调节病毒载体所携带的基因的表达的方法技术

本发明专利技术的发明专利技术者揭示了非甾体类抗炎药物和肌肉松弛剂可抑制病毒载体上所携带的基因的表达。这些制剂也抑制病毒载体的细胞毒性。本发明专利技术提供了一种方法，该方法通过使用非甾体类抗炎药物和／或肌肉松弛剂调节病毒所携带的基因的表达。这些制剂的效果是可逆的，并且在停止给药后病毒载体的基因表达和细胞毒性都会增强。本发明专利技术的制剂对于调节病毒基因和治疗性基因的表达，以及在采用病毒载体的基因治疗中抑制病毒载体的细胞毒性是有用的。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种方法，该方法通过使用非甾体类抗炎药物及诸如此类的药物，来调节病毒载体上所携带的基因的表达。
技术介绍
病毒载体已被应用于许多基因转移的方法，包括基因治疗，因为它们能将基因高效转入细胞中，并因此有助于转入基因的高表达。但是，目前不知道哪些方法可用于调节通过病毒载体转入细胞的基因的表达。开发用于调节病毒载体所携带的基因的表达，或是用于降低其细胞毒性的方法，是令人期待的。Chen等报告了阿司匹林(aspirin)抑制水泡性口炎病毒(VSV)的复制(Chen，N.等.，Virology 276，44-51(2000))。但是，Chen等并没有揭示阿司匹林对于VSV病毒上所携带的基因的表达的影响。同样地，Chen等没有建议应用阿司匹林来调节基因转移中所用载体上所携带的基因的表达，也没有检验去除阿司匹林时，是否可能可逆地调节病毒复制。在近几年里，病毒的基因操作已经促进了能在肿瘤细胞中增殖、但在正常组织中无致病性的增殖型病毒载体的发展。在这些增殖型病毒中，单纯疱疹病毒(HSV)，腺病毒和呼肠孤病毒正引起关注。免疫基因治疗和自杀基因治疗作为提高增殖型病毒充当基因表达载体的效果的方法正在吸引关注。另有人研究了组织特异性启动子在提高增殖型载体的特异性方面的用途(Fujidou，N.，Gene diagnosis and therapy for brain tumors，Front line genetherapy research，Brain tumor treatment using multipliable viral vectors，Nounokagaku(Brain Science)，Vol.23，No.5,379-387,2001)。作为一种载体，HSV的特点在于它可以瞬时表达目的基因，并且可以转染进非分裂细胞，如神经细胞。HSV载体引起关注是因为它使以下各项成为可能1)应用HSV破坏细胞的能力；2)使用攻击特定肿瘤细胞的肝癌细胞特异性改良HSV病毒株；3)使用缺失型HSV病毒株，该病毒株使用扩增子质粒和辅助HSV(Miyatake，S.，Development and prospects of viral vectors used for gene therapy，Herpes Simplex Virus as a vector for gene therapy，Virus，Vol.47，No.2239-246，1997)。病毒载体如单纯疱疹病毒、腺病毒和呼肠孤病毒的优点是可被积极地应用于细胞毒治疗中。但是，没有细胞就不能生产出这些载体，并且因此，当为了医学应用而大量生产时因为培养细胞不能提供充足数量的这些病毒，它们的优点就成了缺点。如果在细胞培养过程中可以使用调节细胞毒性的药物，那么添加药物有望产生病毒。
技术实现思路
本专利技术提供了一种方法，该方法使用非甾体类抗炎药物(NSAID)或/和肌肉松弛剂来调节病毒载体上所携带的基因的表达。本专利技术也提供了调节病毒载体上所携带的基因的表达的制剂。本专利技术人深入研究了将不同药物应用于哺乳动物(包括人)对病毒载体所携带的基因表达的影响。令人惊讶的是，研究结果显示NSAID和肌肉松弛剂具有显著抑制病毒载体所携带的基因的表达的活性。在转染有病毒载体的细胞中，显示此载体所携带的基因的表达被所有试验的NSAID显著抑制，包括阿司匹林、酮洛芬(ketoprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、吲哚美辛(indomethacin)、双氯芬酸(diclofenac acid)和甲芬那酸(mefenamic acid)。罂粟碱(papaverin)，一种平滑肌松弛剂，也强烈抑制病毒载体所携带的基因的表达。这些制剂对由载体转移造成的细胞毒性的影响作用，可以在已被病毒载体转移的细胞中检测。结果表明，在这些细胞中，阿司匹林、酮洛芬、氟比洛芬以及吲哚美辛在减少细胞损伤上非常有效。在上述药物中，阿司匹林和酮洛芬在抑制细胞毒性方面尤其有效。对于病毒载体携带基因的表达抑制的深入研究揭示出，阿司匹林的抑制作用是暂时的，在停止用药后的几天内消失。这说明给药本专利技术的制剂，可以可逆调节病毒载体携带基因的表达，或调节病毒载体的细胞毒性。因此，当调节不再是必需的时候，对本专利技术制剂的给药可以停止，继而病毒载体表达的调节作用可以被逆转。按要求停止使用该制剂，病毒载体携带基因的表达可以恢复。因此，采用本专利技术，可以实现对病毒载体所携带的基因的表达进行的动态调节。本专利技术的药物可以快速调节病毒载体所携带的基因，如在临床安排(如基因治疗)中由病毒载体转移的治疗性基因的表达水平和细胞毒性。本专利技术涉及一种使用非甾类抗炎症药物(NSAID)和/或肌肉松弛剂，还涉及调节病毒载体所携带的基因的表达的药物。更具体地，本专利技术涉及(1)一种抑制病毒所携带的基因的表达的方法，包括将非甾类抗炎症药物和/或肌肉松弛剂与被该病毒载体转染的细胞相接触的步骤；(2)(1)的方法，其中病毒载体的细胞毒性被减弱；(3)(1)的方法，其中的非甾类抗炎症药物是从包括阿司匹林、酮洛芬、氟比洛芬、吲哚美辛、双氯芬酸和甲芬那酸的组群中选出来的；(4)(3)的方法，其中的非甾类抗炎症药物是从包括阿司匹林、酮洛芬、氟比洛芬和吲哚美辛的组群中选出来的；(5)(4)的方法，其中的非甾类药物是阿司匹林和/或酮洛芬；(6)(1)的方法，其中的肌肉松弛剂是罂粟碱；(7)(1)～(6)的任一个方法，其中病毒载体是负链RNA病毒载体；(8)(7)的方法，其中的负链RNA病毒是副粘病毒；(9)(8)的方法，其中的副粘病毒是仙台病毒；(10)一种抑制病毒载体所携带的基因的表达的制剂，其中该制剂包括非甾体抗炎症药物和/或肌肉松弛剂；和(11)(10)的制剂，其中该制剂具有减弱该病毒载体细胞毒性的能力。本专利技术提供了用于。特别是，本专利技术的方法包括将NSAID和/或肌肉松弛剂与被病毒载体转染的细胞相接触的步骤。NSAID和/或肌肉松弛剂没有限制，所需NSAID和/或肌肉松弛剂可以单独使用或多重混合。术语“非甾类抗炎症药物”(NSAID)是一般性术语，指除甾类外的一类具有抗炎症作用的药物，也称“阿司匹林类药物”(Goodman & Gilman′s ThePharmacological Basis ofTherapeutics，p.775)。特别是，酸性NSAID已知可以抑制前列腺素生物合成(Vane，J.R.and Botting，R.，FASEB J.1，89-96(1987)；Vane，J.R.，Nat.New Biol.231(25)，232-235(1971))。NSAID包括，例如水杨酸型(阿司匹林盐诸如水杨酸、阿司匹林以及阿司匹林DL赖氨酸、二磺酰基)，烯丙基乙酸型(吲哚美辛、双氯芬酸、舒林酸(sulindac)、萘丁美酮(nabumetone)、丙谷炎痛(progulumethacin)、法呢基吲哚美辛以及依托度酸(etodolac))，丙酸型(布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、氟比洛芬、噻洛芬(tiaprofen)、普拉洛芬(pranoprofen)、洛索洛芬(loxoprofen)、aluminopro本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于抑制病毒载体所携带的基因的表达的方法，包括将非甾类抗炎症药物和／或肌肉松弛剂与被该病毒载体转染的细胞相接触的步骤。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：井上诚，饭田章博，长谷川护，
申请(专利权)人：株式会社载体研究所，
类型：发明
国别省市：JP[日本]