抗-FGFR3抗体及其使用方法技术

本发明专利技术提供了FGFR3抗体，和包含这些抗体的组合物和使用这些抗体的方法。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】抗-FGFR3抗体及其使用方法 本申请是申请日为2010年3月24日、专利技术名称为"抗-FGFR3抗体及其使用方法" 的中国专利申请No. 201080013816. 8的分案申请。 相关申请的交叉引用 本申请要求于2009年3月25日提交的美国专利申请号61/163, 222的优先权，该 申请的内容通过引用合并于本文。 专利
本专利技术总体上涉及分子生物学领域。更具体地，本专利技术涉及抗-FGFR3抗体及其用 途。 专利技术背景 成纤维细胞生长因子（FGFs)和它们的受体（FGFRs)在胚胎发育、组织内环境稳定 和代谢过程中具有关键性的作用（1-3)。在人类中，存在22种FGFs(FGFl-14，FGF16-23) 和4种具有酪氨酸激酶结构域的FGF受体（FGFR1-4)。FGFR由具有两个或三个免疫球蛋白 样结构域（IgDl-3)的细胞外配体结合区，单次跨膜区和细胞质的分开的酪氨酸激酶结构 域组成。FGFR1，2和3各自具有两个主要的选择性剪接同种型，称为IIIb和IIIc。这些 同种型在后半个IgD3中有约50个氨基酸的差异，并且具有截然不同的组织分布和配体特 异性。通常，IIIb同种型见于上皮细胞中，而IIIc在间充质细胞中表达。在与硫酸乙酰肝 素蛋白聚糖（heparansulfateproteoglycans)协同结合FGF后，FGFR二聚化并且在特定 的酪氨酸残基处磷酸化。这有助于募集关键性的衔接蛋白（adaptorprotein)，诸如FGFR 底物2a(FRS2a)，导致多个信号传导级联的激活，包括促分裂原活化蛋白激酶（MPK)和 PI3K-AKT途径（1，3, 4)。因此，FGF和它们的同源受体以前后相关（context-dependent)的 方式调节众多的细胞过程，包括增殖、分化、迀移和存活。 异常激活的FGFRs已经被认为与特定的人恶性肿瘤有关（1，5)。特别地，t(4; 14) (pl6. 3 ;q32)染色体易位发生在约15-20%的多发性骨髓瘤患者中，导致FGFR3的过度表达 并且与较短的总存活时间相关（6-9)。FGFR3也与赋予培养中的骨髓瘤细胞系以化学抗性 有关（10)，这与t(4 ; 14) +患者对常规化疗的临床反应差相一致（8)。突变活化的FGFR3的 过度表达足以诱导造血干细胞和成纤维细胞（11-14, 15)、转基因小鼠模型（16)、和鼠骨髓 移植模型（16, 17)中的癌性转化。因此，FGFR3已经被提议作为多发性骨髓瘤中的潜在治 疗靶标。实际上，靶向FGFRs的几种小分子抑制剂，尽管对FGFR3没有选择性并且针对某些 其他激酶具有交叉抑制活性，但已经证明针对培养中和小鼠模型中的FGFR3-阳性骨髓瘤 细胞具有细胞毒性（18-22)。 还已经记载了在大部分膀胱癌症中存在FGFR3过度表达（23, 24)。此外，已经 在60-70 %的乳头状膀胱癌和16-20 %的肌肉侵袭性膀胱癌中鉴定到FGFR3的体细胞 激活突变（24, 25)。在细胞培养实验中，RNA干扰（11，26)或FGFR3单链Fv抗体片段 抑制膀胱癌细胞增殖（27)。近来的研宄证明FGFR3抗体-毒素缀合物通过FGFR3-介 导的毒素递送至肿瘤而减弱膀胱癌细胞系的异种移植物的生长（28)。然而，仍然不 清楚FGFR3信号传导是否的确是膀胱肿瘤体内生长的致癌驱动力。此外，基于体内模 型还没有明确在膀胱癌中靶向FGFR3的治疗可能性。涉及FGFR3和抗-FGFR3抗体的 出版物包括美国专利公开号2005/0147612 ;Rauchenberger等，JBiolChem(生物 化学杂志）278(40):38194-38205(2003);W02006/048877;Martinez-Torrecuadrada 等，（2008)MolCancerTher(分子癌症治疗）7(4) :862-873 ;TO2007/144893Jrudel 等?（2006) 107(10) :4039-4046 ;Martinez-Torrecuadrada等（2005)ClinCancerRes(临 床癌症研宄）11(17) :6280-6290 ;Gomez_Roman等（2005)ClinCancerRes(临床癌症研 宄）11:459-465 ;Direnzo,R等（2007)ProceedingsofAACRAnnualMeeting(AACR年会进 展），摘要No. 2080 ;W02010/002862。 很明显持续存在着对具有临床属性的药剂的需求，所述药剂最适于开发为治疗 剂。本文所述的专利技术满足此需求并且提供其他益处。 本文引用的所有参考文献，包括专利申请和出版物的全部内容通过引用合并。 专利技术概述 本专利技术部分地基于多种FGFR3结合剂（诸如抗体，及其片段）的鉴定。FGFR3呈 现了重要的和有利的治疗靶标，并且本专利技术基于所述试剂与FGFR3的结合提供了组合物和 方法。本专利技术的FGFR3结合剂，如本文所述，提供了用于靶向与FGFR3信号传导途径的表达 和/或活性相关的病理学状况的重要的治疗剂和诊断剂。因此，本专利技术提供了与FGFR3结 合相关的方法、组合物、试剂盒和制品。 本专利技术提供了与FGFR3结合的抗体。在一个方面，本专利技术的特征在于 与FGFR3结合的分离抗体。在一些实施方案中，所述抗体结合FGFR3IIIb同种型 和/或FGFR3IIIc同种型。在一些实施方案中，所述抗体结合突变的FGFR3(例如， FGFR3IIIbR248C,S249C,G372C,Y375C,K652E,中的一种或多种和 / 或FGFR3IIIc R248C,S249C,G370C,Y373C,K650E中的一种或多种）。在一些实施方案中，所述抗体结合 单体的FGFR3 (例如，单体的FGFR3IIIb和/或IIIc同种型）。在一些实施方案中，所述 抗体促进单体FGFR3的形成，诸如通过稳定与二聚体FGFR3形式相关的单体FGFR3形式。 在一个方面，本专利技术提供了分离的抗-FGFR3抗体，其中所述抗体的全长IgG形 式以lxKT7或更强的Kd结合人FGFR3。如本领域中众所周知的那样，配体与其受体的结合 亲合力可以使用多种测定中的任一种来测定，并且可以按照多种定量值来表示。因此，在一 个实施方案中，结合亲合力表示为Kd值并且反映固有的结合亲合力（例如，具有最小化的 抗体亲抗原性效应（avidityeffect))。通常和优选地，结合亲合力在体外测量，无论是在 无细胞的环境中还是在细胞相关的环境中测量。本领域中已知的许多测定中的任一种，包 括本文所述的那些，可以用来获得结合亲合力测量值，包括，例如，Biacore，放射免疫测定 (RIA)，和ELISA。在一些实施方案中，所述抗体的全长IgG形式以lxKT8或更强的Kd， 以Ix10_9或更强的Kd，或以Ix10 _1(1或更强的Kd结合人FGFR3。 通常，本专利技术的抗-FGFR3抗体是拮抗剂抗体。因此，在一个方面，所述抗-FGFR3 抗体抑制FGFR3活性（例如，FGFR3-IIIb和/或FGFR3-IIIC活性）。在一些实施方案中， 抗-FGFR3抗体（通常以本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的抗‑FGFR3拮抗剂抗体,其中所述抗体以1X10‑8或更强的Kd结合人FGFR3,其中所述抗体抑制FGFR3受体与另一单位的所述受体的二聚作用，从而抑制所述受体的活化，并且其中所述抗体具有抗体‑依赖性细胞介导的细胞毒性活性。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：阿维·阿什克纳济，青婧，克里斯蒂安·维斯曼，吴雁，
申请(专利权)人：健泰科生物技术公司，
类型：发明
国别省市：美国;US