The invention discloses a method for detecting multiple mutant loci of a gene and a special kit thereof. Methods the detection of gene mutation sites for the detection of mitochondrial 12S rRNA gene of 1555 A, 1494 G and / or C to T mutation, the primers used for primer sequences were 3, sequence 1 in the sequence table, a sequence of 2 or 3 sequences with 3 primers; the PCR amplification, amplification and melting curve detection of product PCR, such as the melting temperature of 79.4 melting peaks, while human mitochondrial 12S rRNA gene 1555 point mutation, the mutation types of A, such as G; melting temperature of 76.6 melting peaks, while human mitochondrial 12S rRNA gene 1494 point mutation. The types of mutations of C to T. The invention also discloses a special reagent kit for detecting multiple mutation sites of the gene.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测基因多突变位点的方法及其专用试剂盒。
技术介绍
碱基突变是人类基因组突变中很重要的一种类型，很多碱基突变都与疾病的发 生有密切的关系，因此检测某些位点突变信息，对疾病的临床诊断和指导临床治疗 有着重要的意义。氨基糖甙类抗生素包括庆大霉素、链霉素、卡那霉素、妥布霉素等，因其对革 兰氏染色阴性细菌的感染特别有效，同时对于某些革兰氏阳性细菌也有协同抗菌作 用。因此被广泛应用临床治疗。但是该类药物有严重的耳毒性副作用，使用时可能 会造成听力不可逆转的损伤。线粒体12SrRNA基因是氨基糖式类抗生素导致的非综合征型听力损失的一个突 变热点区域。在这些突变位点中，位于12SrRNA基因高度保守的解码区的同质性的 A1555G和C1494T突变与耳聋相关，这两个突变导致很多患者的氨基糖甙类抗生素中 毒性耳聋。A1555G突变和C1494T突变会在12SrRNA基因的高度保守的A位形成新的 1494C—G1555或1494U—A1555碱基对。这些改变使得12SrRNA在二级结构上与细菌 的16srRNA的相应区域的二级结构更加相似。因此，由于C1494...
【技术保护点】
一种检测基因多突变位点的方法，其特征在于：包括以下步骤：１）针对待检测基因的两个或两个以上突变位点分别设计相应的突变型引物对，使ＰＣＲ扩增得到的目的片段满足以下两个条件：ａ）只包括一个突变位点，ｂ）ＰＣＲ扩增得到的两个或两个以上的目的片段的Ｔｍ值均相差２℃以上；所述突变型引物对的正向引物或反向引物的３′末端碱基与待扩增的突变位点的突变型碱基完全匹配，与待检测的突变位点的野生型碱基完全匹配； ２）用步骤１）的引物对进行ＰＣＲ扩增，检测ＰＣＲ扩增产物的熔解曲线，根据熔解峰的 有无来判断是否有突变的发生。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王思贤，高华方，侯伟，程京，
申请(专利权)人：博奥生物有限公司，清华大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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