本发明专利技术公开了一种猪抗人T细胞酶联免疫检测试剂盒及其检测方法。所述试剂盒包括包被酶标板，酶标抗原，抗猪酶标抗体，包被液，洗涤液，稀释液，封闭液，磷酸盐—柠檬酸盐缓冲液，底物溶液，终止剂。所述检测方法包括以下步骤：酶标抗原的包被，封闭酶联板，洗涤，将标准血清与待测样品固定在酶联板中，检测光吸收值，最后分析样品指标。本发明专利技术具有操作过程简单，检测过程快速，准确性高的优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种试剂盒，特别涉及一种猪抗人T细胞酶联免疫检测试剂盒及其检测方法。
技术介绍
目前检测猪抗人T细胞免疫球蛋白指标的方法主要是《中华人民共和国药典》附录XQ抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法，简称抑玫瑰花环试验，对照做抑制效价大于等于 1比1000。然而抑玫瑰花环试验操作步骤烦杂，实验条件要求恒温22°C，难度大，实验结果误差大，如花环与淋巴细胞的人工计数难度高，受主观因素影响，准确性差，其次实验操作时间一般需要2天左右，耗时长。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供一种猪抗人T细胞酶联免疫检测试剂盒及其检测方法。本专利技术可快速、准确的检测猪抗人T细胞免疫球蛋白。本专利技术解决上述技术问题的技术方案是猪抗人T细胞酶联免疫检测试剂盒包括包被酶标板、酶标抗原、酶标抗猪酶标抗体、包被液、洗涤液、稀释液、封闭液、磷酸盐一柠檬酸盐缓冲液、底物溶液、终止剂。所述抗猪酶标抗体包括标准阳性血清和标准阴性血清。上述猪抗人T细胞酶联免疫检测试剂盒中，各液体成分含量如下其中每IOOOmL 包被液中含NA2CO3L 59g，NAHCO3 2. 93g，蒸馏水lOOOmL，包被液PH为9. 6 ；每IOOOmL洗涤液中含 NACL8. 2 g, KH2PO4O. 2 g, NA2HPO4 · 12H202. 9 g, KCL 为 0. 2 g,吐温-20 为 0. 5mL,蒸馏水999. 5mL ；每IOOOmL稀释液中BVDV抗体阴性的小牛血清或兔血清IOOmL,牛血清蛋白 10mL，洗涤液890mL ；每IOOOmL封闭液中牛血清蛋白10mL，稀释液990mL ；每IOOmL磷酸盐一柠檬酸盐缓冲液中0. IM柠檬酸共24. 3mL, 0. 2M NA2HPO4 · 12H20共25. 7mL,蒸馏水50mL ；底物溶液中含PH5. 0的磷酸盐一柠檬酸盐缓冲液10mL，邻苯二胺4mL，3%H202 50 μ L ；每200mL 终止剂中H2SO4为22. 2mL,蒸馏水177. 8mL。—种猪抗人T细胞酶免疫检测试剂盒的联检测方法包括如下步骤a.包被液稀释抗原1000倍，包被酶标板，每孔加入100μ L抗原稀释液，置4度过夜，作用24小时；b.每孔加封闭液IOOyL,置于37°C条件1小时，封闭后的酶标板在-20°C低温保存 12个月；c.洗涤液洗涤酶标板，甩去洗涤液，然后干燥；d.用稀释液分别稀释待检血清，标准阳性血清、标准阴性血清50倍；向酶标板孔中分别加入不同的血清稀释液并标注，置37°C孵育45min e.如步骤c洗涤；f.稀释液稀释酶标抗体1000倍，加入到酶标板孔中，每孔100111^，置371孵育111;g.如步骤c洗涤；h.每孔加入底物溶液100PL，37°C室温避光感作20min ；i.每孔加入终止液，测定各孔中0D492值； J-分析样品指标；当标准阳性血清OD值(P)/标准阴性血清OD值(N) >5时，说明试验有效。当样品血清OD值(S)/N > 2时，样品为抗人T细胞阳性；1. 5<S/N彡2时，样品作用可疑；S/N彡1. 5 时，样品为抗人T细胞阴性。相比较抑玫瑰花环试验，检测样品OD/标准样品OD值可以消除误差，准确反映检测结果。酶标抗原采取如下方法制备取分离纯化后的人T细胞稀释至5 X IO6个每毫升后，放入-20°C冰箱20min，取出放入20°C恒温水浴锅中lOmin，反复3次后倒入离心管， IOOOOrpm离心5min，取上清液即为酶标抗原。本专利技术的猪抗人T细胞酶联免疫检测试剂盒与传统的抑玫瑰花环试验相比，具有操作过程简单，检测过程快速，准确性强的优点。具体实施例方式实施例1 酶标抗原的制备取分离纯化后的人T细胞稀释至5X IO6个每毫升后，放入-20°C冰箱20min，取出放入20°C恒温水浴锅中lOmin，反复3次后倒入离心管， IOOOOrpm离心5min，取上清液即为酶标抗原。实施例2 猪抗人T细胞酶联免疫检测试剂盒的制备猪抗人T细胞酶联免疫检测试剂盒包括包被酶标板、酶标抗原、抗猪酶标抗体、包被液、洗涤液、稀释液、封闭液、磷酸盐一梓檬酸盐缓冲液、底物溶液、终止剂，所述抗猪酶标抗体包括标准阳性血清和标准阴性血清。上述猪抗人T细胞酶联免疫检测试剂盒中每IOOOmL包被液中NA2CO3含1. 59g， NAHCO3含2. 93g，蒸馏水IOOOmL,包被液PH为9. 6 ；每IOOOmL洗涤液中NACL含量为8. 2 g, KH2PO4 为 0. 2 g, NA2HPO4 · 12H20 为 2. 9 g, KCL 为 0. 2 g,吐温-20 为 0. 5mL,蒸馏水 999. 5mL ； 每IOOOmL稀释液中BVDV抗体阴性的小牛血清或兔血清IOOmL,牛血清蛋白10mL，洗涤液 890mL ；每IOOOmL封闭液中牛血清蛋白10mL，稀释液990mL ；每IOOmL磷酸盐一梓檬酸盐缓冲液中柠檬酸0. IM共24. 3mL, 0. 2M的NA2HPO4 · 12H20共25. 7mL,蒸馏水50mL ；底物溶液中含PH5. 0的磷酸盐一梓檬酸盐缓冲液10mL，邻苯二胺4mL，3%H202 50 μ L ；每200mL终止剂中 H2SO4 为 22. 2mL,蒸馏水 177. 8mL。实施例3 本实施例用猪抗人T细胞酶联免疫检测试剂盒检测血清的方法按照以下步骤进行a.包被液稀释酶标抗原1000倍，包被酶标板，每孔加入100μ L酶标抗原稀释液，置4 度过夜，作用M小时；b.每孔加入封闭液100μ L，置于37°C条件1小时，封闭后的酶标板在-20°C可低温保存12个月；c.洗涤液洗涤酶标板，甩去洗涤液，然后干燥；d.用稀释液分别稀释待检血清，标准阳性血清、标准阴性血清50倍；向酶标板孔中分别加入不同的血清稀释液并标注，置37°C孵育45min e.如步骤c洗涤；f.稀释液稀释酶标抗体1000倍，加入到酶标板孔中，每孔100111^，置371孵育111;g.如步骤c洗涤；h.每孔加入底物溶液100PL，37°C室温避光感作20min ；i.每孔加入终止液，测定各孔中OD492值； J-分析样品指标。样品指标判定标准阳性血清OD值(P)/标准阴性血清OD值(N) >5时，说明试验有效。样品血清OD 值(S)/N> 2时，样品为抗人T细胞阳性；1.5<S/N彡2，样品作用可疑，无法准确判断；S/ N彡1.5时，样品为抗人T细胞阴性。通过上述实施例1，实施例2，实施例3所述方法与步骤检测16个猪血清样品，其 OD492值如表一所示。其中标准阳性血清OD值(P)平均值为6. 2375，标准阴性血清OD值(N)平均值为 0.0175。P/N彡5，表示试验成立，试验结果有效。假若P/N< 5，则试验结果可疑，应重新进行检测，并认真检查试剂盒内各试剂组分含量是否正确。其中样品血清7、样品血清14，S/N ( 1. 5，经试验测定为抗人T细胞阴性。其中样品血清5，1. 5<S/N ^ 2，经试验测定为样品作用可疑。其余样品血清均有S/N > 2成立，则此类样品血清均为抗人T细胞阳性。表1 本专利技术试剂盒检测样品血清的OD值测定结果权利本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种猪抗人Ｔ细胞酶联免疫检测试剂盒包括包被酶标板、酶标抗原、抗猪酶标抗体、包被液、洗涤液、稀释液、封闭液、磷酸盐—柠檬酸盐缓冲液、底物溶液、终止剂，所述抗猪酶标抗体包括标准阳性血清和标准阴性血清。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张勤，
申请(专利权)人：湘潭陆峰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：43
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。