趋化因子受体88-2B[CKR-3]和88C及其抗体制造技术

本发明专利技术提供编码趋化因子受体８８－２Ｂ或８８Ｃ的多核苷酸，并提供重组生产这两种细胞因子受体的材料和方法。本发明专利技术还提供用这两种多核苷酸方便地鉴别趋化因子受体配体和调节因子的试验方法。受体片断、配体、调节因子和抗体可用于检测和治疗与趋化因子受体相关的疾病，如动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、肿瘤生长抑制、哮喘、病毒感染、艾滋病及其它炎症情况。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术总的来讲涉及信号传导途径。具体地讲，本专利技术涉及趋化因子受体、编码趋化因子受体的核酸、趋化因子受体的配体、趋化因子受体活性的调节因子、识别趋化因子和趋化因子受体的抗体、鉴别趋化因子受体配体和调节因子的方法、生产趋化因子受体的方法以及生产鉴别趋化因子受体的抗体的方法。
技术介绍
最近，分子生物学的进展使人们认识到信号传导途径在生物过程中的中心地位。这些信号传导途径组成了多细胞机体中单个细胞之间相互传递信息的主要手段，机体籍此协调各种生物过程。见Springer，《细胞》(Cell)，76306-314(1994)，表I为一个模型。一条因有细胞内鸟嘌呤结合蛋白的参与而以之命名的信号传导途径，影响着广泛的生物过程。Lewin对G-蛋白信号传导途径进行了概括性的讨论，他认为G-蛋白信号传导途径至少含有以下成分一个细胞外信号(如神经递质、肽类激素、有机分子、光和气味分子)、一个信号识别受体(G-蛋白偶联受体，见Probst等综述，《DNA和细胞生物学》(DNA and Cell Biology)，111-20，即通常所说的GPR和GPCR)以及一个细胞内GTP-结合蛋白即G蛋白的异源三聚体。这些信号传导途径因在白细胞迁移中所起的作用而尤其引人注目。白细胞包含一组具有迁移能力的血细胞类型，这些血细胞类型包括粒细胞(即嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞)、淋巴细胞和单核细胞。在迁移和活化后，这些细胞主要参与机体对异物的防御。由于其参与正常生理过程和病理过程的多样性，白细胞的防御作用非常复杂，例如白细胞在应答感染的正常炎症反应中起作用，但也参与多种病理性炎症。详见Schall等，《现代免疫评论》(Curr.Opinion.Immunol)，6865-873(1994)。在不同的生物过程中，每种白细胞所起作用的程度、种类、持续时间都各不相同。在研究这些免疫反应时，研究者们最初的注意力主要集中在作用于白细胞的信号上，这是因为任何种类应答的诱导都需要一个信号。Murphy对一类重要的白细胞信号-多肽信号的成员进行了综述。有一类多肽信号包含趋化因子(化学吸引细胞因子)，Oppenheim等人称之为Intercrine。除Oppenheim等人外，Baggiolini等人还列出了数目不断增加的已经鉴定和进行遗传学及生物化学分析的趋化因子。通过比较已知趋化因子的氨基酸顺序得到一种分类方法，可将趋化因子分为两个家族α家族趋化因子的特征是头两个胱氨酸残基被一个氨基酸残基间隔开(CXC，指N-末端)；而在β家族中这两个胱氨酸残基则直接相连(CC)，见上文Baggiolini等。已经发现了趋化因子与对其信号产生应答的特定白细胞类型之间的关系。Schall等人(见上文)报导说CXC趋化因子一般影响嗜中性粒细胞；而CC趋化因子倾向于影响单核细胞、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞。例如Baggiolini等人(见上文)报导RANTES(一种CC族趋化因子)可作为单核细胞、淋巴细胞(即记忆T细胞)、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞的化学吸引剂，并诱导嗜碱性粒细胞中组胺的释放，但不能对嗜中性粒细胞产生趋化作用。最近，Cocchi等人报导趋化因子是HIV增殖的抑制剂。他们证明RANTES、MIP-1α和MIP-1β能抑制HIV-1、HIV-2和SIV在一种名为PM1的CD4+细胞系和人外周血单核细胞原代培养物中的感染。然而最近研究重点已转向结合趋化因子的细胞受体，因为细胞外的趋化因子看起来不加区别地与细胞接触，因而缺乏调节单个白细胞种类所需的特异性。Murphy(见上文)报导，GPCR受体超家族包含趋化因子受体家族。典型的趋化因子受体结构包括一个位于N-末端的胞外趋化因子结合区域；接着是七个被间隔开的疏水区域，这种疏水区域主要由能形成跨膜α-螺旋的疏水氨基酸组成；亲水区域位于α-螺旋之间，它们或在细胞内或在细胞外。这些特征使嵌于膜上的趋化因子受体呈螺旋状结构。趋化因子受体通常以胞内区的第三环与G-蛋白作用。另外，Murphy(见上文)还指出，胞内的羧基末端也能与G-蛋白作用。首先用分子克隆技术获得分析的趋化因子受体是两个人IL-8的嗜中性粒细胞受体，IL-8为一种CXC趋化因子。Homels等人Mur等人报导克隆了这两个IL-8的受体。Lee等人对编码这两个受体的cDNA进行了分析，发现它们之间有77％的氨基酸相同并都具有G-蛋白偶联受体家族的特征。其中一个受体是IL-8特异性的，而另一个可与IL-8、gro/MGSA、和NAP-2结合并传导信号。对IL-8受体基因进行的基因操作增进了我们对这些受体生物学作用的了解。例如，Cacalano等人报导小鼠中IL-8受体同系物的缺失将导致淋巴结病和脾大等多种表型的出现。另外，Leong等人对错义突变所做的一项研究揭示了IL-8受体中与IL-8结合至关重要的氨基酸。Murphy(见上文)对结构域置换实验所做的讨论暗示胞外氨基末端结构域决定了结合的特异性。CC族趋化因子中也已有数个受体得到鉴定和克隆，CCCKR1可与MIP-1α和RANTES结合并都导致钙离子内流。Charo等人报导了另一个趋化因子受体-MCP-R1(CCCKR2)，MCP-R1由单一基因编码但可产生两种剪接变体，这两种剪接变体的差异位于羧基端结构域，这种受体除可与MCP-1结合和产生应答外，还可与MCP-3结合并产生应答。还发现了一个能不加区别地与CXC趋化因子和CC趋化因子结合的受体。这种受体最初是在红细胞上发现的，Horuk等人报导它可与IL-8、NAP-2、GROα、RANTES、和MCP-1结合。这种红细胞趋化因子受体与其它趋化因子受体有大约25％的同源性，可帮助调节循环中趋化因子的水平或协助将趋化因子呈递给靶细胞。除与趋化因子结合外，红细胞趋化因子受体还可作为间日疟原虫的受体，这种疟原虫是疟疾(id)的一个主要原因。另一个与趋化因子受体关系密切的G-蛋白偶联受体-血小板活化因子受体也可作为人类病原体(肺炎链球菌)的受体。除哺乳动物的趋化因子受体外，还发现了两种病毒的趋化因子受体同系物.Ahuja等人报导了Herpesvirus saimiri的一个基因产物，该产物与IL-8受体有30％的同源性并能与CXC族趋化因子结合。Neote等人报导人巨细胞病毒的一个基因可编码与CC族趋化因子受体有大约30％同源性的受体，该受体可与MIP-1α、MIP-1β、MCP-1和RANTES结合。这些病毒受体能影响趋化因子的正常功能，从而使病毒获得选择性的病理优势。由于趋化因子种类繁多活性多样，趋化因子受体的种类也非常多，已鉴定的受体仅占趋化因子总体的一部分。因此在本领域中仍需鉴定更多的趋化因子受体。应用这些新受体可为我们发展趋化因子和趋化因子受体的治疗用调节剂提供手段，本专利技术期望这样的调节剂可作为药物用于动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、肿瘤生长抑制、哮喘、病毒感染和其它炎症情况的治疗。另外，趋化因子受体的片断或变异体或识别这些受体的抗体也可望成为药物。专利技术概述本专利技术提供分离和纯化的核酸，这些核酸编码参与白细胞迁移的趋化因子受体，本专利技术的多核苷酸(包括有义链和反义链)包括基因组DNA、cDNA、RNA以及完全或部分人工合成的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种编码列于ＳＥＱＩＤＮＯ：４的趋化因子受体８８－２Ｂ的氨基酸序列的纯化和分离的多核苷酸。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：PW格雷，VL施维卡尔特，CJ拉波尔特，
申请(专利权)人：艾科斯有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]