抗-KDR抗体和使用方法技术

本发明专利技术提供抗-KDR单克隆抗体和相关的组合物，可将其用在用于治疗各种癌症、类风湿性关节炎、糖尿病性视网膜病和与畸变的VEGF或KDR表达和/或活性相关的其他疾病的各种治疗方法的任一种中。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术通常涉及抗-VEGF受体2(VEGFR2 ;又称为含激酶插入区受体、或KDR)抗体、组合物、及其使用方法。这些抗体可用于例如治疗和抑制各种疾患的方法中，所述疾患包括年龄-相关的黄斑变性(AMD)、糖尿病、和缺血性视网膜病变、类风湿性关节炎、银屑病、和各种肿瘤疾病(包括肾细胞癌、转移性胃或胃食管连接部腺癌、乳癌、肝细胞癌、结肠直肠癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、黑素瘤、和复发性多形性成胶质细胞瘤、白血病和实体瘤)。
技术介绍
VEGFR2/KDR是原发性血管生成受体，以及结合VEGF亚型A、C、D和E，并且对于内皮细胞分化、以及VEGF的促丝裂作用、血管生成作用和渗透性-增强(渗透性-增强)作用VEGFR2/KDR为重要的。抗-KDR抗体可预防所有已知VEGF亚型与VEGFR2/KDR结合和开始信号传递。此外，因为肿瘤分泌更多VEGF的分子，而受体的数目仍然相对恒定，即使在非常高水平的VEGF亚型的存在下，靶向受体增加完全抑制信号的可能性。血管生成血管生成(从现存的脉管系统中新血管的形成)是严格控制的事件，并且对于正常生理(例如胚胎发育、卵泡发育、伤口复原、以及诸如肿瘤生长和进展(1，2)的病理病症)起着重要作用。原发性肿瘤的生长和新陈代谢取决于新血管的形成。在没有新血管形成的情况下，肿瘤会坏死或细胞凋亡和/或不能生长超过2-3mm3的尺寸(3)。肿瘤血管生成包括多个过程，包括内皮细胞激活、增殖、迁移、和被特定的血管生长因子触发的从先前存在血管中组织渗透，所述血管生长因子通过肿瘤细胞和周围基质(1-4)产生。VEGF 和 VEGF 受体已经鉴定几种生长因子为可能的血管生长的调节剂(5)。在这些因子中，血管内皮生长因子(VEGF)及其受体已经显示对于肿瘤血管生成(6-9)起着重要作用。VEGF是具有强有利的血管生成的、促有丝分裂的、和血管渗透-增强活性(10，11)的均二聚的34-42kDa肝素-结合糖蛋白。VEGF调节在成年人生命(12，13)的胚胎发育和血管生成的过程中血管生成。VEGF家族成员包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGFUPVEGF-E0通过VEGF受体(VEGFR) VEGF结合和介导活性。有3种VEGFR，包括VEGFRl (Flt-1)、VEGFR2(Flk-1/KDR)和 VEGFR3(14-16)。在基因敲除实验(17-18)中已经清晰地证实在血管形成中VEGF和VEGF受体的生理重要性。VEGFRl酪氨酸激酶具有对于激酶活性所需要的保守的基序。然而，对VEGF-A应答的VEGFRl的磷酸化的水平是低的(37，38)。VEGFR-1的功能未较好定义，它可作用虚拟/诱傅受体(dummy/decoy receptor)以从VEGFR-2结合中螯合VEGF和调节VEGFR-2信号。已经显示VEGFR-3可介导应答VEGF-C和VEGF-D的淋巴管生成。VEGFR2/KDR是原发性血管生成受体，以及结合VEGF亚型A、C、D和E，并且对于内皮细胞分化和有丝分裂发生它是重要的。KDR的结构和生物学VEGFR是受体酪氨酸激酶，并且属于作为I3DGF和成纤维细胞生长因子(FGF)的受体的相同家族。VEGFR2/KDR是在胞外结构域、跨膜结构域、和通过激酶插入分成两个细胞内酪氨酸激酶结构域中由个免疫球蛋白样的环组成的200kDa糖蛋白。第二和第三免疫球蛋白样的环是对于VEGF的高-亲合力配体-结合结构域，然而第一和第四免疫球蛋白样的环分别调节配体结合和受体二聚化。与对于VEGFRl的25pM的Kd相比，VEGF使用75_250pM的Kd来结合KDR。KDR主要表达在血管内皮细胞的细胞表面。还在造血细胞、血管平滑肌细胞(VSMC)、和一些恶性细胞的细胞表面上发现KDR。KDR是在发展的血管生成和血细胞生成中主要受体，和是VEGF的促有丝分裂的、血管生成的和渗透性-增强作用的主要的介体。VEGFR2-/-敲除小鼠显示在ES.5-9.5下具有缺陷性血-岛形成和血管生成的胚胎致死率(41)。生理上，VEGF与KDR的结合导致内皮细胞激活、增殖、迁移、侵袭和存活。一旦与VEGF结合时，KDR受体二聚化，这导致激酶结构域的激活和KDR受体信号传递的转导。类似许多其他受体酪氨酸激酶，导致血管生成的主要的细胞内信号传递途径包 括MAPK和PI3激酶激活。作为分子靶用于抗体治疗的KDRVEGFR2/VEGF轴是在肿瘤血管生成中主要途径。多个研究已经显示:VEGF和KDR的过表达与在人恶性肿瘤￠)中侵袭和转移强烈相关。VEGF受体与发生在许多人实体瘤(包括膀胱(21)、乳房(22、23)、直肠(24、25)、胃肠(26)、神经胶质瘤(12、27)、肾脏(28)、黑素瘤(29)、和成神经细胞瘤(30))中血管生成相关。在肿瘤血管生成中KDR的重要作用直接证实在研究中，其中显性-阴性KDR受体的表达导致在无胸腺小鼠(31)中减少的内皮细胞有丝分裂发生和皮下神经胶质瘤肿瘤的生长抑制。其他研究使用中和可溶性VEGF受体以及使用包括小分子酪氨酸激酶抑制剂(TKI)和KDR-特异性抗体的KDR抑制剂来证实该作用。 除了它对于肿瘤血管生成的作用外，在诸如白血病细胞的一些肿瘤细胞上还发现KDR，并且通过刺激白血病生长(42，43)的自分泌环KDR可直接介导肿瘤发生。KDR信号传递的抑制能够减少血管生成和延迟肿瘤生长(35，36)。靶向KDR的大多数目前治疗是小-分子酪氨酸激酶抑制剂(TKI)。TKI干扰ATP或其他底物与酪氨酸激酶的结合，以及破坏激酶催化活性。所有迄今开发的TKI (类似舒尼替尼)与KDR激酶结构域的ATP结合部位可逆地结合。在各种类型的肿瘤(12，19)中VEGF在高水平下表达，以及新近发育的毛细血管被聚集在VEGF-产生肿瘤细胞(12)周围。在含氧量低的条件(与快速生长的肿瘤(20)相关的那些条件)下强烈上调VEGF表达。通过诸如Avastin (33，34)的抗体中和VEGF是临床批准的治疗，从而抑制癌症或诸如AMD的其他血管生成疾病。然而，甚至当联合化学治疗给予时已经发现对VEGF阻断的抵抗。该抵抗可以与重塑的脉管系统和其他生成血管因子的增加的表达相关。就其本身而论，本领域保留需求对于用于抑制癌症和与血管生成相关的其他疾病的改善的组合物和方法。尽管TKI和抗-KDR抗体能够抑制KDR-介导的血管生成，但是抗体途径的优势超过TKI。相对于TKI，抗-KDR抗体是更加特异的KDR靶向剂(即，它不会抑制其他的VEGF受体)。因为它的高特异性，抗-KDR抗体能够限制和/或避免通过更低特异性TKI (44)导致的脱祀效应(off-target effect)和毒性。在各种类型的肿瘤(12，19)中VEGF在高水平下表达，以及新近发育的毛细血管被聚集在VEGF-产生肿瘤细胞(12)周围。在含氧量低的条件(与快速生长的肿瘤(20)相关的那些条件)下强烈上调VEGF表达。通过诸如Avastin (33，34)的抗体中和VEGF是临床批准的治疗，从而抑制癌症或诸如AMD的其他血管生成疾病。然而，甚至当联合化学治疗给予时已经发现对VEGF阻断的抗性。该抗性可以与重塑的脉管系统和其他本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结合KDR的分离的抗体、或其抗原?结合片段，包含：(i)包含SEQ?ID?NO：3或11表示的VHCDR1区、SEQ?ID?NO：4或12表示的VHCDR2区、和SEQ?ID?NO：5表示的VHCDR3区的重链可变区；以及(ii)包含SEQ?ID?NO：6表示的VLCDR1区、SEQ?ID?NO：7表示的VLCDR2区、和SEQ?ID?NO：8表示的VLCDR3区的轻链可变区；或所述抗体的变体、或其抗原?结合片段，包含重链和轻链可变区，除了在所述CDR区中高达8种氨基酸取代外，所述重链和轻链可变区与(i)和(ii)的所述重链和轻链可变区相同。

【技术特征摘要】
2011.11.02 US 61/554,7581.一种结合KDR的分离的抗体、或其抗原-结合片段，包含:(i)包含SEQ ID N0:3或11表示的VHCDRl区、SEQ ID NO:4或12表示的VHCDR2区、和SEQ ID NO:5表示的VHCDR3区的重链可变区；以及(ii)包含SEQ ID NO:6表示的VLCDRl区、SEQ ID NO:7表示的VLCDR2区、和SEQ ID NO:8表示的VLCDR3区的轻链可变区； 或所述抗体的变体、或其抗原-结合片段，包含重链和轻链可变区，除了在所述CDR区中高达8种氨基酸取代外，所述重链和轻链可变区与(i)和(ii)的所述重链和轻链可变区相同。2.权利要求1所述的分离的抗体、或其抗原-结合片段，其中所述重链可变区包含SEQID NO:1表不的氣基酸序列。3.权利要求1所述的分离的抗体、或其抗原-结合片段，其中所述轻链可变区包含SEQID NO:2表不的氣基酸序列。4.一种结合KDR的分 离的抗体、或其抗原-结合片段，包含:(i)包含如图11所示抗体的VHCDR1、VHCDR2、和VHCDR3的重链可变区；以及(ii)包含如图11所示抗体的VLCDR1、VLCDR2、和VLCDR3的对应的轻链可变区； 或所述抗体的变体、或其抗原-结合片段，包含重链和轻链可变区，除了在所述CDR区中高达8种氨基酸取代外，所述重链和轻链可变区与(i)和(ii)的所述重链和轻链可变区相同。5.权利要求4所述的分离的抗体、或其抗原-结合片段，其中所述重链可变区包含SEQID NO:17-42表示的氨基酸序列的任意一种。6.权利要求4所述的分离的抗体、或其抗原-结合片段，其中所述轻链可变区包含SEQID NO:43-68表示的氨基酸序列的任意一种。7.一种结合KDR的分离的抗体、或其抗原-结合片段，包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列。8.权利要求7所述的分离的抗体、或其抗原-结合片段，包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列具有至少90% —致性的氨基酸序列。9.权利要求7所述的分离的抗体、或其抗原-结合片段，包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2表不的氣基酸序列。10.一种结合KDR的分离的抗体、或其抗原-结合片段，包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2表不的氣基酸序列。11.权利要求10所述的分离的抗体、或其抗原结合片段，包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列具有至少90% —致性的氨基酸序列的氨基酸序列。12.权利要求1所述的分离的抗体，其中所述抗体为人源化的。13.权利要求12所述的分离的抗体，其中VH区包含SEQID NO:9表示的氨基酸序列，以及VL区包含SEQ ID NO: 10表不的氣基酸序列。14.权利要求1所述的分离...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯耀煌，李森伟，张永克，余国良，朱伟民，
申请(专利权)人：埃派斯进有限公司，
类型：发明
国别省市：