三糖衍生物以及它们作为佐剂的用途制造技术

本发明专利技术涉及含有取代的三糖核和任选的一个或多个阴离子基团的三糖衍生物作为佐剂的用途，所述三糖核被脂肪酸酯基团完全取代，涉及所述三糖衍生物，涉及制备所述三糖的方法，涉及由所述方法得到的三糖，涉及含有所述三糖衍生物的佐剂组合物以及涉及含有所述佐剂组合物的疫苗或试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】三糖衍生物以及它们作为佐剂的用途
本专利技术涉及新的三糖衍生物和它们作为佐剂的用途，所述三糖衍生物含有取代的三糖核和任选的一个或多个阴离子基团，所述三糖核被脂肪酸酯基团完全取代，本专利技术还涉及一种用于制备这些三糖衍生物的方法、通过该方法得到的三糖以及佐剂在疫苗中的用途。
技术介绍
抗体为身体的血液和其它体液中以及组织中所含的物质，所述抗体能够与抗原结合而使其变得无害。抗体构成身体的天然防御机理之一。它们是高度特异性的，并且它们能够灭活、结合或使抗原变得无害，所述抗原能够诱导抗体的形成。因此，与免疫系统接触的抗原激活复杂的系列细胞间相互作用，以消除抗原和/或再次建立之前的平衡。抗原的两个特性是它们的免疫原性和它们的抗原性，免疫原性为它们诱导体内免疫响应(包括形成特异性抗体)的能力，抗原性为它们被起源为抗原的抗体选择性识别的能力。已知如何借助疫苗通过用特异性抗原进行给药特意地刺激免疫响应。该处理促使生物体中保留了免疫响应状态，从而使得在与抗原的随后的接触过程中，生物体能够产生更快速和更有效的响应。然而，一些抗原仅具有微弱的免疫原性，并且它们诱导不充分的免疫响应以产生对生物体的有效保护。如果抗原与佐剂一起共同给药（co-administered），可以显著地改进该免疫原性。佐剂为增强抗原的免疫响应的物质，但是本身不需要具有免疫原性。通过保留抗原在局部给药部位附近，佐剂可起作用，以产生促进免疫系统的细胞缓慢、持续地释放抗原的持久效应（depoteffect）。佐剂也可引起免疫系统的细胞进行抗原贮存（antigendepot）和刺激这些细胞引发免疫响应。多年以来，佐剂已用于改进对例如疫苗的宿主免疫响应。内在的佐剂（Intrinsicadjuvants）通常为用作疫苗的灭活的或减毒的细菌的组分。外在的佐剂（Extrinsicadjuvants）为通常与抗原非共价连接并且制备成能够增强宿主免疫响应的免疫调节剂。氢氧化铝和磷酸铝(统称为明矾)在人和兽的疫苗中是常规使用的佐剂。充分验证了明矾在提高白喉和破伤风类毒素的抗体响应的效力，且最近，HBsAg疫苗使用明矾作为佐剂。大量的外在的佐剂可激发对抗原的免疫响应。这包括与膜蛋白抗原络合的皂角苷(免疫刺激络合物)、含有矿物油的普卢兰尼克聚合物（pluronicpolymerswithmineraloil）、在矿物油中的灭活的分枝杆菌、弗氏完全佐剂、细菌产物例如胞壁酰二肽(muramyldipeptide，MDP)。已研究了化学意义上的佐剂例如单磷酰基脂质A（monophosphoryllipidA）、磷脂缀合物(参见Goodman-Snitkoff等人，J.Immunol.147:410-415(1991)使用脂蛋白体包封蛋白(参见Miller等人，J.Exp.Med.176:1739-1744(1992))。还已评价合成的聚合物作为佐剂。这包括乳酸和乙二醇酸的均聚物和共聚物，它们已用于制备包封抗原的微球体(参见Eldridge等人，Mol.Immunol.28:287-294(1993))。非离子嵌段共聚物为待评价的另一种合成的佐剂。已研究低分子量共聚物在基于油的乳液中的佐剂影响(参见Hunter等人，TheTheoryandParticalApplicationofAdjuvants(佐剂的理论和实际应用)(编辑Stewart-Tull，D.E.S.)JohnWiley和Sons，NY.第51-94页(1995))和高分子量共聚物在含水制剂中的佐剂影响(Todd等人，Vaccin15:564-570(1997))。理想佐剂的期望特性是缺少毒性和刺激长期持久的免疫响应的能力。在人类中最常用的佐剂之一为明矾。其它佐剂例如皂角苷、QuilA和油包水型佐剂、含有灭活的结节杆菌的弗氏(弗氏完全)佐剂或不含杆菌的弗氏(弗氏不完全)佐剂，由于它们的毒性作用而对人使用时是受限的；并且对动物的不良影响使人们更为担忧。简单地说，已描述许多佐剂制剂，但是大多数从未接受用于常规疫苗，并且很少已被批准用于人类。这主要是由于它们的毒性。例如，在某些动物疫苗中用作佐剂的矿物油不容易降解并且在注射部位存留，从而引起不可接受的肉芽肿；并且，由于在注射部位贮存形成（depotformation），通常佐剂制剂(例如矿物化合物油乳液、脂质体和可生物降解的聚合物微球体)会引起局部反应。目前在人疫苗中批准使用的佐剂的实例包括明矾、MF59(水包油型乳液)、MPL(糖脂)、VLR、免疫增强性重组流感病毒颗粒(IRIV)和霍乱毒素(参见Reed等人，TrendsinImmunology30:23-32(2008))。本领域已知的一组佐剂为所谓的磺基脂多糖（sulpholipopolysaccharides），即，含有脂肪酸酯和硫酸酯的多糖(Hilgers等人，Immunology60.，第141-146页，1986)。制备这些化合物的方法已在国际专利申请WO96/20222和WO96/20008中描述。用于制备磺基脂多糖的这些方法导致形成不同的磺基脂多糖衍生物，其中每个多糖分子存在的脂肪酸酯的数量、每个多糖分子存在的硫酸酯的数量、每个多糖分子羟基的数量以及脂肪酸酯、硫酸酯和羟基在多糖分子上的分布是不同的。这意味着在这些磺基脂多糖的制备过程中，能够得到许多不同的磺基脂多糖的混合物。因此，期望的磺基脂多糖的收率相对较低，或者必需使用的佐剂难以对引起组织调控的混合物进行表征。在欧洲专利EP1233969中，要求保护一种佐剂组合物，其中，所述佐剂含有磺基脂二糖。还记载了一种用于制备该磺基脂二糖的方法。在一种实施方式中，制备的磺基脂二糖被脂肪酸酯或硫酸酯基团完全取代。然而，如以下进一步描述的，当在动物中用该磺基脂二糖作为佐剂时，会产生不期望有的副作用，例如平均体温上升(包括发烧)和局部刺激性（localirritation）(组织肿胀)的出现。
技术实现思路
鉴于前述，本专利技术的目的是提供相对容易和廉价制备的化合物，具有良好的辅佐性能，并且当在临床上使用时，所述化合物能够诱导最小的不期望有的副作用。本专利技术的其它目的是提供可用于佐剂组合物的化合物，例如与疫苗组合使用的化合物，所述化合物具有良好的安全性和副作用特性。本专利技术的第一和第二方面涉及三糖衍生物和它们作为佐剂的用途。根据本专利技术所述的三糖衍生物含有取代的三糖核（trisaccharidecore）和任选的一个或多个阴离子基团，所述三糖核被脂肪酸酯基团完全取代。根据本专利技术所述的三糖衍生物特别适合用作疫苗的佐剂。它们具有比基于多糖衍生物的其它佐剂(例如基于二糖的佐剂)意外显著更好的副作用特性。与例如EP1233969的二糖衍生物相比，接种抗原组合物和含有根据本专利技术所述的三糖衍生物的佐剂组合物的动物表现出更低的平均体温上升。另外，当使用含有根据本专利技术所述的三糖衍生物的佐剂时，注射部位附近的局部反应(组织肿胀)的发生率更低。本文使用的术语抗原是指能够在人或动物身体中诱导免疫反应的任何组分或材料，例如病毒、细菌、支原体、寄生虫或肿瘤细胞、微生物的亚单位（subunit）例如蛋白、多糖、肽、糖蛋白、多糖-蛋白缀合物、肽-蛋白-缀合物。例如，抗原可以含有或由一种或多种活的生物体、失活的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.06.11 EP 10165707.01.三糖衍生物用于生产佐剂的用途，所述三糖衍生物含有取代的三糖核，所述三糖核被脂肪酸酯基团和任选的一个或多个阴离子基团完全取代。2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述取代的三糖核衍生自棉子糖、松三糖、麦芽三糖、黑曲霉三糖、麦芽三酮糖或蔗果三糖。3.根据权利要求2所述的用途，其中，所述取代的三糖核衍生自棉子糖、松三糖或麦芽三糖。4.根据权利要求3所述的用途，其中，所述取代的三糖核衍生自棉子糖或麦芽三糖。5.根据权利要求1-4中任意一项所述的用途，其中，所述取代的三糖核具有一个或两个硫酸酯或磷酸酯基团作为阴离子基团。6.根据权利要求1-4中任意一项所述的用途，其中，所述阴离子基团为硫酸酯。7.根据权利要求1-4中任意一项所述的用途，其中，所述脂肪酸酯基团为链长为4-20个碳原子的直链、支链、饱和或不饱和的脂肪酸的酯。8.根据权利要求7所述的用途，其中，所述脂肪酸酯基团为链长为6-18个碳原子的直链、支链、饱和或不饱和的脂肪酸的酯。9.根据权利要求8所述的用途，其中，所述脂肪酸酯基团为链长为8-16个碳原子的直链、支链、饱和或不饱和的脂肪酸的酯。10.根据权利要求9所述的用途，其中，所述脂肪酸酯基团为链长为10-14个碳原子的直链、支链、饱和或不饱和的脂肪酸的酯。11.根据权利要求10所述的用途，其中，所述脂肪酸酯基团为链长为12个碳原子的直链、支链、饱和或不饱和的脂肪酸的酯。12.根据权利要求1-4中任意一项所述的用途，其中，所述脂肪酸酯为月桂酸的酯、肉豆蔻酸的酯、棕榈酸的酯、硬脂酸的酯或花生酸的酯。13.根据权利要求12所述的用途，其中，所述脂肪酸酯为月桂酸的酯。14.根据权利要求1-4中任意一项所述的用途，其中，所述取代的三糖核的脂肪酸酯基团都是相同的。15.根据权利要求1-4中任意一项所述的用途，其中，所述取代的三糖核衍生自棉子糖、松三糖或麦芽三糖，并且其中所述三糖衍生物中每个取代的三糖被相同的脂肪酸酯基团完全取代。16.根据权利要求1-4中任意一项所述的用途，其中，所述取代的三糖核衍生自棉子糖、松三糖或麦芽三糖，并且其中所述三糖核中每个取代的三糖具有一个硫酸酯或磷酸酯基团以及十个相同的脂肪酸酯基团，或者每个取代的三糖具有两个硫酸酯或磷酸酯基团以及九个相同的脂肪酸酯基团。17.根据权利要求1-4中任意一项所述的用途，其中，所述脂肪酸酯基团为月桂酸的酯。18.三糖衍生物，所述三糖衍生物含有取代的三糖核，所述取代的三糖核衍生自棉子糖、松三糖、麦芽三糖、黑曲霉三糖、麦芽三酮糖或蔗果三糖，以及其中所述三糖核被脂肪酸酯基团和任选的一个或多个阴离子基团完全取代。19.根据权利要求18所述的三糖衍生物，其中，所述取代的三糖核衍生自棉子糖、松三糖或麦芽三糖。20.根据权利要求19所述的三糖衍生物，其中，所述取代的三糖核衍生自棉子糖或麦芽三糖。21.根据权利要求18-20中任意一项所述的三糖衍生物，其中，所述取代的三糖核具有一个或两个硫酸酯或磷酸酯基团作为阴离子基团。22.根据权利要求18-20中任意一项所述的三糖衍生物，其中，所述阴离子基团为硫酸酯。23.根据权利要求18-20中任意一项所述的三糖衍生物，其中，所述脂肪酸酯基团为链长为4-20个碳原子的直链、支链、饱和或不饱和的脂肪酸的酯。24.根据权利要求23所述的三糖衍生物，其中，所述脂肪酸酯基团为链长为6-18个碳原子的直链、支链、饱和或不饱和的脂肪酸的酯。25.根据权利要求24所述的三糖衍生物，其中，所述脂肪酸酯基团为链长为8-16个碳原子的直链、支链、饱和或不饱和的脂肪酸的酯。26.根据权利要求25所述的三糖衍生物，其中，所述脂肪酸酯基团为链长为10-14个碳原子的直链、支链、饱和或不饱和的脂肪酸的酯。27.根据权利要求26所述的三糖衍生物，其中，所述脂肪酸酯基团为链长为12个碳原子的直链、支链、饱和或不饱和的脂肪酸的酯。28.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·G·M·M·范步瑞，E·J·P·M·斯克拉斯，J·A·特克斯特拉，M·A·J·克里克，R·P·霍夫，W·M·M·斯哈佩尔，
申请(专利权)人：爱木诺公司，
类型：
国别省市：