一种分离细胞的方法技术

本发明专利技术提供了一种分离细胞的方法，所述方法对基于Ficoll分离液的密度梯度离心法进行改进，创造性地在Ficoll中加入液体石蜡，有效促进血液样品在Ficoll上液面的稳定分层以及单个核细胞与血细胞的高效分离；将分离得到的单个核细胞进行磁珠分选，辅以注射器的负压抽吸和培养基的洗脱步骤，各步骤各条件协同增效，相互配合，极大地缩短了分离纯化时间，降低了操作难度及精力消耗，提高了分离纯化效率，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值，为细胞分离提供了新的思路和方法。

A Method of Cell Isolation

The invention provides a method for separating cells, which improves the density gradient centrifugation method based on Ficoll separating solution, creatively adds liquid paraffin to Ficoll, effectively promotes the stable stratification of blood samples on Ficoll liquid surface and the efficient separation of mononuclear cells from blood cells, and separates the separated mononuclear cells by magnetic beads, assisted by syringes. Negative pressure suction and medium elution steps, the conditions of each step synergize and cooperate with each other, greatly shorten the separation and purification time, reduce the operation difficulty and energy consumption, improve the separation and purification efficiency, have broad application prospects and great market value, and provide new ideas and methods for cell separation.

【技术实现步骤摘要】
一种分离细胞的方法
本专利技术属于生物
，涉及一种分离细胞的方法。
技术介绍
造血干细胞是一类成体多能干细胞，经多层级发育分化形成成熟的血液系统。造血干细胞是血液学研究领域的主要对象，是现代实验血液学研究的基础。造血干细胞的分离纯化及基因操作是血液学研究领域中最常用到的主要实验技术手段之一，如何能高效快捷地分离纯化造血干细胞是进行研究工作的首要任务。当前实验室主流策略是通过两步法方案分离得到纯化的造血干细胞：首先去除绝大部分红细胞，保留白细胞；随后在白细胞中加入抗CD34磁珠进行孵育结合，经磁力架分选得到纯化的CD34+造血干细胞。在此基础上还有衍生的三步法分离造血干细胞等方案；现以衍生的三步法为例，详细介绍现有技术中造血干细胞分选的主要步骤及流程：第一步是粗分离和体积浓缩：主要是利用羟乙基淀粉沉淀红细胞，100mL肝素抗凝脐血与6％羟乙基淀粉(HES)按5:1混合，羟乙基淀粉终浓度为1％，经自然沉降60min，小心吸取上层液400g离心10min回收单个核细胞，10mLPBS悬浮；第二步是单个核细胞分离：15mL离心管中加入5mLFicoll(密度1.077g/mL)，在Fi本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将Ficoll和液体石蜡加入容器中，离心后滴加血液样品，使得血液与Ficoll形成分层液体；(2)将步骤(1)分层后的液体进行离心后，在Ficoll上液面形成白色层；(3)将步骤(2)得到的白色层取出，离心漂洗得到单个核细胞。

【技术特征摘要】
1.一种分离细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将Ficoll和液体石蜡加入容器中，离心后滴加血液样品，使得血液与Ficoll形成分层液体；(2)将步骤(1)分层后的液体进行离心后，在Ficoll上液面形成白色层；(3)将步骤(2)得到的白色层取出，离心漂洗得到单个核细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述血液样品包括外周血、骨髓穿刺、脐带血或白膜中的任意一种或至少两种的组合，优选为脐带血；优选地，步骤(1)所述Ficoll与液体石蜡的体积比为1:(0.5-2.5)。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述离心的转速为800-1200g；优选地，步骤(2)所述离心的时间为10-20min。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述离心的转速为500-1500g；优选地，步骤(3)所述离心的时间为5-15min；优选地，步骤(3)所述漂洗的稀释液包括1640培养基、DMEM培养基、IMDM培养基、PBS或2mMEDTA中的任意一种或至少两种的组合，优选为PBS和2mMEDTA的组合；优选地，步骤(3)所述漂洗的次数为2-5次。5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将步骤(3)得到的单个核细胞进行磁珠分选的步骤。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述磁珠分选的方法包括如下步骤：(1’)将步骤(3)得到的单个核细胞加入PBS悬浮后过细胞筛，加入阻断剂和CD34+磁珠进行孵育；(2’)将步骤(1’)孵育后的细胞液过细胞筛后加到MS柱中进行负压抽吸过柱，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张磊，王文天，
申请(专利权)人：中国医学科学院血液病医院血液学研究所，
类型：发明
国别省市：天津,12