一种细胞培养液、利用该细胞培养液制备富血小板血浆的方法及制得的富血小板血浆技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，公开了一种细胞培养液，主要由以下体积百分数的组分组成：2.5％的维生素C、2.5％的N‑乙酰氨基酸、1.5％的支链氨基酸，余量为常规细胞培养基。本发明专利技术还提供了利用该细胞培养液提取血小板血浆的方法。本发明专利技术提供的细胞培养液配方简单，成本低，可有效促进血液中的血小板及白细胞分泌有益生长因子。该细胞培养液与本发明专利技术提供的富血小板血浆的制备方法相结合，可快速制备含有大量有益生长因子并且无污染可直接注射的富血小板血浆，可有效治疗脂溢性脱发。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞培养液、利用该细胞培养液制备富血小板血浆的方法及制得的富血小板血浆
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种细胞培养液、利用该细胞培养液制备富血小板血浆的方法及制得的富血小板血浆。
技术介绍
脂溢性脱发的患者往往由于雄激素在局部组织中代谢异常，通过5α还原酶的作用使活性低的睾酮转化为活性高的二氢睾酮(DHT)，而DHT与雄激素受体有很强的亲和力，可与雄激素受体结合而进入细胞核起作用，使毛囊过早成熟，生长期缩短而提前进入休止期，毛囊渐变小，毛发变得细短，进而脱发，目前对于脱发的治疗一般是采用植发，还没有有效的手段可使脱发患者在短时间内生发。富血小板血浆(PRP)是利用自身血液制作的富含血小板的高浓度血浆，其中包含多种生长因子如血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子TGF-β1、血小板衍生生长因子(PDGF)、胰岛素样生长因子IGF-I、IGF-II、纤维蛋白、纤维结合蛋白分子、促进炎症反应、细胞增殖和分化等的因子，在创面损伤修复中应用较广。然而，目前PRP的提取主要是二次离心法，主要存在以下缺点：开放式的制备体系容易受到外界污染，提取PRP时在多个容器间转移，增加了血小板被污染和激活的机率，操作人员的个人操作习惯极大地影响了PRP中血小板的浓度，以上因素导致制备的PRP中血小板获取率较低且各指标变异系数大，极大程度地限制了PRP的应用。因此，急需开发一种能快速提取含有大量有益成分且不易污染的PRP的方法。
技术实现思路
为了解决现有技术存在的上述问题，本专利技术目的在于提供一种细胞培养液、利用该细胞培养液制备富血小板血浆的方法及制得的富血小板血浆。本专利技术所采用的技术方案为：本专利技术提供了一种细胞培养液，主要由以下体积百分数的组分组成：2.5％的维生素C、2.5％的N-乙酰氨基酸、1.5％的支链氨基酸，余量为常规细胞培养基。具体的，上述细胞培养液，所述N-乙酰氨基酸中的氨基酸L-蛋氨酸、L-苏氨酸、L-组氨酸、L-谷氨酰胺、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-苯丙氨酸、L-色氨酸或L-缬氨酸，所述支链氨基酸为亮氨酸。具体的，上述细胞培养液，所述细胞培养基为DMEM培养基、H3无血清培养基或RPMI-1640培养基。本专利技术还提供了一种富血小板血浆的制备方法，包括以下步骤：S1：取外周血，向外周血中加入前述的细胞培养液，混匀，得到混合液一；S2：将上述混合液一静置培养，得到混合液二；S3：将步骤S2所述的混合液二离心，取上清液和中间细胞层，即得到所述富血小板血浆。具体的，上述制备方法，所述步骤S1中外周血的体积与所述细胞培养液的比例为20:1。具体的，上述制备方法，所述步骤S2中培养的温度为37℃，培养时的CO2浓度为5％，培养时间为4h。具体的，上述制备方法，所述步骤S3中离心时离心力为26G，离心时间为15min。一种通过前述制备方法制备的富血小板血浆。本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的细胞培养液配方简单，成本低，可有效促进血液中的血小板及白细胞分泌有益生长因子。利用本专利技术提供的细胞培养液并结合本专利技术提供的富血小板血浆的制备方法，可快速制备含有大量有益生长因子并且无污染可直接注射的富血小板血浆，该富血小板血浆可有效治疗脂溢性脱发。附图说明图1是本专利技术提供的富血小板血浆治疗严重脂溢性脱发的效果图；图2是本专利技术提供的富血小板血浆治疗普通脂溢性脱发的效果图。具体实施方式下面结合附图及具体实施例对本专利技术做进一步阐释。实施例1本实施例的目的在于提供一种细胞培养液，主要由以下体积百分数的组分组成：2.5％的维生素C、2.5％的N-乙酰-L-谷氨酰胺、1.5％的支链氨基酸亮氨酸，余量为细胞培养基，细胞培养基为市面上现有的培养基，优选为gibic、hyclone、lonza、stemcell、BI、sigma或takara公司的DMEM培养基、H3无血清培养基或RPMI-1640培养基。实施例2本实施例的目的在于提供一种细胞培养液，主要由以下体积百分数的组分组成：2.5％的维生素C、2.5％的N-乙酰-L-组氨酸、1.5％的支链氨基酸缬氨酸，余量为细胞培养基，细胞培养基为市面上现有的培养基，优选为gibic、hyclone、lonza、stemcell、BI、sigma或takara公司的DMEM培养基、H3无血清培养基或RPMI-1640培养基。实施例3本实施例的目的在于提供一种细胞培养液，主要由以下体积百分数的组分组成：2.5％的维生素C、2.5％的N-乙酰-L-赖氨酸、1.5％的支链氨基酸异亮氨酸，余量为细胞培养基，细胞培养基为市面上现有的培养基，优选为gibic、hyclone、lonza、stemcell、BI、sigma或takara公司的DMEM培养基、H3无血清培养基或RPMI-1640培养基。蛋白质中的三种常见氨基酸，亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸统称支链氨基酸(BCAA)，所以又可称复合支链氨基酸，其中以亮氨酸最优。这类氨基酸以两种特殊方式促进合成代谢(肌肉增长)：①促进胰岛素释放，②促进生长激素释放。支链氨基酸中最重要的是亮氨酸。除了上述三种N-乙酰氨基酸，还可以使用L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸或L-缬氨酸，是维持细胞生长的生物活性物质，在细胞代谢中起调节及控制作用。由本专利技术提供的细胞培养液培养的细胞生长状态良好，可用于目前市面上的多种细胞系及一些较难攻克的原代细胞的培养。实施例4本实施例的目的在于提供一种富血小板血浆，该富血小板血浆由以下步骤制备而成(以下培养操作均置于无菌操作台上操作)：S1：取人体的外周血100ml，均分至10个15ml细胞培养管(eaglemedium—thermo厂出产)中，细胞培养管中预先加有抗凝剂，每个细胞培养管中加入0.5mL实施例1中所述的培养液，混匀，得到混合液一；S2：将混合液一于细胞培养箱中静置培养，培养的温度为37℃，培养时CO2浓度为5％，培养时间为4h，得到混合液二；S3：将步骤S2所述的混合液二离心，离心力为26G，离心时间为15min，取上清液和中间细胞层，即得到所述富血小板血浆。所述富血小板血浆制备过程中，步骤S3所得的中间细胞层包含大量的白细胞、血小板以及一定量的间充质干细胞，上清液中含有自体全血的血浆中的所有非细胞成分，例如细胞因子、生长因子、趋化因子、免疫调节因子、酶、激素等；生长因子包括胰岛素样生长因子IGF-1，转化生长因子TGF-β，碱性呈纤维细胞生长因子FGF-b和血管内皮细胞生长因子VEGF等。由于本专利技术提供的富血小板血浆制备方法，先采用本专利技术提供的细胞培养液进行培养，使外周血中的细胞尽量多地释放有益的非细胞成分，使这些有益的非细胞成分，主要是各类生长因子快速活化增生，培养完成后，进行一次离心，收集得到的富血小板血浆含有的各类生长因子的数量远远高于传统方法制备出来的富血小板血浆中的有效成分，并且该培养方法仅经过一次离心，中间步骤少，全程在无菌操作台上操作，安全性更高，制得的富血小板血浆可直接注射进病人体内。每100mL外周血可抽出包含上清液和中间细胞层共约40mL的液体，注射到头皮内即可用于生发。所用离心机为kubota2800型离心机。效果例1征集100名脂溢性脱发患者(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞培养液，其特征在于，主要由以下体积百分数的组分组成：2.5％的维生素C、2.5％的N‑乙酰氨基酸、1.5％的支链氨基酸，余量为细胞培养基。

【技术特征摘要】
1.一种细胞培养液，其特征在于，主要由以下体积百分数的组分组成：2.5％的维生素C、2.5％的N-乙酰氨基酸、1.5％的支链氨基酸，余量为细胞培养基。2.根据权利要求1所述的细胞培养液，其特征在于：所述N-乙酰氨基酸中的氨基酸为L-蛋氨酸、L-苏氨酸、L-组氨酸、L-谷氨酰胺、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-苯丙氨酸、L-色氨酸或L-缬氨酸，所述支链氨基酸为亮氨酸。3.根据权利要求1或2所述的细胞培养液，其特征在于：所述细胞培养基为DMEM培养基、H3无血清培养基或RPMI-1640培养基。4.一种富血小板血浆的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：取外周血，向外周血...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊仲川，
申请(专利权)人：四川瑞兴和弘健康咨询有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51