[问题]制备具有活化基团的糖链化合物时，在作为现有技术的碳酸铵法中，在向糖链的还原末端导入氨基的过程中，位于糖链还原末端的单元糖开环，出现了产生α端基异构体和β端基异构体的混合物的问题。[解决方案]本发明专利技术提供糖链化合物的制备方法包括：以具有糖链天冬酰胺结构的化合物为原料，从糖链肽中切断糖链，使保持来自天冬酰胺侧链的氮原子与糖链的还原末端结合的状态，不仅保持了上述糖链的还原末端与上述氮原子之间的共价键、还保持了β立体构型不变，向上述氮原子上导入活化基团，制备β选择性高、且具有活化基团的糖链化合物。另外，作为本发明专利技术的化合物，提供作为β端基异构体的新的具有活化基团的糖链化合物。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】制备具有活化基团的糖链化合物时，在作为现有技术的碳酸铵法中，在向糖链的还原末端导入氨基的过程中，位于糖链还原末端的单元糖开环，出现了产生α端基异构体和β端基异构体的混合物的问题。本专利技术提供糖链化合物的制备方法包括：以具有糖链天冬酰胺结构的化合物为原料，从糖链肽中切断糖链，使保持来自天冬酰胺侧链的氮原子与糖链的还原末端结合的状态，不仅保持了上述糖链的还原末端与上述氮原子之间的共价键、还保持了β立体构型不变，向上述氮原子上导入活化基团，制备β选择性高、且具有活化基团的糖链化合物。另外，作为本专利技术的化合物，提供作为β端基异构体的新的具有活化基团的糖链化合物。【专利说明】活化的糖链衍生物的制备方法和活化的糖链衍生物
本专利技术涉及活化的糖链衍生物的制备方法和活化的糖链衍生物化合物。
技术介绍
糖链通常是指单糖与单糖通过糖苷键这种键结合成链状的物质。在生物体内，已 知各种糖链发挥着重要的作用。在生物体内，糖链往往是作为与肽、蛋白质、脂质等结合的 复合糖质而存在。 特别是，在存在于生物体内的糖肽或糖蛋白中，已知具有特定结构的糖链与肽的 特定氨基酸结合。已知这些糖链根据其结构的不同而对肽（蛋白质）的活性或活体内动力 学等产生各种影响。 已知还有人将这种糖链或添加有糖链的肽用作药品，但通过细胞系来制备添加有 糖链的肽时，糖链的结构不均一。若糖链的结构不均一，则在药效上也会产生偏差，因此迫 切需要在肽上添加分离纯化或化学合成的结构均一的糖链。但是，为了使分离纯化或化学 合成的糖链与肽等其他物质结合，根据需要，需要在糖链上添加结合所需的官能团。 作为在糖链上添加与其他物质结合所需的官能团（在本专利技术中，还称作活化基 团）的方法，可以进行如下的方法：从天然的蛋黄等中分离纯化在糖链的还原末端具有-OH 基的糖链，利用碳酸铵法向糖链的还原末端导入氨基，在该氨基上添加活化基团（例如参 照专利文献1、2和非专利文献1、2)。然而，在这种方法中，尽管天然存在的糖肽在糖链与肽 的结合中的立体构型是β型，但在向糖链中导入氨基的过程中，位于糖链还原末端的单元 糖是经过开环闭环而导入氨基的，因此出现了产生α端基异构体和β端基异构体的混合 物的问题。 现有技术文献 专利文献 专利文献1 :国际公开第2005/010053号 专利文献 2 :ΕΡ0413675Α2 非专利文献 非专利文献 I :Biochemistry(1992)，第 31 卷，10724-10732 页 非专利文献 2 :Biochemical J. (1993)，第 296 卷，817-825 页
技术实现思路
专利技术所要解决的课是页 在制备具有活化基团的糖链化合物时，在作为现有技术的碳酸铵法中，在向糖链 的还原末端导入氨基的过程中，位于糖链的还原末端的单元糖开环，出现了产生α端基异 构体和β端基异构体的混合物的问题。 用于解决课题的方法 为了解决上述课题，本专利技术人对β选择性地制备在糖链的还原末端具有活化基 团的糖链化合物的方法进行了深入研究。其结果，本专利技术人发现了下述方法：以具有糖链 天冬酰胺结构的化合物为原料，从糖链肽中切断糖链，使糖链的还原末端与来自天冬酰胺 侧链的氮原子保持结合的状态，不仅保持了上述糖链的还原末端与上述氮原子之间的共价 键、还保持了 β立体构型不变，向上述氮原子上导入活化基团，制备作为β端基异构体的、 具有活化基团的糖链化合物。另外，本专利技术人对上述制备方法进行了深入研究的结果，作为 本专利技术的化合物，发现了作为β端基异构体的新的具有活化基团的糖链化合物。 即，本专利技术涉及下述式（Ia)所表示的化合物的制备方法， G-NH-CO-CH2-Y1 (Ia) (其中，G表示糖链，Y1表示活化基团，G与NH结合，使NH的氮原子与上述糖链的 还原末端以成为β型立体构型的方式进行结合）。 本专利技术的制备方法可以是上述式（Ia)所表示的化合物的制备方法，该方法包括 以下的步骤（a)?（b)。 在本专利技术的制备方法中，步骤（a)可以是如下表示的步骤： 步骤（a):在碱性条件下，使糖链天冬酰胺水解酶与具有下述式（2)所表示的糖链 天冬酰胺结构的化合物发生作用，得到下述式（3)所表示的化合物。 G-Asn (2) (其中，G表示糖链，Asn表示天冬酰胺，G与Asn结合，使上述天冬酰胺侧链的氮 原子与上述糖链的还原末端以成为β型立体构型的方式进行结合）。 G-NH2 (3) (其中，G表示糖链，NH2表示氨基，G与NH2结合，使来自上述天冬酰胺侧链的氮原 子的氮原子与上述糖链的还原末端以成为β型立体构型的方式进行结合）。 在本专利技术的制备方法中，步骤（b)可以是如下表示的步骤： 步骤（b):使步骤（a)中得到的上述式（3)所表示的化合物与下述式（4)所表示 的化合物反应。 L1-CO-CH2-Y1 (4) (其中，L1为离去基团，Y1为活化基团）。 另外，在本专利技术的具有活化基团的糖链化合物的制备方法的一个实施方式中，涉 及下述式（Ib)所表示的化合物的制备方法。 G-NH-CO-CH2-Y2 (Ib) (其中，G表示糖链，Y2表示活化基团，G与NH结合，使NH的氮原子与上述糖链的 还原末端以成为β型立体构型的方式进行结合）。 在本专利技术的制备方法中，上述式（Ib)所表示的化合物的制备方法可以包含以下 的步骤（a)?（C)。 在本专利技术的式（Ib)所表示的化合物的制备方法中，步骤（a)可以是如下表示的步 骤： 步骤（a):在碱性条件下，使糖链天冬酰胺水解酶与具有下述式（2)所表示的糖链 天冬酰胺结构的化合物发生作用，得到下述式（3)所表示的化合物。 G-Asn (2) (其中，G表示糖链，Asn表示天冬酰胺，G与Asn结合，使上述天冬酰胺侧链的氮 原子与上述糖链的还原末端以成为β型立体构型的方式进行结合）。 G-NH2 (3) (其中，G表示糖链，NH2表示氨基，G与NH2结合，使来自上述天冬酰胺侧链的氮原 子的氮原子与上述糖链的还原末端以成为β型立体构型的方式进行结合）。 在本专利技术的式（Ib)所表示的化合物的制备方法中，步骤（b)可以是如下表示的步 骤： 步骤（b):使步骤（a)中得到的上述式（3)所表示的化合物与下述式（5)所表示 的化合物反应。 L1-CO-CH2-Z (5) (其中，L1为离去基团，Z为卤原子）。 在本专利技术的式（Ib)所表示的化合物的制备方法中，步骤（C)可以是如下表示的步 骤。 步骤（c):使步骤（b)中得到的化合物与下述式（6a)或式（6b)所表示的化合物 反应。 L2-Y2 (6a) (其中，L2为离去基团，Y2为活化基团）。 L3Y3 (6b) (其中，L3为阳离子，Y3为上述活化基团Y2的阴离子，L3Y 3是L3与Y3的盐）。 在本专利技术的上述式（Ia)所表示的化合物的制备方法的一个实施方式中，Y1可以是 选自由溴原子、氯原子、碘原子、SH、N3、NHNH2、SHCH2CH 2本文档来自技高网...
【技术保护点】
下述式(1a)所表示的化合物的制备方法，G‑NH‑CO‑CH2‑Y1(1a)上述式(1a)中，G表示糖链，Y1表示活化基团，G与NH结合，使NH的氮原子与上述糖链的还原末端以成为β型立体构型的方式进行结合；该制备方法包括下述的步骤(a)～(b)：步骤(a)：在碱性条件下，使糖链天冬酰胺水解酶与具有下述式(2)所表示的糖链天冬酰胺结构的化合物发生作用，得到下述式(3)所表示的化合物，G‑Asn(2)式(2)中，G表示糖链，Asn表示天冬酰胺，G与Asn结合，使上述天冬酰胺侧链的氮原子与上述糖链的还原末端以成为β型立体构型的方式进行结合；G‑NH2(3)式(3)中，G表示糖链，NH2表示氨基，G与NH2结合，使来自上述天冬酰胺侧链的氮原子的氮原子与上述糖链的还原末端以成为β型立体构型的方式进行结合；步骤(b)：使步骤(a)中得到的上述式(3)所表示的化合物与下述式(4)所表示的化合物反应，L1‑CO‑CH2‑Y1 (4)(式(4)中，L1为离去基团，Y1为活化基团)。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：村濑健文，
申请(专利权)人：株式会社糖锁工学研究所，
类型：发明
国别省市：日本;JP
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