对食源性动物组织中抗生素残留的总体情况进行简单、快捷、准确度较高的半定量检测。本专利技术的优点在于，将菌体生长的抑制情况与颜色的变化相结合，使得对结果的判读更为明朗，并提高了检测灵敏度；检测过程中只用到两种不同温度的保温设备，无需特定较精密的仪器；操作简便无需专业性操作。具体实施方式一、检测食源性动物组织中抗生素的试剂盒的制备芽孢菌悬液的制备过程可分为平皿法、菌体浓缩平皿法和摇菌法，具体步骤如下：1.平皿法：1)从已活化的嗜热脂肪芽孢杆菌的菌落群中取一菌落接种至含无菌液体培养基的试管中，并置于56-65℃环境下摇菌24h左右；2)次日将菌液以一定接种量均匀涂布于含固体培养基的培养皿中，并置于56-65℃环境下培养2-3d；3)将平皿置于37℃或70℃再次培养3-4d；4)用PBS缓冲液将菌体从培养基上洗脱下来，置于离心管中并置于80-85℃条件下15-20min以得到较纯的芽孢菌悬液。2.菌体浓缩平皿法：1)从已活化的嗜热脂肪芽孢杆菌的菌落群中取一菌落接种至200ml液体培养基中并于56-65℃环境下摇菌24h左右；2)次日将菌液在离心，用PBS缓冲液将菌液浓缩为原体积的1/20-1/5；3)再将浓缩的菌液涂布接种至含固体培养基的平皿上，并置于56-65℃环境下培养1d左右；4)用P本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测食源性动物组织中抗生素的试剂盒，其特征在于，试剂盒由检测主体和比色卡组成；检测主体为均匀分散的检测菌体、酸碱指示剂及供菌体生长所需营养物质的固体培养基。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测食源性动物组织中抗生素的试剂盒，其特征在于，试剂盒由检测主体和比色卡组成；检测主体为均匀分散的检测菌体、酸碱指示剂及供菌体生长所需营养物质的固体培养基。2.根据权利要求1所述的用于检测食源性动物组织中抗生素的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒分为96孔检测板或单支检测管两种形式。3.根据权利要求1所述的用于检测食源性动物组织中抗生素的试剂盒，其特征在于，所述检测菌体为嗜热脂肪芽孢杆菌悬液。4.根据权利1所述的用于检测食源性动物组织中抗生素的试剂盒，其特征在于，检测主体的制备包括如下步骤：将制备好的检测培养基在110-120℃条件下高温灭菌30min，待培养基温度降至60-70℃时，加入一定量的芽孢菌悬液使得芽孢在培养基中的总浓度在6*105-4*106CFU/ml范围内，均匀混合后将培养基加入96孔板的酶标板中，用热封铝膜进行热封...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵广宇，何圣侠，
申请(专利权)人：北京华益精点生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11