香辛料提取物在食源性致病菌生物膜抑制和清除上的应用制造技术

本发明专利技术提出香辛料提取物在食源性致病菌生物膜抑制和清除上的应用，所述香辛料提取物为香辛料醇提取物或香辛料水提取物。因为生物膜具有较强的抗逆性，因此对生物膜的控制应采用多种方法联合，本发明专利技术为香辛料提取物在食源性致病菌生物膜控制中的应用提供了理论基础，为研究健康、安全的防腐抗生物膜制剂产品提供了理论依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品安全与卫生领域，特别涉及香辛料提取物在食源性致病菌生物膜抑制和清除上的应用。
技术介绍
食品在加工贮藏及运输的各个环节都容易受到食源性致病菌的污染，为了保持食品的新鲜卫生，避免腐烂变质，人们需要在食品中添加各种各样的防腐剂，而其中主要以人工合成的化学类防腐剂居多，但有的化学防腐剂对人类具有一定的危害性，给食品安全带来潜在的风险。生物膜是微生物镶嵌并生长在自身产生的胞外多聚物(extracellularpolymericsubstances,EPS,主要是胞外多糖、蛋白质和胞外DNA)中的微生物群体，其多附着在物体的表面。生物膜是微生物对环境的一种适应，是与游离态相对应的一种生长状态，它可增强细菌的耐药性、环境适应性及对宿主免疫系统攻击的耐受性，这在食品安全与医疗领域带来严重的风险。金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大肠杆菌(Escherichiacoli)和副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)是常见的食源性致病菌，常引起食品安全问题，对人体健康造成威胁，严重的可引起死亡。这些致病菌为了适应外界环境，常聚集在一起，形成生物膜，从而抵御外界环境尤其是抗生素等抗菌物质的清除，成为持续性感染的源头。传统的抗菌物质对生物膜的作用效果较差，而现在的方法主要集中在化学或生物的方法，如化学合成药物、酶解等方法，这些方法要么工艺复杂、要么成本较高、甚至对人体还有副作用。因此开发出新型、高效、安全的天然抗生物膜物质具有重要的理论和现实意义。香辛料是我们日常生活中常见的调味剂，而且大多数都具有抑制细菌生长的作用，但是其对生物膜是否有抑制及清除作用仍鲜有报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术所要解决的技术问题，就是提出香辛料提取物在食源性致病菌生物膜抑制和清除上的应用。为解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案予以实现：香辛料提取物在食源性致病菌生物膜抑制和清除上的应用，所述香辛料提取物为香辛料醇提取物或香辛料水提取物。优选地，所述香辛料提取物为大蒜、肉桂、辣木叶、辣木茎、丁香的提取物中的一种或两种。优选地，所述食源性致病菌为金黄色葡萄球菌或大肠杆菌或副溶血弧菌。优选地，所述香辛料提取物按以下方法制备：香辛料备原料破碎处理获得料渣，按料液比1:6～12(m/v)加入提取液，用超声波辅助提取，温度为40～60℃，提取时间为0.5～1.5h，减压抽滤后用旋转蒸发仪进行浓缩，旋转蒸发条件为50～60℃，转入具塞试管定容后即得。优选地，所述提取液为80％的乙醇或者水。优选地，所述香辛料提取物对食源性致病菌生物膜的抑制具体体现为抑制食源性致病菌生物膜的形成，抑制代谢活性和抑制产生胞外多糖，且辛香料提取物对食源性致病菌的最小抑菌浓度为6.25mg/mL-12.5mg/mL。具体地，辣木茎提取物和大蒜提取物对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度均为12.5mg/mL；肉桂提取物对大肠杆菌的最小抑菌浓度为6.25mg/mL，辣木叶提取物对大肠杆菌的最小抑菌浓度为12.5mg/mL；肉桂提取物和大蒜提取物对副溶血弧菌的最小抑菌浓度均为6.25mg/mL。优选地，所述香辛料提取物对食源性致病菌生物膜的清除具体体现为进入成熟的生物膜中并杀死其中部分食源性致病菌以及分解生物膜的胞外多糖。因为生物膜具有较强的抗逆性，因此对生物膜的控制应采用多种方法联合，本专利技术为香辛料提取物在食源性致病菌生物膜控制中的应用提供了理论基础，为研究健康、安全的抗生物膜产品提供了理论依据。附图说明图1为不同香辛料提取物对金黄色葡萄球菌抑菌圈的大小示意图；图2为不同香辛料提取物对大肠杆菌抑菌圈的大小示意图；图3为不同香辛料提取物对副溶血弧菌抑菌圈的大小示意图；图4为辣木茎或大蒜的提取物以及辣木茎与大蒜提取物的复配物对金黄色葡萄球菌的MIC对比图；图5为肉桂或辣木叶的提取物以及肉桂与辣木叶提取物的复配物对大肠杆菌的MIC对比图；图6为肉桂或大蒜的提取物以及肉桂与大蒜提取物的复配物对副溶血弧菌的MIC对比图；图7为辣木茎或大蒜的提取物以及辣木茎与大蒜提取物的复配物对金黄色葡萄球菌生物膜形成的抑制效果对比图；图8为辣木茎与大蒜提取物对金黄色葡萄球菌生物膜代谢活性的影响对比图；图9为辣木茎与大蒜提取物对金黄色葡萄球菌胞外多糖的影响示意图；图10为肉桂或辣木叶的提取物以及肉桂与辣木叶提取物的复配物对大肠杆菌生物膜形成量的影响对比图；图11为肉桂与辣木叶提取物对大肠杆菌生物膜代谢活性的影响对比图；图12为肉桂与辣木茎提取物对大肠杆菌胞外多糖的影响示意图；图13为肉桂或大蒜的提取物以及肉桂与大蒜提取物的复配物对副溶血弧菌生物膜形成量的影响对比图；图14为肉桂与大蒜提取物对副溶血弧菌生物膜代谢活性的影响对比图；图15为肉桂与大蒜提取物对副溶血弧菌胞外多糖的影响示意图；图16为辣木茎提取物、大蒜提取物以及它们的提取物复合物对金黄色葡萄球菌生物膜的清除率对比图；图17为不同浓度的辣木茎和大蒜提取物对金黄色葡萄球菌成熟生物膜胞外多糖的影响对比图；图18为肉桂提取物、辣木叶提取物以及它们的提取物复合物对大肠杆菌生物膜的清除率对比图；图19为不同浓度的肉桂与辣木叶提取物对大肠杆菌成熟生物膜胞外多糖的影响对比图；图20为肉桂提取物、大蒜提取物以及它们的提取物复合物对副溶血弧菌生物膜的清除率对比图；图21为不同浓度的肉桂与大蒜提取物对副溶血弧菌成熟生物膜胞外多糖的影响对比图；图22为CLSM观察大蒜提取物对金黄色葡萄球菌生物膜的抑制作用效果图；图23为CLSM观察肉桂提取物对大肠杆菌生物膜的抑制作用效果图；图24为CLSM观察肉桂提取物对副溶血弧菌生物膜的抑制作用效果图；图25为CLSM观察大蒜提取物对金黄色葡萄球菌生物膜的清除作用效果图；图26为CLSM观察肉桂提取物对大肠杆菌生物膜的清除作用效果图；图27为CLSM观察肉桂提取物对副溶血弧菌生物膜的清除作用效果图。具体实施方式为让本领域的技术人员更加清晰直观的了解本专利技术，下面将结合附图，对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。实施例1香辛料等植物提取物的制备将小茴香、花椒、胡椒、迷迭香、肉桂、丁香干燥、粉碎，洋葱、辣木叶、辣木茎、大蒜、生姜分别用榨汁机绞碎，按料液比1:6～12(m/v)分别加入80％乙醇(v/v)或去离子水，然后用超声波辅助提取，温度为40～60℃，提取时间为0.5～1.5h。减压抽滤后用旋转蒸发仪进行浓缩，旋转蒸发条件为50～60℃，转入具塞试管中，定容后使质量浓度为1g/mL(即1g香辛料提取物定容为1mL)，密封后保存于4℃冰箱中备用。实施例2菌悬液的制备将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和副溶血弧菌分别接种于TSB培养基中，置于摇床中37℃，120r/min培养12h。将菌悬液离心收集菌体，10倍梯度稀释后与配制好的10mL0.5麦氏比浊管(0.25％BaCl20.2mL，1％H2SO49.8mL)进行浊度比较，并用平板计数法验证，最终确定其活菌含量约为108CFU/mL。实施例3牛津杯法测定香辛料提取物的抑菌能力在配制好的TSA固体培养基上加入200μL稀释至108CFU本文档来自技高网...

【技术保护点】
香辛料提取物在食源性致病菌生物膜抑制和清除上的应用，所述香辛料提取物为香辛料醇提取物或香辛料水提取物。

【技术特征摘要】
1.香辛料提取物在食源性致病菌生物膜抑制和清除上的应用，所述香辛料提取物为香辛料醇提取物或香辛料水提取物。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述香辛料提取物为大蒜、肉桂、辣木叶、辣木茎、丁香的提取物中的一种或两种。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述食源性致病菌为金黄色葡萄球菌或大肠杆菌或副溶血弧菌。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述香辛料提取物按以下方法制备：香辛料备原料破碎处理获得料渣，按料液比1:6～12加入提取液，用超声波辅助提取，温度为40～60℃，提取时间为0.5～1.5h，减压抽滤后用旋转蒸发仪...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟青萍，魏宇清，谢婷，雷欢，方祥，廖振林，王丽，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44