静止型α－地中海贫血基因特有单核苷酸变异及单体型制造技术

本发明专利技术公开了静止型α－地中海贫血基因所特有单核苷酸变异及单体型，相对于正常人α珠蛋白基因簇同源序列具有与静止型α－地中海贫血基因连锁的单核苷酸变异及单体型，可应用于静止型α－地中海贫血诊断方法学和进化机制的研究。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及静止型α-地中海贫血(以下简称α-地贫)基因特有的单核苷酸变异及其构成的单体型。α-地贫是世界上发病率最高的人类单基因遗传病之一，其分子病理特征为α珠蛋白肽链合成的缺失或减少而导致α/β类珠蛋白肽链失衡。α珠蛋白基因簇位于16号染色体短臂末端上，各基因排列次序为5’-ζ2-ψζ1-ψα2-ψα1-α2-α1-θ1-3’。两个重要的功能基因α2和α1处于两个高度同源的重复单元中。这些单元都包含三个同源的片断(依次为X、Y和Z盒)，这三个同源片断又被三个非同源区(I、II和III)所分隔。静止型α-地贫是指由于人的两条16号染色体中的一条染色体存在一个α基因的缺失或非缺失突变，所造成的一种无明显血液学变化的贫血症。静止型α-地贫基因携带者一般无贫血的临床症状，更容易被忽视，但两个静止型α-地贫基因携带者之间或静止型与标准型α-地贫基因携带者婚配时则可能产生标准型地贫或HbH病地贫患儿。-α3.7和-α4.2是最常见的两种静止型α-地贫基因类型，-α4.2又可以分为两种亚型-α4.2型和-αHbQ-4.2型。在减数分裂时，16号同源染色体在两个Z盒发生错配和不等交换，导致α2和α1之间缺失约3.7kb片断，产生一条只含一个α2/α1融合基因(-α3.7)的染色体和一条含αααanti3.7基因的染色体。在减数分裂时，16号同源染色体在两个X盒发生错配和不等交换，导致α2和α1之间缺失约4.2kb片断，产生一条只含一个α1基因(-α4.2)的染色体-α4.2和一条含αααanti4.2基因的染色体。详见附附图说明图1。目前对α-地贫尚无理想的治疗方法，地贫患儿的出生会给社会和家庭造成严重负担，应用DNA分析技术对该病进行早期产前诊断和选择性终止妊娠以防止重症胎儿出生，是国际上公认的首选办法。分析研究静止型地贫基因对于诊断静止型α-地贫和研究α-地贫基因的进化机制有着重要的理论价值和实际意义。本专利技术的目的是提供静止型α-地贫基因特有的单核苷酸变异及由该单核苷酸变异所构成的单体型。为了达到上述目的，本专利技术针对静止型α-地贫基因特点，应用了基因信息学、聚合酶链式反应(PCR)和DNA序列测定等技术。在扩增获得静止型α-地贫基因-α3.7、-α4.2和-αHbQ-4.2的基础上，对这三种基因进行了DNA测序，将测序结果与NCBI(National Center For BiotechnologyInformation)DNA序列工作组中的正常人及中国人野生型α-珠蛋白基因簇同源区的基因序列进行了比较。静止型α-地贫基因特有的单核苷酸变异及其单体型，相对于正常人α珠蛋白基因簇同源序列具有与静止型α-地贫基因连锁的特性。为了比较静止型α-地贫基因与正常人α基因的差异，NCBI DNA序列工作组中的正常人α基因序列NG_000006(Homo sapiens genomic alphaglobin region(HBA@)on chromosome 16，NG_000006，NG_000006.1GI14523048)中与静止型α-地贫基因同源的片断被截取出来。NG_000006中相对应于所测-α3.7基因序列的片断是SEQ ID NO.9，从nt32792至nt34481；SEQ ID NO.10，从nt36604至nt38293。NG_000006中相对应于所测-α4.2和-αHbQ-4.2基因序列的片断是SEQ ID NO.23，从nt30176至nt31689；SEQ ID NO.24，从nt34433至nt35946。静止型α-地贫基因-α3.7具有如序列表中的SEQ ID NO.1- SEQ IDNO.8所示的序列。在所测-α3.7基因序列的nt698为T，而SEQ ID NO.9相应位置nt33499为C，SEQ ID NO.10相应位置nt37303为C。静止型α-地贫基因-α4.2具有如序列表中的SEQ ID NO.11-SEQ IDNO.19所示的序列，与正常人α珠蛋白基因NG_000006两段同源序列SEQ IDNO.23和SEQ ID NO.24进行比较。在所测-α4.2基因序列的nt507为G，SEQ ID NO.23在相应位置nt30682为A，SEQ ID NO.24在相应位置nt34939为G；在所测-α4.2基因序列的nt542为C，SEQ ID NO.23在相应位置nt30717为T，SEQ ID NO.24在相应位置nt34974为C；在所测-α4.2基因序列的nt611为C，SEQ ID NO.23在相应位置nt30786为T，SEQ ID NO.24在相应位置nt35043为C；在所测-α4.2基因序列的nt1052为C，SEQ ID NO.23在相应位置nt31227处为C，SEQ ID NO.24在相应位置nt35483处为T；在所测-α4.2基因序列的nt1080为A，而SEQ ID NO.23相应位置nt31255为G，SEQ ID NO.24相应位置nt35511为G；在所测-α4.2基因序列的nt1099-nt1104为TCCCCT，SEQ ID NO.23相应位置nt31274-nt31280为TCCCCCT，SEQ ID NO.24相应位置nt35530-nt35535为TCCCCT。静止型α-地贫基因-αHbQ-4.2具有如序列表中的SEQ ID NO.20-SEQ IDNO.22所示的序列，与正常人α珠蛋白基因NG_000006两段同源序列SEQ IDNO.23和SEQ ID NO.24进行比较。在所测-αHbQ-4.2基因序列的nt507为A，而SEQ ID NO.23相应位置nt30682为A，SEQ ID NO.10相应位置nt34939处为G；在所测-αHbQ-4.2基因序列的nt542为T，而SEQ ID NO.23相应位置nt30717为T，SEQ ID NO.24相应位置nt34974为C；在所测-αHbQ-4.2基因序列的nt611为T，SEQ ID NO.23在相应位置nt30786为T，SEQ IDNO.24在相应位置nt35043为C；在所测-αHbQ-4.2基因序列的nt1052为T，而SEQ ID NO.23相应位置nt31227为C，SEQ ID NO.24在相应位置nt35483为T；在所测-αHbQ-4.2基因序列的nt1080为G，SEQ ID NO.23在相应位置nt31255为G，SEQ ID NO.24在相应位置nt35511为G；在所测-αHbQ-4.2基因序列的nt1099-nt1114为TCCCCT，而SEQ ID NO.23相应位置nt31274-nt31280为TCCCCCT，SEQ ID NO.24相应位置nt35530-nt35535为TCCCCT。-α3.7和-α4.2地贫是由于基因缺陷所致，Sothern blotting是分析此类缺陷的可靠技术，但是其操作繁琐，费时较长，不适于作为常规诊断技术。目前诊断-α3.7和-α4.2的技术主要是跨越断裂点的PCR(Gap-PCR)。α珠蛋白基因簇结构和组成的特殊性，即α基因间的高度同源性和高G+C含量，使PCR引物设计受到很大限本文档来自技高网...

【技术保护点】
静止型α－地中海贫血基因特有单核苷酸变异及单体型，其特征是：相对于正常人α基因同源序列具有与静止型α－地中海贫血基因连锁的单核苷酸变异及单体型。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：欧阳鸿，赵永忠，徐湘民，
申请(专利权)人：中国人民解放军第一军医大学，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]