一种抗PDGFRα的单克隆抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物医药抗体领域，更具体地，本发明专利技术公开了一种抗PDGFRα的单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明专利技术的抗PDGFRα单克隆抗体具有良好的生物活性，与对照抗体相比，能够更有效的结合PDGFRα蛋白，在蛋白水平较好地封闭PDGFRα蛋白与其受体相结合，并且有更佳的抑制细胞增殖能力。该单克隆抗体能够单独或与其它抗肿瘤药物联合应用在肿瘤免疫治疗以及诊断和筛查中，还具有制备治疗肿瘤、抗自身免疫性疾病等药物的良好前景。

A Monoclonal Antibody Against PDGFRalpha and Its Preparation and Application

The invention belongs to the field of biomedical antibodies, and more specifically discloses a monoclonal antibody against PDGFRalpha, a preparation method and application thereof. The anti-PDGFRalpha monoclonal antibody has good biological activity. Compared with the control antibody, the anti-PDGFRalpha monoclonal antibody can more effectively bind to PDGFRalpha protein, better block the binding of PDGFRalpha protein to its receptor at the protein level, and has better ability to inhibit cell proliferation. The monoclonal antibody can be used alone or in combination with other anti-tumor drugs in the immunotherapy, diagnosis and screening of tumors. It also has good prospects for the preparation of drugs for the treatment of tumors, anti-autoimmune diseases and so on.

【技术实现步骤摘要】
一种抗PDGFRα的单克隆抗体及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种抗PDGFRα的单克隆抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
血小板衍生生长因子（platelet-derived-growth-factor，PDGF）是血小板释放出的最主要的生长因子，存在于血管、骨骼等多种人体组织，其在血管生成、胚胎时期原肠形成、细胞分裂与增殖、中枢神经系统和骨骼发展等过程中扮演者十分关键的作用。目前的研究表明，该因子包括5种二聚体配体，即：PDGF-AA、-AB、-BB、-CC和-DD。5种类型的PDGF配体必须与细胞膜上的相应受体结合后才能发挥其生物学效应。PDGF受体由两种亚单位构成，即PDGFRα和PDGFRβ。当细胞表面的受体与其配体结合形成二聚体后，激活细胞内结构域酪氨酸残基自身磷酸化，或促使激活特殊靶蛋白的酪氨酸残基磷酸化，从而将信号传入细胞内，经级联式放大效应调控细胞的生物功能。PDGF及PDGFR信号通路的激活参与了神经胶质瘤、脑瘤、肉瘤、白血病、胃癌、卵巢癌等疾病的发生。血管生成在肿瘤形成中的作用非常重要。没有新生血管形成，实体肿瘤便无法生长。因此，抗肿瘤新生血管生成在抗肿瘤生长及转移方面具有重要意义。有研究表明PDGFR受体在NK/T细胞淋巴瘤中过表达并介导细胞存活（LuL,etal.Platelet-derivedgrowthfactorreceptoralpha(PDGFRα)isoverexpressedinNK/T-celllymphomaandmediatescellsurvival.BiochemBiophysResCommun.2018;504(2):525-531.）。而且大量研究已经证实了PDGFRα和PDGFRβ在人体内促进血管形成过程中的关键作用，因此以其为靶标开发单克隆抗体类药物是极具吸引力和前景的新药创制项目。软组织肉瘤（STS）是一种罕见且异质的恶性肿瘤。据文献报道，每年美国大约发生12000例病例，死亡人数约3900例/每年，大约占所有成人癌症诊断的不到1％，儿童恶性肿瘤的15%。在STS中，有超过50种不同的组织学亚型，最常见的STS包括多形性肉瘤、胃肠道间质瘤、脂肪肉瘤、平滑肌肉瘤、滑膜肉瘤和恶性神经鞘瘤等。而且软组织肉瘤的人口统计学、自然病史和临床结果存在较大差异（李舒,等.单中心687例软组织肉瘤临床病理统计分析[J].中华肿瘤外科杂志,2015,7(01):6-8+13.）。虽然目前针对软组织肉瘤局部病灶，主要利用手术切除和放疗等方式治疗，但是化疗的作用仍然存在较大争议；针对转移性STS，全身治疗是主要的治疗方法。对于大多数STS病患而言，一线治疗方案通常是利用蒽环类药物或将其与另外一种化疗药物联合使用，目前亟待开发新的抗体类药物，以满足肿瘤病患的需求。由美国礼来公司（EliLilly）研究开发的抗PDGFRα单克隆抗体Olaratumab通过阻断PDGF与PDGFRα的结合，抑制肿瘤细胞的生长，已经被批准用于治疗患有无法通过癌症手术或放射治疗的晚期软组织肉瘤的成人，将来还可能用于治疗其它恶性肿瘤。Olaratumab（或称为IMC-3G3）是一种全人源IgG1单克隆抗体，可选择性地与PDGFR受体结合。这种结合能够防止多种血小板衍生生长因子（PDGF）配体，包括例如PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB和PDGF-CC与其受体结合，从而阻止受体的活化（DavisEJ,ChughR.Spotlightonolaratumabinthetreatmentofsoft-tissuesarcoma:design,development,andplaceintherapy.DrugDesDevelTher.2017;11:3579-3587.）。Olaratumab还可以阻止配体诱导的下游信号分子的磷酸化，例如，AKT和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信号分子被磷酸化。2016年Olaratumab与阿霉素联合应用的治疗方案获得美国和欧洲批准，作为治疗成人晚期软组织肉瘤患者的一线药物，以改善无进展和总体生存率，然而该药物尚未得到我国药物管理部门的批准。Olaratumab相关的多项临床试验也正在进行中，包括正在进行的多项三期临床试验和其他类型的临床试验，以确定Olaratumab临床获益的生物标志物，扩大其效用范围，特别是针对儿科人群的效用。例如，针对胃肠道间质瘤（GIST）适应症所展开的临床研究，现有资料表明，大多数GIST是由激活KIT酪氨酸激酶受体突变驱动的，GIST对小分子激酶抑制剂具有敏感性，如伊马替尼，舒尼替尼和瑞格非尼等。在临床前研究中，Olaratumab在肉瘤异种移植模型中诱导生长抑制，并导致胶质母细胞瘤异种移植物中，总PDGFR转移和磷酸化水平降低。Olaratumab还可以促进细胞表面PDGFR的内化或下调，因此可能具有影响内部激酶结构域生长驱动突变的活性（MoronciniG,etal.Developmentsinthemanagementofadvancedsoft-tissuesarcoma-olaratumabincontext.OncoTargetsTher.2018;11:833-842.）。此外，KIT突变体GIST还表达PDGFRs，反过来可提供抗体定向治疗的靶标和对小分子激酶抑制剂具有抗性的肿瘤潜在治疗方法。然而，在Olaratumab的临床应用过程中，发现该药物存在较高风险。在治疗过程中，产生最严重的副作用是中性粒细胞减少症（中性粒细胞白细胞计数低），约55％患者会发生严重程度为3级或4级的中性粒细胞减少症；约有8％的病人会发生3级或4级的肌肉骨骼疼痛，其余常见的副作用包括恶心、疲劳、粘膜炎、脱发、呕吐、腹泻、食欲下降、腹部疼痛、神经损伤和头痛等症状，还包括输液相关反应和对胚胎-胎儿的危害。研究表明，在给予Olaratumab单抗治疗期间应监测患者的输注相关反应，包括潮红、呼吸急促、支气管痉挛、发烧/发冷、低血压、皮疹以及严重的低血压、过敏性休克或心脏骤停等症状。在一项临床试验中，接受至少一剂Olaratumab治疗的485名患者中，有70名患者（14％）出现了输注相关反应。在这70名患者中，68位患者（97％）产生了1-2级输注反应，11位患者（2.3％）发生了3级或更强烈的输注反应，甚至出现了1名患者死亡的情况（0.2％）（PennimanL,etal.Olaratumab(Lartruvo):AnInnovativeTreatmentforSoftTissueSarcoma.PT.2018;43(5):267-270.）。Olaratumab单抗还具有一定的胚胎-胎儿危害性——基于动物试验和药理学，该药物可能导致胎儿伤害，尽管没有关于其在妊娠中使用的确切数据，但是建议育龄妇女在治疗期间和最后一次剂量后三个月内使用避孕措施，以预防怀孕。而且Olaratumab单抗的价格也比较高昂，以美国为例，Olaratumab的平均售价可高达2889美元，如果与阿霉素联合使用，其年度治疗费用可能高达十万美元以上。（Zuluaga-SanchezS,etal.Cost-Effectivene本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗PDGFRα的单克隆抗体，其特征在于，该单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，其所述重链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:13所示。

【技术特征摘要】
1.一种抗PDGFRα的单克隆抗体，其特征在于，该单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，其所述重链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQIDNO:13所示。2.如权利要求1所述抗PDGFRα的单克隆抗体，其特征在于，该单克隆抗体的重链可变区还包括3个CDR区，其中CDR1氨基酸序列如SEQIDNO:8所示，CDR2氨基酸序列如SEQIDNO:9所示，CDR3氨基酸序列如SEQIDNO:10所示。3.如权利要求1所述抗PDGFRα的单克隆抗体，其特征在于，该单克隆抗体的轻链可变区还包括3个CDR’区，其中CDR1’氨基酸序列如SEQIDNO:14所示，CDR2’氨基酸序列如SEQIDNO:15所示，CDR3’氨基酸序列如SEQIDNO:16所示。4.一种分离的核苷酸分子，其特征在于，权利要求1所述单克隆抗体重链的编码核苷酸序列如SEQIDNO:5所示，其轻链的编码核...

【专利技术属性】
技术研发人员：何虹霖，姜伟东，
申请(专利权)人：上海复宏汉霖生物技术股份有限公司，上海复宏汉霖生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31