利用大肠杆菌表达系统制备重组人神经生长因子的方法技术方案

本发明专利技术公开了一种利用大肠杆菌表达系统制备重组人神经生长因子的方法。该重组人神经生长因子β亚基基因含有6组氨酸纯化位点、肠激酶切割位点以及经过修饰的人神经生长因子β亚基成熟肽段基因及分子伴侣基因。该重组人神经生长因子β亚基基因在大肠杆菌中表达量高；所产生的包涵体蛋白在分子伴侣的辅助下高效复性；用肠激酶准确切割分子伴侣后，经镍柱亲和层析获得的重组人神经生长因子纯度大于99%，生物学活性大于500000AU/mg。?

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种，属于生物医药

技术介绍
神经生长因子(Nerve Growth Factor, NGF)是最早发现和最典型的神经营养因子，同时也是神经系统中最重要的生物活性分子之一。它由α、β、Y三个亚基组成,其中β亚基(β-NGF)是唯一具有生物学活性的亚基，它对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用。目前β-NGF已被开发成治疗外周神经损伤的药物应用于临床，广泛应用于神经损伤、偏瘫、卒中、颅脑损伤、小儿脑瘫等神经性疾病领域。但商品化的NGF为鼠源性的神经生长因子(mNGF)。这类动物源性的蛋白制品常常具有较高的免疫原性，容易引起人体内的抗原反应，严重者甚至会危及生命。而天然的人神经生长因子(hNGF)分布于人体的脑、神经节、虹膜、心脏、脾、胎盘等组织，原料有限，且其中hNGF含量低，分离纯化极其困难，无法直接提取获得。利用基因工程技术制备重组人神经生长因子是解决上述问题的一个主要途径。在各大表达系统中，大肠杆菌表达系统因其表达水平高、生产成本低、便于工业化生产等优势成为制备重组人神经生长因子的首选。可是，部分真核基因在大肠杆菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组人神经生长因子β亚基基因，其含有6组氨酸纯化位点、肠激酶切割位点以及经过修饰的人神经生长因子β亚基成熟肽段基因和分子伴侣基因，其中所述人神经生长因子β亚基成熟肽段基因为经过原核生物高频密码子改造后的基因，其碱基序列如SEQ？ID？NO：1所示；所述分子伴侣基因为经过修饰的人神经生长因子β亚基前导肽基因，其碱基序列如SEQ？ID？NO：2所示。

【技术特征摘要】
1.一种重组人神经生长因子β亚基基因，其含有6组氨酸纯化位点、肠激酶切割位点以及经过修饰的人神经生长因子β亚基成熟肽段基因和分子伴侣基因，其中所述人神经生长因子β亚基成熟肽段基因为经过原核生物高频密码子改造后的基因，其碱基序列如SEQ ID NO :1所示；所述分子伴侣基因为经过修饰的人神经生长因子β亚基前导肽基因，其喊基序列如SEQ ID NO 2所不。2.一种利用大肠杆菌表达系统制备重组人神经生长因子的方法，其特征在于，包括以下步骤 (1)利用化学合成法合成经点突变优化的权利要求I所述的人神经生长因子β亚基成熟肽段基因及分子伴侣基因，并将其克隆入ΡΕΤ28 a (+)表达载体，得到重组表达载体； (2)将步骤(I)所得重组表达载体导入大肠杆菌表达菌株BL21UDE3)中，构建含有重组表达载体的基因工程菌； (3)培养步骤(2)所得基因工程菌至A550=0.6时，加入诱导剂IPTG，诱导重组人神经生长因子rh β NGF在该基因工程菌中表达； (4)离心收集菌体，重悬菌体，_80°C冻存； (5)解冻菌体重悬液，破碎菌体，分离...

【专利技术属性】
技术研发人员：李佳楠，汤华东，陈亚，李汝霖，陈煌，
申请(专利权)人：武汉海特生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：