【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞工程和基因工程，特别涉及一种lncrna sffd及其在猪卵巢颗粒细胞中的应用。
技术介绍
1、颗粒细胞(granulosa cells，gcs)的生长和功能在卵泡成熟中起主导作用。gcs的增殖和e2分泌促进卵泡生长，而gcs过度凋亡导致大量卵泡闭锁。众所周知，lncrna通过碱基配对方式竞争性吸附mirna，进而调节gcs的生长、功能及卵泡发育。例如，在绵羊中，lncrna fdncr通过mir-543-3p/dcn/tgf-β轴促进gcs凋亡。lncrna znf674-as1表达下调显著抑制gcs增殖和卵泡生长。
技术实现思路
1、为了克服现有技术的缺点与不足，本专利技术的首要目的在于提供一种lncrna sffd。
2、本专利技术的另一目的在于提供上述lncrna sffd在猪卵巢颗粒细胞中的应用。
3、本专利技术的再一目的在于提供抑制lncrna sffd表达的小干扰rna片段(sirna)。
4、在本专利技术中，我们发现一种新的lncrna，根据其功能命名为卵泡发育促进因子(stimulatory factor of follicular development，sffd)。lncrna sffd位于猪线粒体染色体，全长734bp。
5、本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
6、本专利技术提供一种lncrna sffd，其核苷酸序列如seq id no：1所示。
7、上述lncr
8、1)编码所述lncrna sffd的dna分子；
9、2)含有1)中所述dna分子的表达盒；
10、3)含有1)中所述dna分子的重组载体，或含有2)中所述表达盒的重组载体；
11、4)抑制所述lncrna sffd表达的小干扰rna片段(sirna)；
12、5)含有1)中所述dna分子的重组细胞，或含有2)中所述表达盒的重组细胞，或含有3)所述重组载体的重组细胞，或转染有4)中所述小干扰rna片段的重组细胞。
13、进一步的，1)中所述dna分子可通过如下方式制备得到：提取猪卵巢颗粒细胞的rna，将其逆转录成cdna，以cdna为模板进行pcr扩增，得到dna分子。
14、更进一步的，pcr扩增所用引物如下所示：
15、lncrnasffd forward：
16、lncrnasffd reverse：
17、进一步的，3)中所述重组载体可通过如下方式制备得到：将所述dna分子插入至pcdna3.1载体的hind iii和kpn i酶切位点之间，得到重组载体；
18、所述dna分子的序列如seq id no：2所示。
19、进一步的，4)中所述小干扰rna片段如下所示：
20、si-lnc sffd-1：5′-ggaacaauaguaagcacaauc-3′；
21、si-lnc sffd-2：5′-guagcccauuucuuuccaa-3′；
22、上述lncrna sffd或上述lncrna sffd相关的生物材料在猪卵巢颗粒细胞中的应用。
23、体外环境下，lncrna sffd能促进猪卵巢颗粒细胞的增殖，和/或抑制猪卵巢颗粒细胞的凋亡。
24、进一步，上述lncrna sffd或上述lncrna sffd相关的生物材料在制备调控猪卵巢颗粒细胞增殖和/或凋亡的药物中的应用。
25、所述的调控猪卵巢颗粒细胞的增殖和/或凋亡通过如下方式实现：
26、增加lncrna sffd促进猪卵巢颗粒细胞的增殖，抑制猪卵巢颗粒细胞的凋亡；或减少lncrna sffd抑制猪卵巢颗粒细胞的增殖，促进猪卵巢颗粒细胞的凋亡；
27、更进一步的，具体为下述应用中的任意一种或多种组合：
28、a)增加lncrna sffd，促进猪卵巢颗粒细胞的增殖；
29、b)增加lncrna sffd，抑制猪卵巢颗粒细胞的凋亡；
30、c)减少lncrna sffd，抑制猪卵巢颗粒细胞的增殖；
31、d)减少lncrna sffd，促进猪卵巢颗粒细胞的凋亡。
32、上述lncrna sffd或上述lncrna sffd相关的生物材料在调控猪卵巢颗粒细胞中e2(雌二醇)生成的应用。
33、所述的调控猪卵巢颗粒细胞中e2(雌二醇)生成通过如下方式实现：
34、增加lncrna sffd促进e2的生成；和/或减少lncrna sffd抑制e2的生成。
35、所述的增加lncrna sffd为通过增加外源性lncrna sffd的方式实现；
36、所述的减少lncrnasffd为抑制lncrna sffd表达的sirna转染到猪卵巢颗粒细胞的方式实现。
37、所述的增加外源性lncrnasffd通过如下方法实现：将lncrna sffd连接到pcdna3.1载体上，构建含有lncrnasffd的超表达载体；然后将含有lncrna sffd的超表达载体转染到猪卵巢颗粒细胞中。
38、本专利技术提供抑制lncrna sffd表达的sirna，序列如下：
39、si-lnc sffd-1：5′-ggaacaauaguaagcacaauc-3′；
40、si-lnc sffd-2：5′-guagcccauuucuuuccaa-3′。
41、本专利技术的验证结果如下：
42、1、合成2对干扰lncrna sffd的小片段/对照(si-lnc sffd/sirna-nc)，筛选并检测其干扰效率。结果可知，将基因干扰小片段转染到卵巢颗粒细胞中，通过qrt-pcr手段，最终筛选干扰效果较好的si-lnc sffd-2小片段进行后续实验。
43、si-lnc sffd-2：5′-guagcccauuucuuuccaa-3′；
44、2、我们分别将pcdna3.1-lnc sffd或si-lnc sffd(si-lnc sffd-2)转染到卵巢颗粒细胞，利用qrt-pcr、wb和edu法分别检测lncrna sffd对颗粒细胞增殖相关基因表达和增殖的影响。qrt-pcr和wb结果显示，pcdna3.1-lnc sffd促进细胞周期相关基因(pcna、cdk1、ccna1和ccnd1)的表达水平。edu染色显示，pcdna3.1-lnc sffd组的细胞增殖率显著高于pcdna3.1组。同时，si-lnc sffd抑制pcna、cdk1和ccnd1的表达水平。si-lnc sffd组的细胞增殖率显著低于sirna-nc组。综上，lncrna sffd能促进猪卵巢颗粒细胞的增殖。
45、3、我们分别将pcdn本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种lncRNA SFFD，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.权利要求1所述的lncRNA SFFD相关的生物材料，其特征在于：为下述生物材料中的任意一种；
3.根据权利要求2所述的生物材料，其特征在于：
4.根据权利要求2或3所述的生物材料，其特征在于：
5.根据权利要求2或3所述的生物材料，其特征在于：
6.权利要求1所述的lncRNA SFFD或权利要求2～5任一项所述的生物材料在调控猪卵巢颗粒细胞增殖和/或凋亡中的应用，其特征在于：所述应用的环境为体外环境。
7.权利要求1所述的lncRNA SFFD或权利要求2～5任一项所述的生物材料在制备调控猪卵巢颗粒细胞增殖和/或凋亡的药物中的应用。
8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于：为下述应用a)、b)、c)、d)中的任意一种，或者a)和b)的组合，或者c)和d)的组合：
9.权利要求1所述的lncRNA SFFD或权利要求2～5任一项所述的生物材料在制备调控猪卵巢颗粒细胞中E2生成的药物中的应
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：
...【技术特征摘要】
1.一种lncrna sffd，其特征在于：其核苷酸序列如seq id no：1所示。
2.权利要求1所述的lncrna sffd相关的生物材料，其特征在于：为下述生物材料中的任意一种；
3.根据权利要求2所述的生物材料，其特征在于：
4.根据权利要求2或3所述的生物材料，其特征在于：
5.根据权利要求2或3所述的生物材料，其特征在于：
6.权利要求1所述的lncrna sffd或权利要求2～5任一项所述的生物材料在调控猪卵巢颗粒细胞增殖和/或凋亡中的应用，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：张哲，周小枫，袁晓龙，李加琪，何颖婷，张豪，李念，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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