本发明专利技术提供了一种人氧化低密度脂蛋白的酶联免疫检测试剂盒，它包含如下成分：（1）包被有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的酶标板；（2）人氧化低密度脂蛋白系列标准溶液；（3）酶标记抗体；（4）稀释液；（5）洗涤液；（6）底物液；（7）终止液。本发明专利技术还提供了该试剂盒的使用方法和用途。本发明专利技术与传统的冠心病检测手段相比，该试剂盒具有无创伤、简便快捷、灵敏度高、价格低廉的特点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及ー种检测试剂盒，具体涉及检测待检样本中OxLDL含量的试剂盒。
技术介绍
冠心病，冠状动脉粥样硬化性心脏病，其诊断主要根据为病人的典型病史、临床症状，并结合仪器和生化检查进行。目前常用的检查手段有常规心电图、心电图负荷试验、超声心动图、螺旋CT和超高速CT、冠状动脉超声显像、血管内超声、核素心肌显像和选择性冠状动脉造影，以及实验室检查包括心肌酶学检查、肌钙蛋 白、C反应蛋白、血脂和脂蛋白检查等。以上检查手段中，大多数是以检测心肌缺血或者心肌梗死后的心电信号变化(各种心电图)和心室壁运动形态变化(超声心动图，心脏放射性核素检查，螺旋CT和超高速CT，磁共振成像)为基础进行冠心病的诊断，若冠状动脉狭窄程度尚未引致心肌缺血，以上检测手段往往不能有助于诊断冠心病。选择性冠状动脉造影可以直接了解冠状动脉狭窄的程度，目前被认为是诊断冠心病的金标准，但它属于创伤性检查，有一定的危险性，需要住院，而且价格昂贵，对于需要行外科治疗或者内科介入治疗的患者是必需的检查，而对于轻症冠心病患者或者怀疑有冠心病的患者，往往难以接受，需要寻找创伤性小的检测方法。研究表明，氧化低密度脂蛋白OxLDL与冠心病的发生发展有关，通常认为可以通过检测待检样本血清中氧化低密度脂蛋白OxLDL的含量，来评估患冠心病的风险。现有技术中，已经公开了ー些相关的检测方法，如专利申请号03109935. 1，专利技术名称用抗磷酸胆碱抗体对氧化低密度脂蛋白的定量測定及其在诊断动脉粥样硬化中的应用。该专利技术公开的定量检测方法包括下列步骤(a)将抗磷酸胆碱的抗体与含有OxLDL的样品接触；(b)使所述抗体与OxLDL结合；(c)測定所述抗体与OxLDL的结合量；(d)依据以磷酸胆碱为标准品测得的标准曲线，定量OxLDL含量。因抗原抗体反应很复杂，与很多因素有夫，虽然磷酸胆碱的抗原决定族与低密度脂蛋白经氧化修饰后表面呈现的抗原决定族相同，但是抗磷酸胆碱抗体与氧化低密度脂蛋白的抗原抗体反应的特异性程度难以预测，用抗磷酸胆碱抗体检测氧化低密度脂蛋白的准确度不够高，难以应用于临床检测。申请号为200710202084. 7，专利技术名称ー种间接竞争法检测微量氧化低密度脂蛋白胶体金试纸条，公开了ー种半定量检测微量氧化低密度脂蛋白交替金试纸条，包括基本支持片，该试纸条包括基本支持片，以及在基本支持片一次排列的吸水垫，层析膜，金垫和样品吸收垫，其特征在于固定只能结合约600μ g浓度的金标抗体于金垫上，采用间接竞争法，是固定于层析膜上的氧化低密度脂蛋白与待检样品中的氧化低密度脂蛋白竞争显色。该检测方法为半定量检测，难以准确检测氧化低密度脂蛋白含量，更难以准确预测待检样本患冠心病的可能性。因此，目前临床上还没有ー种简便、快捷、无创伤、价格低廉且准确性高的冠心病诊断产品，发展新的冠心病检查手段非常必要。
技术实现思路
本专利技术的技术方案是提供了一种人氧化低密度脂蛋白的酶联免疫检测试剂盒，用以进ー步诊断冠状动脉粥样硬化性心脏病。本专利技术的另ー技术方案提供了该试剂盒的使用方法和用途。—种人氧化低密度脂蛋白的酶联免疫检测试剂盒，它包含如下成分( I)包被有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的酶标板；(2)人氧化低密度脂蛋白系列标准品 标准品I :甸升标准品I含有20g牛血清白蛋白、50g鹿糖；标准品2 :每升标准品2含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和IU氧化低密度脂蛋白；标准品3 :每升标准品3含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和2U氧化低密度脂蛋白；标准品4 :每升标准品4含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和4U氧化低密度脂蛋白；标准品5 :每升标准品5含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和8U氧化低密度脂蛋白；标准品6 :每升标准品6含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和16U氧化低密度脂蛋白；(3)酶标记抗体为过氧化物酶或辣根过氧化酶标记的羊抗人载脂蛋白B抗体；(4)稀释液；(5)洗涤液；(6)底物液；(7)终止液。 其中，所述试剂盒还包括质控物高质控物每升高质控物含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和13U氧化低密度脂蛋白；低质控物每升低质控物含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和I. 5U氧化低密度脂蛋白。其中，步骤(I)所述的包被有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的酶标板是按照如下方法制备的a、抗体稀释用pH为8. O的50mM的Tris-HCl缓冲溶液将抗人氧化低密度脂蛋白单克隆抗体稀释到2. 5 20μ g/ml，得包被液；b、包被取微孔板，用洗涤液洗涤3次，加入上述含抗人氧化低密度脂蛋白单克隆抗体的包被液，每孔100 μ I/孔，4°C孵育12小时；C、封闭倾去包被液，置于吸水纸上轻拍几次，去除残液，加入含1%牛血清白蛋白和5%蔗糖的浓度为50mmol/L的Tris-HCl封闭液，其pH为8. 0，300 μ I/孔，，室温，I小吋;d、真空干燥，密封，即得包被有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的酶标板。优选地，所述的抗人氧化低密度脂蛋白单克隆抗体是由保藏号为CCTCCN0:C200304的杂交瘤细胞系产生的。其中，所述的氧化低密度脂蛋白的制备方法如下i、取低密度脂蛋白，溶于IOmM磷酸盐缓冲液中，其中，低密度脂蛋白的浓度为5mg/ml ；ii、取步骤i的磷酸盐缓冲液，加入硫酸铜，使其终浓度为2ymol/L，37°C反应2小时；iii、再加入こニ胺四こ酸，使其终浓度为O. 01%(w/v)，終止反应，透析，即得氧化低密度脂蛋白。其中，所述稀释液是每升含NaCl 40g, NaH2PO4 · 2H20 I. 184g，Na2HPO4 · 12H20 11. 6g，牛血清白蛋白50g的水溶液；所述洗涤液是每升含NaCl 68g，NaH2PO4 · 2H20 6. 22g，Na2HPO4 · 12H2061g,Tween-202 Iml 的水溶液；所述底物液包含底物液A和底物液B，底物液A是含有TMB的水溶液，底物液B是含有H2O2的水溶液；所述终止液是每升含有浓硫酸108ml的水溶液。本专利技术还提供了前述的试剂盒的使用方法，它包含下列步骤I、样品前处理；II、用前述的试剂盒进行检测；III、结果处理与分析。优选地，它包含下列步骤①样品稀释用稀释液将待测样品稀释4倍；②溶液配制取标准品和质控品，复溶；酶标记抗体工作液用稀释液将酶标记抗体稀释125 1000倍；③取包被有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的酶标板，用洗涤液洗涤3次，备用；④加样取标准品、质控物和待测样品分别加入微孔板，每孔100 μ I ;37°C下孵育2小时；用洗涤液洗板5次；⑤加入酶标抗体以与抗人氧化低密度脂蛋白单克隆抗体垂直的方向，加入稀释后的酶标抗体，100 μ I/孔，37°C下孵育I小时，用洗涤液洗板5次；⑥加入底物液取等体积的底物液A和底物液B，共100 μ I/孔，37°C避光孵育15分钟；⑦加入終止液，50 μ I/孔；⑧测定光吸收值启动酶标仪，于终止反应后30分钟内读数，測定波长450nm。其中，步骤②所述酶标记抗体稀释125倍。本专利技术还提供了该试剂盒在制备冠状动脉粥样硬化性心脏病的诊断试剂中的应用。本专利技术试剂盒提供了良好的參照-人氧化低密度脂蛋白系列标准品，为准确检测待检样本中氧化低密度脂蛋白提供了可能，并对抗氧化低密本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种人氧化低密度脂蛋白的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于它包含如下成分 (1)包被有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的酶标板； (2)人氧化低密度脂蛋白系列标准品 标准品I :每升标准品I含有20g牛血清白蛋白、50g鹿糖； 标准品2 :每升标准品2含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和IU氧化低密度脂蛋白； 标准品3 :每升标准品3含有20g牛血清白蛋白、50g鹿糖和2U氧化低密度脂蛋白； 标准品4 :每升标准品4含有20g牛血清白蛋白、50g鹿糖和4U氧化低密度脂蛋白； 标准品5 :每升标准品5含有20g牛血清白蛋白、50g鹿糖和8U氧化低密度脂蛋白； 标准品6 :每升标准品6含有20g牛血清白蛋白、50g鹿糖和16U氧化低密度脂蛋白； (3)酶标记抗体为过氧化物酶或辣根过氧化酶标记的羊抗人载脂蛋白B抗体； (4)稀释液； (5)洗涤液； (6)底物液； (7)终止液。2.根据权利要求I所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括质控物 高质控物每升高质控物含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和13U氧化低密度脂蛋白； 低质控物每升低质控物含有20g牛血清白蛋白、50g蔗糖和I. 5U氧化低密度脂蛋白。3.根据权利要求I所述的试剂盒，其特征在于步骤(I)所述的包被有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的酶标板是按照如下方法制备的 a、抗体稀释用pH为8.O的50mM的Tris-HCl缓冲溶液将抗人氧化低密度脂蛋白单克隆抗体稀释到2. 5 20ii g/ml，得包被液； b、包被取微孔板，用洗涤液洗涤3次，加入上述含抗人氧化低密度脂蛋白单克隆抗体的包被液，每孔IOOiU/孔，4°C孵育12小时； C、封闭倾去包被液，置于吸水纸上轻拍几次，去除残液，加入含1%牛血清白蛋白和5%蔗糖的浓度为50mmol/L的Tris-HCl封闭液，其pH为8. 0,300 U I/孔，室温，I小时；d、真空干燥，密封，即得包被有抗人氧化低密度脂蛋白抗体的酶标板。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述的抗人氧化低密度脂蛋白单克隆抗体是由保藏号为CCTCC NO C 200304的杂交瘤细胞系产生的。5.根据权利要求I或者2所述的试剂盒，其特征在于所述的氧化低密度脂蛋白...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐燕华，陈英，万方，
申请(专利权)人：成都华神生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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