本发明专利技术涉及神经纤毛蛋白-2作为黑素瘤的新型生物标记和治疗靶标的应用。神经纤毛蛋白-2的存在可用作诊断和检测患有黑素瘤或处于发展黑素瘤的风险中的个体的生物标记。还描述了利用神经纤毛蛋白-2捕获循环的黑素瘤细胞的方法。本发明专利技术进一步涉及使用抑制神经纤毛蛋白-2活性的药剂治疗患有黑素瘤或处于发展黑素瘤风险中的个体的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及细胞表面受体神经纤毛蛋白-2(neuropilin-2，NRP_2，一种跨膜蛋白)作为新型生物标记在黑素瘤肿瘤细胞检测中的应用，以及其作为新型治疗靶标在黑素瘤治疗中的应用。
技术介绍
在美国，黑素瘤的发病率是在所有癌症中上升速率最快的癌症之一，目前的终生风险是I比58。在美国，预计在2008年有超过60000患者被诊断患有黑素瘤，并有超过8000人死亡。目前还没有有效的系统治疗方法针对晚期疾患，晚期黑素瘤患者平均预期寿命为6-9个月。黑素瘤诊断很困难，因为良性与恶性病变(损伤)之间具有组织学重叠，其可导致过度诊断(over diagnosis)或诊断不足(under diagnosis)。此外,使用现有的临床标准来确定特定患者的预后可能是不精确的。原发性皮肤黑素瘤最有效的预后指标是Breslow深度(Breslow cbpth)和是否存在溃疡。然而，许多有较厚黑素瘤的患者都没有转移，而其它有较薄肿瘤的患者却因其疾病而早早死亡。尽管到目前为止有大量的研究调查，但仍没有足够的方法来准确识别黑素瘤的纵向生长(vertical growth)和转移进程。附图说明图I.受控的异型细胞共培养的方法，其允许分析细胞-细胞通讯表型(communication phenotype)。图IA示出了共培养异型细胞的三种方法。在间隙界面(gasinterface)方法(I)中，RFP-HUVEC和GFP_1205Lu转移性黑素瘤细胞共培养在精确限定间隙(gap)的分离的群落(colony)内。在随机混合物方法(II)中，RFP-HUVEC和GFP_1205Lu转移性黑素瘤细胞混合在一起，并作为异质细胞群体来培养。在微图案化(微模型化、微图形化，micropatterning)方法中(III)，GFP_1205Lu细胞围绕在精确限定大小和形状的RFP-HUVEC群落周围。图IB所示为在6小时(上图)和48小时(下图)使用间隙界面方法共培养的细胞表型。图IC所示为在6小时(上图)和48小时(下图)使用随机混合物方法共培养的细胞表型。图ID所示为在6小时(上图)和48小时(下图)使用微图案化方法共培养的细胞表型。图IE所示为在EGM-2培养基中单独培养48小时的RFP-HUVEC。图IF所示为在条件培养液中单独培养48小时的RFP-HUVEC。图IG所示为与1205Lu细胞共培养48小时的RFP-HUVEC。图IH所示为与GFP-1205LU细胞共培养48小时的RFP-HUVEC。图2.黑素瘤内皮细胞相互作用的全基因表达谱(profiling)识别作为细胞通讯(cellular 001111]11111；本专利技术的更进一步的方面是试剂盒，用于i)在受试者内检测黑素瘤，ii)识别有可能发展为黑素瘤的受试者，或iii)在受试者内预测黑素瘤的复发性。在实施例中，试剂盒包含i)检测表达NRP2细胞，ii)可溶性NRP2，或iii)可溶性NRP2片段的存在的试剂。在一些实施例中，该试剂是特异性结合NRP2或可溶性NRP2片段的抗体。抗体可以是单克隆也可以是多克隆的。在一些实施例中，该试剂是选择性结合NRP2的蛋白质。在一些实施例中，蛋白质是血管内皮生长因子或血管内皮生长因子片段。在一些实施例中，蛋白质是神经丛蛋白或神经丛蛋白片段。在其它实施例中，蛋白质是臂板蛋白或臂板蛋白片段。在一些实施例中，使用本领域公知的传统的检测方法检测试剂。在一些实施例中，试剂是被标记的。此标记可以是荧光部分；结合报告子离子的部分；磁性粒子；重离子；金粒子；量子点；或本领域公知的任何常规的标记。为了方便理解本专利技术，许多术语和短语定义如下。如在本文使用的，单数形式“一个”、“一种”、“该”包括复数形式，除非上下文另有明确规定。例如，提到的“一种蛋白质”包括涉及多于一种蛋白质。如在本文使用的，“神经纤毛蛋白-2”和“NRP2”包括跨膜糖蛋白的全长，同分异构体和片段。也包括被天然修饰或通过干预而修饰的神经纤毛蛋白_2，例如，通过二硫键的形成、糖基化作用，酯化、乙酰化、磷酸化、或任何其它操作或修饰，诸如结合标记组分。进一步包含的定义是，例如，神经纤毛蛋白-2包含一个或更多氨基酸类似物(包括，例如，非天然氨基酸等)，以及其它本领域公知的常规修饰。如在本文使用的，“黑素瘤”包括但不限于恶性黑素细胞增长、原发性黑素瘤，转移性黑素瘤，起源于黑色素细胞或与黑色素细胞相关的痣细胞(nevus cells)的黑素瘤，黑色素癌，黑色素上皮癌，黑素肉瘤，原位黑素瘤，浅表扩散性黑素瘤，结节性黑素瘤，恶性雀斑样黑素瘤，肢端雀斑样黑素瘤，侵袭性黑素瘤或家族性非典型痣和黑素瘤(FAM-M)综合症。在哺乳动物中这样的黑素瘤所致原因有染色体异常，退行性生长和发育紊乱，有丝分裂剂，紫外线(UV)，病毒感染，不恰当的基因组织表达，基因表达改变，或致癌剂。上述的黑素瘤可以通过本专利技术中描述的方法来诊断、评估或治疗。“提供”的样本可以通过人(或机器)进行检测来获得，或它可以通过其它，转移到人(或机器)进行检测获得。由受试者获得的“样本”(如测试样本)意指被预期在患有心衰受试者中含有高浓度的本专利技术蛋白质标记的样本。对技术人员，许多合适的样本类型是很明显的。在一些实施例中，样本是血样，如全血、血浆、血清(凝血因子已被去除的血浆)。例如外周，动脉或静脉血浆或血清常被使用。在一些实施例中，样本是尿，汗水，或另外的体液，如脊髓液，有时是除去蛋白的血液流。至于尿液，例如，蛋白质可能是被降解的(break down),所以本专利技术诊断蛋白质片段可被筛选。在一些实施例中，样本是组织，包括组织切片，组织匀浆或哺乳动物组织的原发培养物，细胞，尸检样本，病理学样本，活检样本。获取样本并准备样本用于分析的方法(例如，蛋白质含量的检测)是传统并众所周知的。如在本文使用的，“受试者”包括有黑素瘤或者有可能发展为黑素瘤的任何动物。合适的受试者(患者)包括实验室动物(像小鼠、大鼠、兔、豚鼠或猪)，家畜(农场动物)，运动动物(如狗或马)，驯养的动物和宠物(如马，狗或猫)。非人类灵长类动物和人类患者均包括在内。此外，本专利技术中的方法也可评估没有表现这些症状的受试者。 “处于风险中”是用来代表比正常的受试者，或者比对照组处理增高的风险中，例如患者。因此，带着特别标记的受试者可能增加特定的疾病或失调和被鉴定为需要进一步测试的风险。“增加风险”或“升高风险”指任何概率统计学上的显著增加，例如，该受试者具有失调。尽管在本专利技术中大部分数据提出了全长形式的NRP2，但是各种形式的该蛋白质可反映受试者有黑素瘤或在受试者内存在发展为黑素瘤的风险，这对于技术人员来说是很明显的。例如，该蛋白质可能是一个完整的全长的NRP-2。此外，该蛋白质可能是降解的和/或片段化形式的NRP2。在这种情况下，研究员可以确定一个或更多片段或降解产物的水平。此外，当NRP2经过天然处理(例如，翻译后修饰，如乙酰化、甲基化、磷酸化等)，这些形式的任一种蛋白质都包含在本专利技术中。这样，“神经纤毛蛋白-2”或“NRP2”指的是全长NRP2，NRP2片段和翻译后修饰形式的NRP2。在一些实施例中，检测的理想表达效果是相对于基线值在一个值(或组合的值)上的增加(比如，统计学本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗达·M·阿拉尼，瓦海·F·莫里亚蒂，
申请(专利权)人：约翰·霍普金斯大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。