本发明专利技术涉及生物医药领域，具体涉及到一种在临床样本中快速检测泰国型α-地中海贫血基因型的试剂盒。本发明专利技术的技术方案为提供一种泰国型α-地中海贫血的基因检测试剂盒，包括PCR反应液，所述PCR反应液包括上游引物THAI-F和下游引物THAI-R，所述引物为针对泰国型α-地贫的断裂点位置上游10724-10725位置，下游1219-1220位置，在断裂点上游5’端和下游3’端分别设计的引物。本发明专利技术的试剂盒可以降低普通血液筛查法造成的α-地贫的漏查，减少或避免重型α-地贫患儿的出生，为更全面的地贫筛选创造了条件。本发明专利技术的试剂盒使用方便、准确度高，能对地贫高发区产生良好的社会效益和经济效益。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及到一种在临床样本中快速检测泰国型α -地中海贫血基因型的试剂盒。
技术介绍
α -地中海贫血“thalassemia”(简称α -地贫)是一种常染色体隐性遗传病，是世界上最常见的人类单基因遗传病之一，被世界卫生组织列入危害人类健康的6种常见病。该疾病是由于珠蛋白基因序列的缺失或突变，导致α-珠蛋白肽链合成障碍，使α-珠蛋白肽链合成减少或不能合成引起的，使组成珠蛋白的α链和β链合成失去平衡而导致的溶血性贫血病。人类α珠蛋白基因簇位于16号染色体ρ13. 3，长约40kb，每条染色体各有2个α珠蛋基因，一对染色体共有4个α珠蛋白基因；大多数α地贫是由于α珠蛋白基因的缺失所致，少数由基因点突变造成。就一个单倍体个体而言，根据α珠蛋白合成减少的程度，可将α地贫分为两类缺陷一类为α地贫1(α°_地贫)，特点是缺失2个α基因，α珠蛋白合成完全受阻，我国较常见的为东南亚缺失型地贫(一SEA); 二类为α地贫2(α+_地中海贫血)，由一个α基因发生突变或缺失引起的。我国大约80%的α地中海贫血是由编码α蛋白的基因(02或/和0 1)缺失所致；最常见的缺失类型为-037、-042、--砠3种。随着α -地贫机制的进一步阐明，一些新的基因缺失类型相继被发现，例如一111、-α 2_4、-α 2_7、菲律宾型α地贫(一m)、泰国型α地贫(一Thai)和(香港型α地贫)HK α α等。自从Boonsa等报道了(一Thai)以来，陆续有病例被检出。泰国型α-地贫基因缺失片段比东南亚基因缺失地贫(一SEA)片段还要长，在临床上可以形成中重型α地中海贫血，即泰国型缺失的HbH病和泰国型缺失的巴氏水肿胎。由于泰国型的血液学特征与东南亚缺失型α地贫一致，均表现出小细胞低色素，MCV降低和MCH降低等，因而可能造成误诊和漏诊，继而造成泰国型缺失的HbH病和泰国型缺失的巴氏水肿胎儿的出生。因此，开展泰国型α -地贫(--Thai)检测对遗传咨询及产前诊断具有重要意义。现有α-地贫检测技术主要有血常规检测、红细胞脆性检测、血红蛋白电泳等，这些方法的缺陷是只能对患者进行初步的地贫筛查，无法对患者基因型进行确诊，而且对轻型地贫容易漏诊，造成下一代重症地贫患儿的出生。近年来出现了根据α-地贫基因确诊的方法，检测方法有Southern杂交、多重Gap-PCR、多重连接酶依赖探针扩增技术(MLPA)、实时荧光定量PCR、反向点杂交、直接测序技术等方法，各基因诊断方法简述如下(l)Southern杂交技术Southern印记杂交技术和放射性同位素标记的α、β珠蛋白基因探针进行杂交，根据图谱，可鉴别诊断^-地贫1、^-地贫2、册!1病、8&1^' s水肿胎等。该方法虽然准确性较高但操作繁琐、费时费力、DNA需求的量大、需要放射性标记，且不能应用于非缺失基因的检测，因而一般只适合研究使用，不适于临床的推广应用。(2)依赖探针连接扩增技术(MLPA) :MLPA是2002年发展起来的常用于α地贫缺失基因的检测，但由于检测成本高，操作繁琐，耗时较长，检测流程长达16小时，且需要特殊的仪器设备，一般只用于研究使用，不便于分子筛查方法的推广应用。(3)测序技术测序技术直接对DNA序列的分析，一直被认为是临床检测的金标准；目前测序技术面临着标本的处理(核酸提取)、扩增标准化认证问题，信号检测、测序平台特异的出错和纠错问题，以及生物信息学方面可能出现的问题，临床验证程序和标准化问题等，一直没有有效的解决，因此还未能在临床中推广应用。(4)反向点杂交(Reverse Dot Blot，RDB):本法是在PCR扩增的基础上，将已标记在引物上的PCR产物与固定在膜条上的特异性探针杂交，再通过激发荧光或一系列显色反应观察结果。这种方法灵敏，但耗时较长，一般用于点突变检测。(5) Gap-PCR及其改进的技术80年代PCR技术专利技术以来，由于其操作简单，此技术广泛用于地贫的分子诊断，在缺失区域两端设计一对引物，正常情况下两引物扩增产物很长不属于扩增的范围，而出现缺失区域的时候能出现特异性的扩增。1990年Lebo等应用PCR技术检测α -地贫1，Dode和Baysal等应用PCR技术检测α -地贫2。目前市场上以Gap-PCR开发的试剂盒只能检我国最常见的3种缺失型a地贫(-α 3_7、- α 4 2和--SEA)。(6)实时荧光定量PCR (Taqman探针法)实时荧光定量PCR是目前临床诊断系统最受欢迎的检测平台，在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积，实时监测PCR进程及连续分析扩增产物相关的荧光信号，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在地中海贫血检测中，局限于一种基因型的检测，工作量大；探针需要荧光标记，检测成本高。现有产品及专利相关专利为《用于诊断地中海贫血的DNA芯片及其制备方法》、《诊断α-地中海贫血的核酸膜条及试剂盒》和《用于诊断地中海贫血的核酸杂交膜条及试剂盒》，这些专利与本申请专利技术专利不属于同一个技术平台，与本申请专利技术相关的已经公开或者有权的专利的相关统计对比见表I。表I权利要求1.一种泰国型α-地中海贫血的基因检测试剂盒，其特征在于，包括PCR反应液，所述PCR反应液包括上游引物THAI-F和下游引物THAI-R，所述引物为针对泰国型α -地贫的断裂点位置上游10724-10725位置，下游1219-1220位置，在断裂点上游5’端和下游3’端分别设计的引物。2.根据权利要求I所述的泰国型α-地中海贫血的基因检测试剂盒，其特征在于，所述上游引物THAI-F的核苷酸序列为SEQ ID NO : 1，所述下游引物THAI-R的核苷酸序列为SEQID NO 2ο3 根据权利要求2所述的泰国型α-地中海贫血的基因检测试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液中上游引物THAI-F和下游引物THAI-R的浓度相等为O. 1-1 μ M，MgCl2浓度为I. 5mM-5mM, dNTP的浓度为100nM_300nM，DNA聚合酶的浓度为1-5U/反应。4.根据权利要求I所述的泰国型α-地中海贫血的基因检测试剂盒，其特征在于，所述的PCR反应液各组分含量为去离子水10μ L ;·5 X Q buffer 5 μ L ；10XCoralLoad PCR Buffer :2.5 μ L ;·2. 5mM dATP、dCTP、dGTP、dTTP 的等体积混合液2μ L ；ΙΟμΜ 引物 THAI-F:0.5yL;ΙΟμΜ 引物 THAI-R:0.5yL;5U/ μ L Hotstar Taq 0. 5 μ L。全文摘要本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及到一种在临床样本中快速检测泰国型α-地中海贫血基因型的试剂盒。本专利技术的技术方案为提供一种泰国型α-地中海贫血的基因检测试剂盒，包括PCR反应液，所述PCR反应液包括上游引物THAI-F和下游引物THAI-R，所述引物为针对泰国型α-地贫的断裂点位置上游10724-10725位置，下游1219-1220位置，在断裂点上游5’端和下游3’端分别设计的引物。本专利技术的试剂盒可以降低普通血液筛查法造成的α-地贫的漏查，减少或避免重型α-地贫患儿的出生，为更全面的地贫筛本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种泰国型α?地中海贫血的基因检测试剂盒，其特征在于，包括PCR反应液，所述PCR反应液包括上游引物THAI?F和下游引物THAI?R，所述引物为针对泰国型α?地贫的断裂点位置上游10724?10725位置，下游1219?1220位置，在断裂点上游5’端和下游3’端分别设计的引物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李长远，梁少明，刘晶晶，任维，
申请(专利权)人：亚能生物技术深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：
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