本发明专利技术公布了一株分离自豆豉中产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌株，属生物工程技术领域。该菌是从传统豆豉中分离纯化技术分离获得，经微生物分类学鉴定命名为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens），已于2014年12月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号：CCTCC M 2014639。本发明专利技术的产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌株容易培养，生产安全性高，筛选所得菌株液体发酵培养酶活达到148～2231U/mL，遗传稳定性好，其代谢产物蛋白酶容易分离纯化，且其代谢产物蛋白酶的酶活性较高，为传统豆豉工业实现科学化和的纯种培养奠定了基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程
，特别是涉及一种从传统豆豉中分离纯化的解淀粉 芽孢杆菌菌株，该菌株对于本传统豆豉工业实现科学化和的纯种培养有着重要的意义。
技术介绍
豆豉距今已有两千多年历史，具有很高营养价值和驱寒健食等功效。过去西方学 者认为，枯草杆菌是一种危害甚大的腐败菌。我国先民却能化腐朽为神奇，最先用于食品酿 造，由于细菌豆豉大都由家庭制作食用，古代文献少有记载，近代学者也少有涉猎，反而国 外研宄较多。据近代研宄枯草杆菌能形成大量淀粉酶和蛋白酶，已在工业生产上广泛应用。 然而，在我国由于细菌型豆豉的工业发酵沿用传统自然发酵方法，一直没有实现纯种发酵， 传统自然发酵过程中的微生物主要来自于空气中和器具上的微生物，导致水豆豉产品的质 量不稳定，产品的运输和保藏也受到限制很难实现大规模生产通常情况下，自然环境中存 在的野生菌株发酵能力参差不齐、安全性较低；虽然在发酵过程主要产生有益菌，但在开放 的不可控的发酵体系中很可能存在一些有害菌，如何避免有害菌污染是一个至关重要的公 共卫生课题。为实现传统豆豉的工业化生产，必须用纯种发酵代替自然发酵。 基于以上原因，对自然发酵豆豉中有益微生物进行分离和鉴定，组合对豆豉品质 起到至关重要的有益微生物，为豆豉工业化、可控化和标准化生产打下坚实基础。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株从传统豆豉中分离纯化产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌 株，可通过液态发酵生产蛋白酶。 本专利技术的从传统豆豉中分离纯化产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌株，其分类命名为 解淀粉芽孢杆菌（AaciyA/s 从传统豆鼓中分离纯化技术分离获得， 已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2014年12月10日，保藏号为：CCTCCM2014639，保藏地址是中国武汉大学。 本专利技术所述的解淀粉芽孢杆菌（ifeci固体培养特征 为： 固体培养为肉汤培养基，37±1°C培养24h，菌落直径8~12mm。呈白色不透明菌落，表 面粗糙，菌落边缘不规则，在多种培养基上均不产色素。 本专利技术所述的解淀粉芽孢杆菌的显微形态特征为： 菌体呈短杆状，染色均匀，具运动性，兼性厌氧，可形成内生芽孢，芽孢囊膨大，呈椭圆 形，游离芽孢表面着色弱，革兰氏染色阳性。 本专利技术所述的解淀粉芽孢杆菌的液体培养条件为： X：培养基为酪素发酵培养基，摇瓶培养3天，培养温度37±1°C，摇床转速为170r/ min〇 :f发酵培养特征：培养第1天，发酵液变浑浊，培养第3天，发酵液颜色变深，数 量变多，直径变大。 ③解淀粉芽孢杆菌（液体发酵3天后，对发酵液进 行化学提取、分离可得到中性蛋白酶。 本专利技术所述的解淀粉芽孢杆菌菌株的基因登录号为KP419723，16SrDNA碱基序列 为： GGCAATGGCGGGCGTTCTATAATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGG ACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGT TGTTTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAG TTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGAC ACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGT GAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTG ACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGG AATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCA TTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGA GGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATT AGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAA CGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGG TGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAG GACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTC CCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCG GAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAA AGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGC GTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCG TCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTATGGAGCCAGCCGCCGAAGGTGAACAGAT TG〇 本专利技术所述的解淀粉芽孢杆菌菌株，经发酵可得中性蛋白酶，其工艺包括菌种活 化、发酵培养、发酵产物的相对分子质量的测定这三个步骤。 其中，菌种活化采用平板培养，培养基为肉汤培养基，培养原料为：牛肉膏0. 3%， 1%蛋白胨，〇. 5%NaCl，pH为7. 0~7. 2 ;培养时间：1天；培养温度：37±1°C。 发酵培养：发酵培养基为酪素发酵培养基；发酵原料为0. 5%干酪素，0. 1%葡萄糖， 0. 1% 酵母浸粉，0. 4%K2HP04,0 . 05%KH2P04,0. 01%MgS04J§养时间：2 天；培养温度：37±1°C。 发酵产物的相对分子质量的测定：发酵完毕，转速l〇〇〇〇r/min下离心5min，获得 粗酶提取液，再进行硫酸铵盐析、脱盐、真空冷冻干燥后将所得的蛋白酶进行SDS-PAGE电 泳用以测定该蛋白酶的相对分子质量。 本专利技术从传统豆本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株分离自豆豉中产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌菌株，其特征在于：分类命名解淀粉芽孢杆菌，拉丁文学名Bacillus amyloliquefaciens Jxnuwy‑1，已于2014年12月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC M 2014639；所述解淀粉芽孢杆菌菌株在肉汤培养基上形态特征为：呈白色不透明菌落，表面粗糙，菌落边缘不规则，在多种培养基上均不产色素；所述解淀粉芽孢杆菌菌株显微形态特征为：菌体呈短杆状，染色均匀，具运动性，兼性厌氧，可形成内生芽孢，芽孢囊膨大，呈椭圆形，游离芽孢表面着色弱，革兰氏染色阳性；所述解淀粉芽孢杆菌16S rDNA碱基序列（基因登录号KP419723）：GGCAATGGCGGGCGTTCTATAATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTATGGAGCCAGCCGCCGAAGGTGAACAGATTG。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王筱兰，李保根，涂宗财，杨林，杨慧林，
申请(专利权)人：江西师范大学，
类型：发明
国别省市：江西;36
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