一种神经病理学筛选方法，其包括如下步骤： ａ）从第一个个体得到一液体样品； ｂ）将此样品与对ＩＣＡＭ－４具有特异性免疫反应的抗体相接触； ｃ）对样品中的ＩＣＡＭ－４／抗体结合作定量测定； ｄ）将此个体中的ＩＣＡＭ－４／抗体结合同已知神经病理正常的第二个个体的结果相比较。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
概括地说，本专利技术涉及细胞粘附分子，更具体地说，涉及一种DNA的克隆和表达，该DNA编码一个迄今未知的多肽，此多肽与细胞粘附分子ICAM-1、ICAM-2和ICAM-R具有结构相关性，被定名为ICAM-4。
技术介绍
最近十多年的研究已深刻地阐明了参与体内细胞-细胞相互作用的一些分子过程，特别是与免疫系统中细胞的运动和激活有关的过程，近来，又阐明了与神经系统中细胞的发育和正常生理功能有关的过程。一般地，可参阅Springer，自然，346425-434(1990)，关于免疫系统的细胞，以及Yoshihara等，神经科学研究，1083-105(1991)和Sonderegger和Rathjen，细胞生物学杂志，1191387-1394(1992)，关于神经系统的细胞。细胞表面蛋白质，以及特别是所谓的细胞粘附分子(“CAM”)都已经是药物学研究和开发的对象，作为其目标，它们参与白细胞外渗到炎症部位和运动到远隔的靶组织的过程，以及神经细胞分化和复杂的神经网络的形成过程。对细胞粘附分子的分离和表征，编码这种分子的DNA序列的克隆和表达，以及适合于炎症过程及神经系统发育和发挥功能的治疗药物和诊断试剂，这些也已经是许多美国和国外申请的专利证书的主题。参阅Edwards，当前治疗学专利评论，(Current Opinion in Therapeutic Patents)，1(11)1617-1630(1991)，特别是其中引用的已发表的“专利文献参考”。对于本专利技术背景的主要兴趣在于以前确定和表征的细胞粘附过程中的某些介质，‘白细胞整合蛋白’，LFA-1，MAC-1和gp150.95(据WHO的命名法原来被分别称为CD18/CD11a，CD18/CD11b和CD18/CD11c)它们构成存在B淋巴细胞，T淋巴细胞，单核细胞和粒细胞上的细胞表面蛋白杂二聚体“整合蛋白”的一个亚科。参阅例如Springer，同上p429的表1。其它一些涉及白细胞激活，粘附，活动性等等伴随炎症过程发生的事件的单键粘附分子(CAM)也是我们的兴趣所在。例如，目前认为，在作为炎症特征的白细胞外渗之前，在白细胞上组成性表达的聚合蛋白的激活过程就已经发生了，并接着发生整合蛋白(例如LFA-1)与一个或两个不同的细胞间粘附分子(ICAM)之间的紧密配体/受体相互作用，这两个粘附分子是表达在血管内皮细胞表面和其它白细胞上的，被称为ICAM-1和ICAM-2。象迄今已表征的其它CAM一样，ICAM-1和ICAM-2在结构上与免疫球蛋白基因总科(Superfamily)的其它成员同源，其中每种分子的细胞外部分是由具有类似羧基末端基元的许多结构域组成。“典型”的类免疫球蛋白结构域含有一个环形结构，通常是由二个半胱氨酸之间的二硫键在每个环的末端锚定而成。ICAM-1包含5个类免疫球蛋白结构域；ICAM-2由于细胞的分布状态而不同于ICAM-1，包含有2个这样的结构域；PECAM-1包含6个；VCAM包含6个或7个，取决于拼接的变异，等等。此外，CAM典型地包含一个据信是参与分子在细胞表面定向的疏水“跨膜”区，以及一个羧基末端“细胞质”区。CAM动态分布的模型图通常显示，这种分子在跨膜区锚定在细胞膜中，其细胞质“尾巴”伸入到细胞质中，而一个或多个类免疫球蛋白环从细胞表面向外伸出。许多神经细胞表达带有细胞外类免疫球蛋白结构域的表面受体，该结构域与ICAMs在结构上有相似性。参阅例如，Yoshihara等，同上。除了类Ig结构域之外，神经系统的许多粘附分子在其细胞外结构域还含有衔接重复的类纤维粘附蛋白序列。已提出细胞间粘连分子的多种治疗应用，包括以ICAM-1结合人鼻病毒的能力为前提的用途。例如，1992年1月29日公开的欧洲专利申请486 257 A，涉及开发ICAM-1的多聚体(multimeric)构型和形式(包括全长度分子形式的被截短的分子形式)，它们被认为具有更高的配体/受体结合能力，特别是对病毒，对结合了抗原和病原如恶性疟原虫(plasmodium falciparum)的淋巴细胞的结合。以类似的方式，已提出了与细胞间粘附分子免疫学相关的蛋白质的多种应用。例如，1991年11月14日公开的WO 91/16928，涉及人化嵌合体抗-ICAM-1抗体以及它们在治疗特异性和非特异性炎症，病毒感染和气喘中的应用。1992年3月19日公开的WO 92/04034中描述了抗ICAM-1抗体及其片段，在治疗内毒素休克中是有用的。1992年4月16日公开的WO 92/06119涉及用抗-ICAM-1抗个体型抗体和抗体片段抑制ICAM-1依赖性炎症应答。尽管通过对细胞间粘附蛋白如ICAM-1和淋巴细胞相互作用整合蛋白如LFA-1的鉴别和表征，对细胞粘附现象的本质已有所认识，但是对它的描述还远未完成。一般认为，在炎症过程和目标淋巴细胞在体内运行的过程中，还涉及有多种其它的蛋白质。例如，在以下专利中公开了对ICAM-相关蛋白质ICAM-R的克隆和表达美国专利申请序列号07/827,689，07/889,724，07/894,061和08/009,266，以及相应公开的PCT申请WO 93/14776(1993年8月5日公开)。这些专利申请的公开内容在此特别引入作为参考，ICAM-R的DNA的氨基酸序列已在SEQ ID NO.4中列出。已发现这种新的配体可以在人淋巴细胞、单核细胞和粒细胞上表达。本专利申请特别感兴趣的还在于另一个类ICAM表面分子，它被确定为具有不同于任何已知ICAM分子的组织特异性表达。Mori等，报导过对家兔脑中的一个端脑特异性抗原的确定，发现它特别与单克隆抗体271A6有免疫反应活性。这个表面抗原被命名为端脑素(telencephalin)。Imamura等，同一个多克隆抗体测定其定位表达，证实端脑素在猫视觉皮层的表达表现出组织上的差异，还报导说，端脑素的表达是随发育进程而可变的。Oka等，随后报导，用单克隆抗体271A6分离出了端脑素。在出版物中报导了该表面分子的分子量大约是500kD，并且该分子是由4个亚单位组成，每个亚单位的天然分子量是130kD，经N-聚糖酶处理后变成大约100kD。Yoshihiro等在日本神经科学协会的第十七届年会上(1993，12月7-9日在日本Nagoya召开)，以及1993年11月9日在华盛顿特区召开的神经科学协会第二十三届年会上，报导了家兔端脑素的cDNA和氨基酸序列。由报告中推导出的氨基酸序列表明，具有9个细胞外类免疫球蛋白(Ig)结构域的130kD端脑素是一个完整的膜蛋白。其远端的八个结构域显示出与其它ICAM的类Ig结构域有同源性。Yoshihare等，在神经元(neuron)12543-553(1994)中也报导了与此相同的结果。因此，本领域需要继续发现参与人细胞-细胞相互作用的另外一些蛋白质，并且特别需要提供用于根据其氨基酸序列对这些蛋白质进行特异性确定和表征的信息。但是，为了使这些分子达到可以构成开发治疗和诊断药剂基础的程度，有必要对编码它们的DNA进行阐明。尤其需要这样一些基本的信息，它们能用于大批量生产蛋白质，用于对天然产生它们的细胞进行鉴别，以及用于制备抗体物质或其它对其参与的配体/受本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：P·D·基尔加农，W·M·加勒廷，
申请(专利权)人：艾科斯有限公司，
类型：发明
国别省市：
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