本发明专利技术公开一种血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒及其制备方法和应用，所述的血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒，包括浓度为0.1～3μg/mL鼠抗人TNNI3K单克隆抗体水溶液、浓度为1～20μg/mL的羊抗鼠lgG(H+L)抗体水溶液、纳米银-羊抗鼠lgG(H+L)抗体的混合液、甘油的PBS缓冲液、带有深度和直径分别为0.5mm和6mm的小圈的载体。该血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒可以用于对血中TNNI3K的浓度进行检测，能检出0.08ngTNNI3K/点，并且耗时短，耗样量少。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开一种血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒及其制备方法和应用，所述的血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒，包括浓度为0.1～3μg/mL鼠抗人TNNI3K单克隆抗体水溶液、浓度为1～20μg/mL的羊抗鼠lgG(H+L)抗体水溶液、纳米银-羊抗鼠lgG(H+L)抗体的混合液、甘油的PBS缓冲液、带有深度和直径分别为0.5mm和6mm的小圈的载体。该血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒可以用于对血中TNNI3K的浓度进行检测，能检出0.08ngTNNI3K/点，并且耗时短，耗样量少。【专利说明】—种血中TNN13K的浓度的检测试剂盒及其制备方法和应用
本专利技术涉及一种血中ΤΝΝΙ3Κ的浓度的检测试剂盒及其制备方法和应用。
技术介绍
缺血性心脏病多由包括粥样硬化病变引致的冠状动脉梗阻或狭窄所致。由于缺血性心脏病有发病突然,死亡率高的特点,发病开始后数小时到24小时，3天到一周内的时间里的早期诊断和对应治疗是决定其救命率高低的主要因素。一般来说，虽然根据心电图S-T段的缺血性抬高和CPK，心肌肌钙蛋白I，T(cTnI, cTnT)，肌红蛋白(MB)升高等指标可以确诊，但依然有很多的病例难以很快就下以诊断。 特别是测定血清肌红蛋白(MB)虽可作为急性心肌梗死(AMI)诊断的早期最灵敏的指标，但特异性差，骨骼肌损伤、创伤、肾功能衰竭等疾病，都可导致其升高；心肌肌钙蛋白I，T(cTnI, cTnT)，有相对高的特异性，但在一些骨骼肌疾病血中同样也会增高。cTnl不但在急性心肌梗死病人血中增高,在急性肾衰血样标本也有升高。 由于心肌缺血，心肌梗死导致的不同程度的心肌细胞坏死而泄漏到血管中导致血中不同程度的TNNI3K浓度增高。目前血中TNNI3K浓度的检测主要采用酶标法测定，但该检测方法耗时较长、需要较多的血样及特殊的仪器等技术问题。
技术实现思路
本专利技术的之一为了解决上述的血中TNNI3K浓度的检测耗时较长、需要较多的血样及特殊的仪器等技术问题，而提供一种血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒。 本专利技术的目的之二在于提供上述的一种血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒的制备方法。 本专利技术的目的之三在于利用上述的血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒对血中TNNI3K的浓度进行检测的方法。 本专利技术的技术方案一种血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒，包括:(1)、浓度为0.1?3 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K单克隆抗体水溶液；(2)、浓度为I?20μ g/mL的羊抗鼠lgG(H+L)抗体水溶液；(3)、纳米银-羊抗鼠IgG(H+L)抗体的混合液所述的纳米银-羊抗鼠lgG(H+L)抗体的混合液中，按质量比计算，即纳米银:羊抗鼠IgG(H+L)抗体为 12.7:0.2 ~ 0.24 ；(4)、甘油的PBS缓冲液所述的甘油的PBS缓冲液，即将甘油加入到pH值为7.4磷酸氢二钠水溶液中混合均匀而得，其中甘油的体积百分比浓度为30% ；(5)、带有的小圈的载体所述的载体为孔径< 0.25 μ m的多孔的聚偏氟乙烯膜、硝酸纤维素膜、聚苯乙烯膜或乙酸纤维素膜；所述的小圈的直径为6mm、深度为0.5mm。 上述的一种血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒的制备方法，具体步骤如下:(1)、用蒸馏水将鼠抗人TNNI3K单克隆抗体溶解，配成浓度为0.1?3 μ g/mL的鼠抗人TNNI3K单克隆抗体水溶液；(2)、用蒸馏水将羊抗鼠lgG(H+L)抗体溶解，配成浓度为I?20μ g/mL的羊抗鼠lgG(H+L)抗体水溶液；(3)、纳米银-羊抗鼠IgG(H+L)抗体的混合液的制备①、纳米银溶液的制备用质量百分比浓度为I %的单宁酸溶液与质量百分比浓度为0.04%硝酸银水溶液按体积比计算，即1%单宁酸溶液:0.04%硝酸银溶液为16.5mL:50mL的比例混合后，搅拌条件下进行反应30min，所得的反应液用浓度为0.05?0.lmol/L的碳酸钾水溶液调节pH值为6.5?8.0，即得纳米银溶液；②、在步骤①所得的纳米银溶液中加入步骤(2)所得的浓度为I?20μg/mL的羊抗鼠IgG (H+L)抗体溶液，得到纳米银-羊抗鼠IgG (H+L)抗体的混合液；所述的纳米银-羊抗鼠lgG(H+L)抗体的混合液中，按质量比计算，即纳米银:羊抗鼠IgG(H+L)抗体为 12.7:0.2 ~ 0.24 ；(4)、甘油的PBS缓冲液的制备；将甘油加入到PH值为7.4磷酸氢二钠水溶液中混合均匀即得甘油的PBS缓冲液，其中甘油的体积百分比浓度为30% ；(5)、带有的小圈的载体的制备用打孔器在载体上压印出小圈；所述的载体为孔径< 0.25 μ m的多孔的聚偏氟乙烯膜、硝酸纤维素膜、聚苯乙烯膜或乙酸纤维素膜；所述的小圈的直径为6mm、深度为0.5mm。 利用上述的血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒对血中TNNI3K的浓度进行检测的方法，具体步骤如下:(1)、将甘油的PBS缓冲液从载体的正面滴加到载体的小圈中；(2)、待步骤(I)的甘油的PBS缓冲液渗入到载体后，再将鼠抗人TNNI3K单克隆抗体水溶液从载体的正面滴加到载体的小圈中；待鼠抗人TNNI3K单克隆抗体水溶液渗入到载体后，将阻断剂从载体的正面加入到载体的小圈中，待阻断剂渗入到载体后，将载体依次用洗液、蒸馏水洗涤3次；所述的阻断剂为质量百分比浓度为2-10%的牛血清白蛋白、明胶或牛奶的水溶液；所述的洗液为0.05 mol/L的磷酸氢二钠水溶液中加入Tween80、NaCl而得到的溶液，其中TWeen80的质量百分比浓度为0.5%，NaCl的质量百分比浓度为10% ；(3)、在两边有开口的塑料支撑体的上面放上吸水材料，然后再将步骤(2)处理后的载体的正面朝上，放在吸水材料上；所述的吸水材料为滤纸、脱脂棉、海绵或吸水纤维； (4)、用蒸馏水将待测的血样稀释6倍，将稀释后的血样从步骤(3)所得的载体的正面缓慢滴加到载体的小圈中；待血样渗入到载体后，将与稀释后的血样等体积的纳米银-羊抗鼠IgG(H+L)抗体的混合液从载体的正面缓慢加入到载体的小圈中；待纳米银-羊抗鼠IgG(H+L)抗体的混合液渗入到载体后，将载体依次用洗液、蒸馏水洗涤3次，然后将为稀释后的血样5倍体积的银染剂从载体的正面迅速加入到载体的小圈中，避光反应lmin，然后用蒸馏水洗去银染剂；所述的洗液为0.05 mol/L的磷酸氢二钠水溶液中加入Tween80、NaCl而得到的溶液，其中TWeen80的质量百分比浓度为0.5%，NaCl的质量百分比浓度为10% ；所述的银染剂为含有硝酸银和对苯二酚的水溶液，其中硝酸银的浓度为0.015mol/L和对苯二酚的浓度为0.075mol/L ；根据载体的小圈中出现均匀一致的灰黑色斑点颜色的深度，用比色法可得出血中TNNI3K的浓度。 本专利技术的有益效果本专利技术的一种血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒，由于采用了对鼠抗人TNNI3K单克隆抗体吸附能力强的载体、银标银染技术、用动态吸附取代静态吸附，从而解决了目前采用酶标法测定血中TNNI3K浓度的检测方法耗时较长、需要较多的血样及特殊的仪器等技术问题。 利用本专利技术的血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒对本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒，其特征在于所述的血中TNNI3K的浓度的检测试剂盒，包括：（1）、浓度为0.1～3μg/mL的鼠抗人TNNI3K单克隆抗体水溶液；（2）、浓度为1～20μg/mL的羊抗鼠lgG(H+L)抗体水溶液；（3）、纳米银‑羊抗鼠lgG(H+L)抗体的混合液所述的纳米银‑羊抗鼠lgG(H+L)抗体的混合液中，按质量比计算，即纳米银:羊抗鼠lgG(H+L)抗体为12.7:0.2～0.24；（4）、甘油的PBS缓冲液所述的甘油的PBS缓冲液，即将甘油加入到pH值为7.4磷酸氢二钠水溶液中混合均匀而得，其中甘油的体积百分比浓度为30%；（5）、带有的小圈的载体所述的载体为孔径≤0.25μm的多孔的聚偏氟乙烯膜、硝酸纤维素膜、聚苯乙烯膜或乙酸纤维素膜；所述的小圈的直径为6mm、深度为0.5mm。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘小珍，朱婉婉，刘小舟，赖仲方一，陈捷，
申请(专利权)人：上海应用技术学院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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