β地中海贫血突变检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种β地中海贫血突变检测试剂盒，特别是涉及利用一种不对称扩增的方法检测β-地中海贫血核苷酸多态性的试剂盒，该试剂盒包含一套特异性核苷酸多态性探针和扩增样品中靶基因的PCR引物，可以检测27种β-地中海贫血突变，并且检测过程更加快速，检测结果也更为准确。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种β地中海贫血突变检测试剂盒，特别是涉及利用一种不对称扩 增的方法检测β -地中海贫血核苷酸多态性的试剂盒，该试剂盒包含一套特异性核苷酸多 态性探针和扩增样品中靶基因的PCR引物，用于检测由于点突变引起的β -地中海贫血。
技术介绍
地中海贫血分为α -地中海贫血和β -地中海贫血(简称β _地贫)。β _地贫 是一种由β珠蛋白基因异常导致肽链表达失衡而产生的单基因遗传血液病，多由珠蛋 白基因点突变所致，是我国南方各省最常见、危害最大的遗传病之一，也是世界上最常见的 遗传性之一，据统计全世界约有1亿多人携带地中海贫血基因。我国广东、广西、四川、 香港、台湾北部、云南、贵州、海南、福建、湖南、湖北是地中海贫血的高发省区，在新疆 也有发现。我国部分省份的β-地中海贫血发生率见表1。表1我国部分省份的β -地中海贫血发生率权利要求1.一种β地中海贫血突变检测试剂盒，由PCR试剂、以尼龙膜为载体的低密度芯片、杂 交试剂组成，其特征在于PCR试剂中三对PCR引物序列分别为IF-β :5’ -AGTAGCAATTTGTACTGATGGTATGG-3’ 1R- β 5 ’ -CCCAGTTTCTATTGGTCTCCTTAAACC-3’ 2F- β 5，-GATAGGCACTGACTCTCTCTGC-3’ 2R- β 5，-GAACTTAACCATAGAAAAGAAGG-3， 3F- β 5 ’ -GTATCATGCCTCTTTGCACCATTC-3’ 3R-0 :5， -CACACAGACCAGCACGTTGCCCAGGAGC-3，。2.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于点在低密度芯片上的特异性探针的序列TATA32--N:5，-TGGGCATAAAAGTCAGTG-3’TATA32--M:5，-TGGGAATAAAAGTCAGGTG-3，TATA30--N:5，-GGCATAAAAGTCAGGGCTA-3，TATA30--M:5，-GGCACAAAAGTCAGGGCTA-3，TATA29--N:5，-GCATAAAAGTCAGGGCATG-3，TATA29--M:5，-GCATGAAAGTCAGGGCATG-3，TATA28--N:5，-GCATAAAAGTCAGGGCAGATG--3TATA28--M:5，-GCATAGAAGTCAGGGCAGATG--3Cap+I-N :5，-CTATCTATTGCTTACATTTG-3， Cap+I-M :5，-CTATCTATTGCTTCCATTTG-3， Cap40-43-N :5’ -GCAACCTCAAACAGACA-3’ Cap40-43-M :5’ -GCAACCTCAGACACCAT-3， Innitiation-N :5’ -CTAAACAGACACCATGGTG-3 Innitiation-M :5’ -CTAAACAGACACCAGGGTG-3 CD8-N :5’ -CTGAGGAGAAGTCTGC-3’ CD8-M :5’ -CTGAGGAGGTCTGCCG-3’CD8/9-N5’ -CTGAGGAGAAGTCTGC-3’CD8/9-M5’ -TGAGGAGAAGGTCTGC-3’CD14,/15-N5 ’ -TTACTGCCCTGTGGG-3’CD14,/15-M5 ’ -TTACTGCCCTGGTGG-3’CD17--N 5，-CTCCTGTGGGGCAAGGTGA-3‘CD17--M 5，-CTCCTGTGGGGCTAGGTGA-3‘CD19--N 5，-GGTGAACGTGGATGAAGTTAG--3CD19--M 5，-GGTGGACGTGGATGAAGTTAG--3CD26--N 5，-GTAAGTTGGTGGTGAGGC-3’CD26--M 5，-GTAAGTTGGTGGTAAGGC-3’CD27,/28-N5' -TGGTGAGGCCCTGG-3’CD27,/28-M:5’ -TGGTGAGGCCCCTG-3’CD30--N 5，-CTTAGGCTGCTGGTGGTCTAC--3CD30--M :5，-CTTAGGCTGCTGGTGGTCTAC-3CD31--N :5，-CTTAGGCTGCTGGTGGTC-3’CD31--M :5，-CCTTAGGTGCTGGTGGTC-3’CD37--N :5，-CCTTGGACCCAGAGGTTAC-3’CD37--M :5，-CCTTAGACCCAGAGGTTAC-3’CD41--N :5，-TGGACCCAGAGGTTCTTTG-3’CD41--M :5，-TGGACCCAGAGGTTTCTTTG-3’CD41,/42-N:5， -GGTTCTTTGAGTCCTTTG-3CD41,/42-M:5’ -GGTTGAGTCCTTTGGGGA-3CD43--N :5，-CTTTGAGTCCTTTGGGGACT-3’CD43--M :5，-CTTTTAGTCCTTTGGGGACT-3，71/72-Ν5’ -GGTGCCTTTAGTGATGG-3’71/72-Μ5’ -TCGGTGCCTTTTAGTGATG-3’CD95--N :5，-ACTGTGACAAGCTGCAC-3’CD95--M :5，-ACTGTGACAAAGCTGCAC-3，IVSI-I-N :5’ -GGCAGGTTGGTATCAAGT-3’ IVSI-I-M :5’ -GGCAGTTTGGTATCAAGT-3’ IVSII-I-N :5’ -GTTGGTATCAAGGTTACTA-3’ IVSII-I-M :5’ -GTTGCTATCAAGGTTACAA-3’ IVSII-5-N :5’ -GTAACTTCAGGGTGAGTCT-3’ IVSII-5-M :5’ -GTAACTTCAGGGTGACTCT-3’ IVSII-nt654-N :5’ -TAAGGCAATAGCAATATAC-3’ IVSII-nt654-M :5’ -TAAGGTAATAGCAATATAC-3’ 显色控制点5，-GCCGTAACCGTCACAATCCGT-3，。3.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于PCR试剂中上游引物lF-β、2F-i3、3F-i3 的终浓度为ΙμΜ，下游引物IR-β、2R-i3、3R-i3的终浓度为10 μ Μ。4.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于点在低密度芯片上的特异性探针的浓度为 5 μ M05.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于杂交试剂中杂交液I的组成为2XSSC， 0. 5% SDS，杂交液II的组成为0. 5XSSC,0. 5% SDS，辣根过氧化物酶的用量为0. IU。6.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于杂交试剂中显色底物包括TMB或0PD。全文摘要本专利技术涉及一种β地中海贫血突变检测试剂盒，特别是涉及利用一种不对称扩增的方法检测β-地中海贫血核苷酸多态性的试剂盒，该试剂盒包含一套特异性核苷酸多态性探针和扩增样品中靶基因的PCR引物，可以检测27种β-地中海贫血突变，并且检测过程更加快速，检测结果也更为准确。文档编号C12Q1/68GK102115781SQ20091021本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种β地中海贫血突变检测试剂盒，由ＰＣＲ试剂、以尼龙膜为载体的低密度芯片、杂交试剂组成，其特征在于ＰＣＲ试剂中三对ＰＣＲ引物序列分别为：１Ｆ－β：５’－ＡＧＴＡＧＣＡＡＴＴＴＧＴＡＣＴＧＡＴＧＧＴＡＴＧＧ－３’１Ｒ－β：５’－ＣＣＣＡＧＴＴＴＣＴＡＴＴＧＧＴＣＴＣＣＴＴＡＡＡＣＣ－３’２Ｆ－β：５’－ＧＡＴＡＧＧＣＡＣＴＧＡＣＴＣＴＣＴＣＴＧＣ－３’２Ｒ－β：５’－ＧＡＡＣＴＴＡＡＣＣＡＴＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＧ－３’３Ｆ－β：５’－ＧＴＡＴＣＡＴＧＣＣＴＣＴＴＴＧＣＡＣＣＡＴＴＣ－３’３Ｒ－β：５’－ＣＡＣＡＣＡＧＡＣＣＡＧＣＡＣＧＴＴＧＣＣＣＡＧＧＡＧＣ－３’。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李明，林炳生，张帆，陈华云，程钢，
申请(专利权)人：中山大学达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：81