用于识别肿瘤细胞的标记、方法及其试剂盒技术

本公开涉及用于识别癌症的预后的生物学标记(包括CD44、CD24、ABCG2、ESA、ABCC4、CD133、Oct-4、Sox-2、APC、β-连环蛋白和P-钙粘蛋白)的组合。本公开还涉及识别所述标记的方法、预测预后的方法和对于癌症的计划的个性化治疗的方法。本公开还涉及包含针对所述预测的所述标记的抗体的试剂盒／检测所述预测的所述标记的其它方法的试验。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于识别肿瘤细胞的标记、方法及其试剂盒
本公开涉及用于识别癌症的预后的生物学标记的组合。本公开还涉及识别所述标记的方法、预测预后的方法和癌症的计划的个性化治疗的方法。本公开还涉及包含针对所述预测的所述标记的抗体的试剂盒／检测所述预测的所述标记的其它方法的试验。
技术介绍
化学疗法/放射疗法：在肿瘤学领域，癌细胞的检测、识别和表征是诊断的重要方面。在医学的众多挑战中没有一个比癌症的治疗和治愈具有更有争议的开端或经历更艰难的进展。大多数患者的有效治疗需要使身体中的每个器官阻止转移性疾病。大于70％的癌症患者经受化疗／放射疗法。尽管在肿瘤学疗法中从多角度取得开创性进展，癌症治愈仍然是难以捉摸的。由于对放射和化学疗法的抗性的发展，因此尽管在某种程度上最大化疗法但晚期的实体恶性肿瘤仍然保持为治疗学挑战。例如，胶质母细胞瘤是利用目前仅提供减轻疼痛疗法的最致命的癌症之一。胶质母细胞瘤的护理标准由手术切除、离子化外部波束辐照(ionizingexternalbeamirradiation)和化学疗法组成。放射疗法已是最有效的非外科的治疗方式，然而复发是基本普遍的。然而，经受化疗／放疗的大多数患者会遭受治疗的不必要的严重副作用。此外，许多患者还表现出对治疗的抗性，导致治疗失败。因此，对于研发可以确定处方的化疗／放疗的先验(priori)有效性的诊断试验存在需求。现今，基于诸如肿瘤组织学、肿瘤体积以及肿瘤分期等临床参数和日益发展的生物成像技术来作出治疗决定。考虑到周围正常组织的耐性限度，放疗／化疗剂量和计划以及与药物的组合被规定为经验类解决方案。因为目前的标准治疗处方并不将肿瘤的异质性／个体性考虑在内，所以这些疗法经常失败且患者经受不必要的副作用。肿瘤通常具有两种细胞，CSC和肿瘤细胞。CSC仅构成一部分肿瘤并且通常占少数。肿瘤的本体由肿瘤细胞构成，肿瘤细胞不断分裂并且形成被称作“肿瘤”的实体大团块。另一方面，CSC是几乎不分裂并且具有自我更新能力的静止细胞(休眠细胞，quiescentcells)，即按照它们制造作为它们自身的完美复制品的子细胞并且制造可以进行并分化成特定肿瘤的各种细胞的方式进行分裂(参考：TheBiologyofCancerStemCells，NeethanA.Loboetal，Annu.Rev.CellDev.Bio1.2007.23：675-99和Thetheoreticalbasisofcancer-stem-cell-basedtherapeuticsofcancer：canitbeputintopractice？，IsidroSa’nchez-Garcl’aeta1，BioEssays29：1269-1280)。化疗／放疗争取通过靶向并杀死快速分裂的细胞来减少肿瘤尺寸。由于CSC几乎不分裂，因此它们不被这些疗法杀死并且幸存以再次制造肿瘤，这被称作癌症的“复发”。(参考：ChemotherapyandCancerStemCells，JeremyN.Richetal，CellStemCell1，October2007；IdentificationofSelectiveInhibitorsofCancerStemCellsbyHigh-ThroughputScreening，PiyushB.Guptaetal，Cell138，1-15，August21，2009；Identificationandtargetingofcancerstemcells，TobiasSchattonetal，BioEssays31：1038-1049；TUMOURSTEMCELLSANDDRUGRESISTANCE，MichaelDeanetal，NatureReviews，cancer，Volume5，April2005；Cancerstemcellsinsolidtumors，PatrickC.Hermannetal，SeminarsinCancerBiology(2008))。依据上述参考文献可见，使用FACS(荧光激活细胞分选法)，已将CSC从基于它们具备的某种细胞表面标记的新生肿瘤中隔离出来。这些如100-200个细胞一样少的经隔离的CSC足以引发作为针对上达至10000-20000个非CSC／本体肿瘤细胞的新肿瘤。(参考：Prospectiveidentificationoftumorigenicbreastcancercells，MuhammadA1-Hajjetal，PNAS，April1，2003，vo1.100＿no.＿3983-3988；IdentificationofaCancerStemCellinHumanBrainTumors，SheilaK.Singhetal，CANCERRESEARCH63，5821—5828，September15，2003；Identificationofhumanbraintumourinitiatingcells，SheilaK.Singhetal，NATURE|VOL432|18NOVEMBER2004)。90年代中期在血癌中识别出CSC，2003年首次在实体肿瘤中从乳腺癌，随后从脑癌和所有其它癌中识别出)。CSC的存在和直接抵抗它们的药物的缺乏，可能是难倒我们治愈癌症的一个原因。许多制药公司和生物技术正致力于专利技术会专门靶向肿瘤中的这些CSC的药物，以防止癌症复发等。许多这些药物正在临床试验中。化疗／放疗的抗性和治疗失败是由于在肿瘤中存在被称作癌症干细胞(CSC)的细胞。肿瘤本质上是异质的并且含有2种细胞，癌症干细胞和形成肿瘤本体的肿瘤细胞。然而长期以来已确认的是，不是所有的肿瘤细胞都具有引发新肿瘤或治疗后复发的潜力，近来的方法进展只出现了最终允许的CSC的识别并研究它们的生物学。已预期使CSC从越来越多的包括白血病以及乳房、脑、结肠、头和颈以及胰腺的肿瘤的人类癌症中隔离。对于不同的肿瘤已显示出，当与来自相同肿瘤的未分类种群相比时，CSC亚群的移植导致较高的肿瘤转移率。CSC定义为肿瘤内部的细胞，其具备自我更新并产生包含肿瘤的所有癌细胞的异质世系(血统)的能力。这意味着CSC可能是能够通过对称或不对称分裂扩展CSC池或分化为癌症祖细胞的肿瘤细胞的小亚群。然而，这点是肿瘤依赖的并且在黑色素瘤CSC中导致总肿瘤细胞的显著较高的百分数。非干细胞在肿瘤内部构成所有癌细胞的本体，但是仅具有有限的增殖潜力并且是非致瘤的。CSC的性能：CSC是存在于肿瘤中的静止细胞，并由此与构成肿瘤本体的迅速增殖的肿瘤细胞功能不同。由于本质上静止的CSC能够抵抗使化疗／放疗以及这些疗法靶向迅速分裂的肿瘤细胞的“合意的效果”。此外，CSC赋有多个离子通道／转运，较高的缺氧耐性和差异基因表达等，这有助于它们的抗化疗／放疗性现象。增加的数据体表明CSC和非CSC的生物差异对响应标准疗法是重要的并且大多数制药公司正使用这些差异来设计针对CSC的合理药物。对于放射疗法和化学疗法治疗的失败而言，一个根本的原因可能是关于根除癌症干细胞(CSC)的当前治疗的低疗效。渐增的证据表明CSC对细胞毒素／放射疗法的抗性并可以由此导致治疗失败。存在于与本公开相似的领域中的当前技术包括Oncoty本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于癌症的预后选自下组的生物学标记，该组包括CD44、CD24、ABCG2、ESA、ABCC4、CD133、Oct?4、Sox?2、APC、β?连环蛋白和P?钙粘蛋白或它们的任意组合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.03.27 IN 2835/CHE/20101.一种用于乳腺癌的预后的下列的组合：由CD44、ABCC4、P-钙粘蛋白和β-连环蛋白组成的生物学标记。2.根据权利要求1所述的组合，其中所述由CD44、ABCC4、P-钙粘蛋白和β-连环蛋白组成的生物学标记的组合预后具有表达雌激素受体或孕酮受体或两者的细胞的受试者的乳腺癌。3.根据权利要求1所述的组合，其中所述标记位于选自下组的位置处的受试者的肿瘤细胞上，该组包括细胞膜、细胞质和细胞核或它们的任意组合。4.一种用于具有乳腺癌或疑似具有乳腺癌的受试者的预后的试剂盒，所述试剂盒包含针对下列组合的抗体：a)由CD44、ABCC4、P-钙粘蛋白和β-连环蛋白组成的生物学标记；连同用于实施免疫组织化学的有机溶剂、用于获得显色反应的底物、第二抗体和酶以及指导手册。5.针对由CD44、ABCC4、P-钙粘蛋白和β-连环蛋白组成的生物学标记的组合的抗体在制备用于识别具有或疑似具有乳腺癌的受试者的生物样品中的细胞上的所述生物学标记的试剂中的用途，所述识别包括以下操作：a)采集、固定、切片和用有机溶剂处理所述生物样品，接着使用预定样品稀释物进行抗原修复并且添加针对所述生物学标记的组合的第一抗体；以及b)添加与酶结合的第二抗体和用于获得识别所述生物学标记的显色反应或荧光的底物。6.根据权利要求4所述的试剂盒或根据权利要求5所述的用途，其中所述有机溶剂选自包括乙醇和二甲苯或它们的任意组合的组。7.根据权利要求4所述的试剂盒或根据权利要求5所述的用途，其中所述由CD44、ABCC4、P-钙粘蛋白和β-连环蛋白组成的生物学标记的组合预后具有表达雌激素受体或孕酮受体或两者的细胞的受试者的乳腺癌。8.根据权利要求5所述的用途，其中利用常规免疫组织化学技术在预定条件下实施所述采集、固定、切片和处理。9.针对由CD44、ABCC4、P-钙粘蛋白和β-连环蛋白组成的生物学标记的组合的抗体在制备用于具有乳腺癌或疑似具有乳腺癌的受试者的预后的试剂盒中的用途，所述试剂盒包含：针对所述生物...

【专利技术属性】
技术研发人员：曼吉里·巴克尔，
申请(专利权)人：欧恩克斯特姆诊断学毛里求斯私人有限公司，
类型：
国别省市：