海洋生物细胞的复苏及传代方法技术

本发明专利技术涉及一种海洋生物细胞的复苏及传代方法，包括如下步骤：（1）细胞的复苏：将冻存的细胞从液氮中取出，迅速放入37℃水浴，在1分钟内解冻；将3.5mL RPMI1640培养液、0.5mL血清加入细胞培养瓶中，再将1mL冻存管中的细胞转移至培养瓶中，逐滴加入并不时的摇动培养瓶使其均匀；12h后给细胞换液，除去细胞冻存液中的DMSO。（2）细胞的传代：待细胞长满80%细胞培养瓶时倾去细胞培养液，加胰酶荡洗一次，再加入1.5mL胰酶消化，当细胞间质回缩，细胞间隙清晰时，弃去胰酶，加入培养液充分吹打至显微镜下观察为单细胞悬液；分装悬液细胞于若干培养瓶中，置于37℃，5%CO

Method for recovery and passage of marine biological cells

Recovery and passage of the invention relates to a method for marine biological cells, which comprises the following steps: (1) cell recovery: the frozen cells taken from liquid nitrogen, quickly placed in 37 DEG C water bath thawing in 1 minutes; the 3.5mL RPMI1640 medium, 0.5mL cells cultured with serum bottle, then 1mL in freezing tube cells transferred to culture flask, flask was added dropwise to the uniform does not shake; 12h cells to change the liquid, remove the cryopreservation solution in DMSO. (2) cell passage: when cells covered 80% cell culture bottle decanted cell culture fluid, pancreatin swing wash, add 1.5mL of trypsin digestion, when interstitial cell retraction, clear cell gap, discard pancreatin, add broth to fully percussion under the microscope for single cell suspension liquid packaging; suspension cells in culture flask, at 37 DEG C, 5%CO

【技术实现步骤摘要】
海洋生物细胞的复苏及传代方法
本专利技术属于海洋生物
，具体涉及一种海洋生物细胞的复苏及传代方法。
技术介绍
细胞培养技术也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。细胞培养技术具有以下优点：能长期传代，保持活性，便于监控检测结构功能和生命活动。培养条件可以人为的控制便于研究细胞代谢、物理、化学、生物因素的影响。可用于各种观察和检测手段研究活细胞的变化（变异、分化），可从细胞水平开展亚细胞结构和代谢分子的表达。研究范围和细胞来源广泛，选择性广。不同代次细胞可长期保存，既可开展同代次不同条件和方法研究，又可观察不同代次的动态变化。耗资少、经济、成本低、可大量培养，利于生物制品的生产。因此，海洋生物的研究也越来越多的用到细胞培养技术，在实际操作中，细胞经常要经历冻存、复苏、传代等操作。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术正是提供一种海洋生物细胞的复苏及传代方法。一种海洋生物细胞的复苏及传代方法，包括如下步骤：（1）细胞的复苏：将冻存的细胞从液氮中取出，迅速放入37℃水浴，在1分钟内解冻；在超净工作台里，用75%的酒精将冻存管外壁消毒；另将3.5mLRPMI1640培养液、0.5mL血清加入细胞培养瓶中，再将1mL冻存管中的细胞转移至培养瓶中，逐滴加入并不时的摇动培养瓶使其均匀；12h后给细胞换液，除去细胞冻存液中的DMSO。（2）细胞的传代：待细胞长满80%细胞培养瓶时即细胞处于对数生长期，倾去细胞培养液，加入少量的胰酶荡洗一次，再加入1.5mL胰酶消化，显微镜下观察，当细胞间质回缩，细胞间隙清晰时，弃去胰酶，加入4mLHam’sF-12K/DMEM/RPMI1640培养液充分吹打至显微镜下观察为单细胞悬液；分装悬液细胞于若干培养瓶中，含10%血清的Ham’sF-12K/DMEM/RPMI1640，置于37℃，5%CO2的培养箱中培养。本专利技术的海洋生物细胞复苏及传代方法，操作简单方便，对细胞的损伤小，污染几率降低，细胞的生长状态良好。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。一种海洋生物细胞的复苏及传代方法，包括如下步骤：（1）细胞的复苏：将冻存的细胞从液氮中取出，迅速放入37℃水浴，在1分钟内解冻；在超净工作台里，用75%的酒精将冻存管外壁消毒；另将3.5mLRPMI1640培养液、0.5mL血清加入细胞培养瓶中，再将1mL冻存管中的细胞转移至培养瓶中，逐滴加入并不时的摇动培养瓶使其均匀；12h后给细胞换液，除去细胞冻存液中的DMSO。（2）细胞的传代：待细胞长满80%细胞培养瓶时即细胞处于对数生长期，倾去细胞培养液，加入少量的胰酶荡洗一次，再加入1.5mL胰酶消化，显微镜下观察，当细胞间质回缩，细胞间隙清晰时，弃去胰酶，加入4mLHam’sF-12K/DMEM/RPMI1640培养液充分吹打至显微镜下观察为单细胞悬液；分装悬液细胞于若干培养瓶中，含10%血清的Ham’sF-12K/DMEM/RPMI1640，置于37℃，5%CO2的培养箱中培养。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海洋生物细胞的复苏及传代方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）细胞的复苏：将冻存的细胞从液氮中取出，迅速放入37℃水浴，在1分钟内解冻；在超净工作台里，用75%的酒精将冻存管外壁消毒；另将3.5mL RPMI1640培养液、0.5mL血清加入细胞培养瓶中，再将1mL冻存管中的细胞转移至培养瓶中，逐滴加入并不时的摇动培养瓶使其均匀；12h后给细胞换液，除去细胞冻存液中的DMSO；（2）细胞的传代：待细胞长满80%细胞培养瓶时即细胞处于对数生长期，倾去细胞培养液，加入少量的胰酶荡洗一次，再加入1.5mL胰酶消化，显微镜下观察，当细胞间质回缩，细胞间隙清晰时，弃去胰酶，加入4mL Ham’sF‑12K/DMEM/RPMI1640培养液充分吹打至显微镜下观察为单细胞悬液；分装悬液细胞于若干培养瓶中，含10%血清的Ham’sF‑12K/DMEM/RPMI1640，置于37℃，5%CO

【技术特征摘要】
1.一种海洋生物细胞的复苏及传代方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）细胞的复苏：将冻存的细胞从液氮中取出，迅速放入37℃水浴，在1分钟内解冻；在超净工作台里，用75%的酒精将冻存管外壁消毒；另将3.5mLRPMI1640培养液、0.5mL血清加入细胞培养瓶中，再将1mL冻存管中的细胞转移至培养瓶中，逐滴加入并不时的摇动培养瓶使其均匀；12h后给细胞换液，除去细胞冻存液中的DMSO；（2）细胞的传代...

【专利技术属性】
技术研发人员：褚方强，
申请(专利权)人：青岛清泉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37