一种鼠抗人PD-1单克隆抗体及应用制造技术

本发明专利技术涉及一种鼠抗人PD‑1单克隆抗体及应用，本发明专利技术通过小鼠杂交瘤单克隆抗体筛选及RT‑PCR法克隆Ig可变区基因，共获得1株稳定分泌抗人PD‑1抗体的杂交瘤及其可变区序列，本发明专利技术提供的鼠抗人PD‑1单克隆抗体与人PD‑1蛋白具有高亲和性，能以1.9x10

A Mouse Anti-Human PD-1 Monoclonal Antibody and Its Application

The invention relates to a mouse anti-human PD_1 monoclonal antibody and its application. The mouse anti-human PD_1 monoclonal antibody screening and RT_PCR method are used to clone Ig variable region gene, and a hybridoma stable secreting anti-human PD_1 antibody and its variable region sequence are obtained. The mouse anti-human PD_1 monoclonal antibody provided by the invention has high affinity with human PD_1 protein and can be used at 1.9x10.

【技术实现步骤摘要】
一种鼠抗人PD-1单克隆抗体及应用
本专利技术涉及免疫学
，尤其涉及一种鼠抗人PD-1单克隆抗体及应用。
技术介绍
肿瘤免疫治疗近来备受关注，是肿瘤治疗领域的焦点。其中靶向免疫检查点正在成为最有希望的治疗癌症患者的方法之一。免疫检查点分子大都属于B7/CD28及TNF/TNFR超家族成员,是免疫共刺激或共抑制分子,通过实时协同调节淋巴细胞的活性进而影响机体的免疫应答。PD-1,也称为CD279,属于B7-CD28受体家族成员。PD-1是一个55kD的I型表面跨膜糖蛋白受体,由288个氨基酸组成。PD-1与其配体PD-L1或PD-L2结合,使得PD-1胞质区两个酪氨酸信号基序磷酸化,从而激活下游信号途径,最终破坏T细胞的糖代谢及IL-2等信号因子的产生,使得T细胞丧失免疫功能。由此可见，阻断PD-1与其配体的相互作用可以提高肿瘤特异性T细胞的免疫活性，有助于免疫系统清除肿瘤细胞，因此PD-1成为开发肿瘤免疫治疗药物的热门靶点。目前已有多种Anti-PD-1/PD-L1抗体在肿瘤免疫治疗的临床研究迅速开展。例如Pembrolizumab和Nivolumab已被FDA批准用于晚期黑色素瘤，Nivolumab也已被美国FDA批准用于晚期鳞状非小细胞肺癌的治疗。另外，MPDL3280A(anti-PD-L1单抗)，Avelumab(anti-PD-L1单抗)等也已进入多个晚期临床研究中，覆盖非小细胞癌，黑色素瘤，膀胱癌等多个瘤种。然而临床试验的数据显示仅有部分患者对治疗产生响应。例如Nivolumab是BMS开发的PD-1药物。目前在开展的后期研究中，5个癌症组中仅有3组，治疗促进了肿瘤的缩小，包括72例肺癌患者中的18％，98例黑色素瘤患者中的不到三分之一和33例肾癌患者中的27％。lambrolizumab是默克公司研制PD-1抗体，其阶段性IB研究的结果显示在85例癌症患者中也仅有51％呈现客观的抗肿瘤反应，且只在9％的患者中出现完全的反应。目前大部分患者对治疗无响应的机制尚不清楚，仍需要新的抗PD-1抗体，为治疗提供新的思路。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种新型鼠抗人PD-1单克隆抗体及其可变区序列，这类抗体与PD-1亲和力高，特异性强，其可变区序列可用于构建基因工程抗体。本专利技术所采用的技术方案为：本专利技术提供了一种鼠抗人PD-1单克隆抗体，其包含重链可变区序列和轻链可变区序列；所述重链可变区序列的CDR区中包含三个如下序列：GYTFTSNTIT(CDRH1、SEQIDNO:1)YINPNSDFTNYNEKFRD(CDRH2、SEQIDNO:2)DYYGGSYYAMDY(CDRH3、SEQIDNO:3)；所述轻链可变区序列的CDR区中包含三个如下序列：TADSSVPSSYLH(CDRL1、SEQIDNO:4)STSNLAS(CDRL2、SEQIDNO:5)HQYHRSPLT(CDRL3、SEQIDNO:6)。具体地，本专利技术提供了一种鼠抗人PD-1单克隆抗体，其包含重链可变区序列和轻链可变区序列；其重链可变区序列为：(SEQIDNO:7)QVKLQQSGAELARPGASVKMSCMASGYTFTSNTITWVKQRPGQGLEWIGYINPNSDFTNYNEKFRDKATLTADRSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARDYYGGSYYAMDYWGQGTSVTVSS其轻链可变区序列为：(SEQIDNO:8)QIVLTQSPAIMSASLGERVTMTCTADSSVPSSYLHWYQQKPGSSPKFWIYSTSNLASGVPGRFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCHQYHRSPLTFGAGTKLELKRA。本专利技术还提供了保藏号为CGMCCNo.15697的鼠抗人PD-1的杂交瘤细胞株2F6。本专利技术还提供了由保藏号为CGMCCNo.15697的鼠抗人PD-1的杂交瘤细胞株2F6产生的鼠抗人PD-1单克隆抗体。本专利技术还提供了一种鼠抗人PD-1单克隆抗体的可变区序列，其包含重链可变区序列和轻链可变区序列；其重链可变区序列为：(SEQIDNO:7)QVKLQQSGAELARPGASVKMSCMASGYTFTSNTITWVKQRPGQGLEWIGYINPNSDFTNYNEKFRDKATLTADRSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARDYYGGSYYAMDYWGQGTSVTVSS其轻链可变区序列为：(SEQIDNO:8)QIVLTQSPAIMSASLGERVTMTCTADSSVPSSYLHWYQQKPGSSPKFWIYSTSNLASGVPGRFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCHQYHRSPLTFGAGTKLELKRA。本专利技术还提供了一种核苷酸分子，所述的核苷酸分子编码上述鼠抗人PD-1单克隆抗体。所述的核苷酸分子编码鼠抗人PD-1单克隆抗体的重链可变区的核苷酸序列为：(SEQIDNO:9)CAGGTGAAGCTTCAGCAGTCAGGGGCTGAACTGGCAAGACCTGGGGCCTCAGTGAAGATGTCCTGCATGGCTTCTGGCTACACTTTTACTAGTAACACGATAACCTGGGTAAAACAGAGGCCTGGACAGGGTCTGGAATGGATTGGATACATTAATCCTAACAGTGATTTTACTAATTACAATGAGAAGTTCAGGGACAAGGCCACATTGACTGCAGACAGATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTGAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGAGATTACTACGGTGGTTCCTACTATGCTATGGACTACTGGGGTCAGGGAACTTCAGTCACCGTCTCCTCA；所述的核苷酸分子编码鼠抗人PD-1单克隆抗体的轻链可变区的核苷酸序列为：(SEQIDNO:10)CAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCATCTCTAGGGGAACGGGTCACCATGACCTGCACTGCCGACTCAAGTGTACCTTCCAGTTACTTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGATCCTCCCCCAAATTCTGGATTTATAGTACATCCAATCTGGCTTCTGGAGTCCCAGGTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCACCAGTATCATCGTTCCCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAACTGAAACGGGCT。本专利技术还提供了上述鼠抗人PD-1单克隆抗体在检测PD-1蛋白试剂盒中的应用。本专利技术还提供了一种药物组合物，所述组合物包括上述的鼠抗人PD-1单克隆抗体和药学上可接受的载体。本专利技术还提供了上述鼠抗人PD-1单克隆抗体在制备治疗肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病或抗免疫排斥的药物中的应用。上述杂交瘤细胞株2F6的编号为CGMCCNo.15697，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鼠抗人PD‑1单克隆抗体，其特征在于：其包含重链可变区序列和轻链可变区序列；所述重链可变区序列的CDR区中包含三个序列，分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示；所述轻链可变区序列的CDR区中包含三个如下序列，分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示。

【技术特征摘要】
1.一种鼠抗人PD-1单克隆抗体，其特征在于：其包含重链可变区序列和轻链可变区序列；所述重链可变区序列的CDR区中包含三个序列，分别如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3所示；所述轻链可变区序列的CDR区中包含三个如下序列，分别如SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6所示。2.一种鼠抗人PD-1单克隆抗体，其特征在于：其包含重链可变区序列和轻链可变区序列；重链可变区序列如SEQIDNO:7所示；轻链可变区序列如SEQIDNO:8所示。3.保藏号为CGMCCNo.15697的鼠抗人PD-1的杂交瘤细胞株2F6。4.一种鼠抗人PD-1单克隆抗体，其特征在于：由保藏号为CGMCCNo.15697的鼠抗人PD-1的杂交瘤细胞株2F6产生的鼠抗人PD-1单克隆抗体。5.一种鼠抗人PD-1单克隆抗体的可变区序列，其特征在于：其包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊冬生，卢杨，王建祥，张砚君，叶舟，张益枝，范冬梅，杨纯正，
申请(专利权)人：中国医学科学院血液病医院血液学研究所，
类型：发明
国别省市：天津,12