一种使用BHK-21贴壁细胞制备口蹄疫疫苗的方法技术

本发明专利技术公开了一种将BHK-21细胞大规模高密度贴壁培养技术应用于口蹄疫疫苗生产中的方法，该方法包括以下步骤：1)细胞复苏与初级放大；2)在一个中等体积的生物反应器中大规模高密度的进行细胞培养，培养完成后，将高密度的细胞液在大型细胞培养罐中稀释；3)接种口蹄疫病毒种毒并在合适条件下收获全部病毒液，经下游步骤制备口蹄疫疫苗。本发明专利技术提供的工艺方法，免去了将贴壁细胞驯化为悬浮细胞的过程；避免了现有的BHK-21细胞大规模悬浮培养制备口蹄疫疫苗技术中必需的逐级放大过程，显著简化工艺流程，缩短生产周期，同时最大程度的减小了口蹄疫病毒的逃逸，减少污染机会。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物制药领域，具体描述为一种用BHK-21细胞在生物反应器中经一步高密度大规模贴壁培养制备口蹄疫疫苗的方法。
技术介绍
口蹄疫(Foot and mouth disease, FMD)是由口蹄疫病毒(Foot and mouthdisease virus, FMDV)引起的偶蹄动物传播的一种急性、热性、高度接触性传染病，易感动物多达70多种。口蹄疫疫病传染性极强，可引起动物生产性能下降，一旦爆发会给被感染地区的畜牧业造成巨大的经济损失，严重影响国际贸易，被世界动物卫生组织列为必须在第一时间报告疫情的疫病之一。FMDV 属于小 RNA 病毒科(Picornaviridae) 口蹄疫病毒属(Aphthovirus),血清型众多，包括O、A、C、Asial、SATl、SAT2和SAT3型共7个血清型。其血清型间无交叉免疫保护，所以针对一种血清型的疫苗对其他血清型病毒难以产生作用，造成疫病控制难度较大。FMD疫苗经历了灭活疫苗、活疫苗、灭活疫苗这一历发展趋势，目前也有部分新型疫苗(合成肽疫苗)面市。其中，灭活疫苗最初使用舌皮组织毒经甲醛灭活制成的疫苗，经过将近20年的发展，现本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在生物反应器中大规模高密度培养BHK?21贴壁细胞制备口蹄疫疫苗的方法，该方法包括以下主要步骤：1)BHK?21细胞复苏和初级放大培养；2)BHK?21细胞在生物反应器中大规模高密度培养；3)培养结束后的细胞液转移至大型细胞罐中稀释，接种口蹄疫病毒种毒，收获毒液。

【技术特征摘要】
1.一种在生物反应器中大规模高密度培养BHK-21贴壁细胞制备口蹄疫疫苗的方法，该方法包括以下主要步骤:1)BHK-21细胞复苏和初级放大培养；2)BHK-21细胞在生物反应器中大规模高密度培养；3)培养结束后的细胞液转移至大型细胞罐中稀释，接种口蹄疫病毒种毒，收获毒液。2.按权利要求1所述的方法，其特征在于:所述BHK-21细胞为贴壁细胞株，并且不经过悬浮驯化筛选，直接使用。3.按权利要求1所 述的方法，其特征在于:所述BHK-21细胞株为已经悬浮驯化过的BHK-21悬浮细胞株，这些细胞株在所述方法的培养过程中适应为贴壁细胞株。4.按权利要求1所述的方法，其特征还在于:所述步骤2)中，根据生产规模的大小选择使用各种体积的生物反应器(例如I升，5升，7.5升，14升，40升，75升，150升，300升，和更大规模的)和各种已知的载体；这些载体包括但不局限于以下各种材料制成的载体:聚丙烯，PLA, PGA,多孔娃，PLGA, PPF等,和天然材料的葡聚糖(Cytodex I, Cytodex2,Cytodex3),胶原蛋白，琼脂,谷物蛋白等；优选使用GE公司生产的Cytodexl和Cytodex3球形微载体。5.按权利要求1所述的应用，其特征还在于:所述步骤2)中，使用微载体的浓度为5-50克/升，优选10-40克/升，更优选15-30克/升，最优选20-25克/升；细胞的接种密度为0.8xl05个细胞/ml至9xl05个细胞/ml，优选IxlO5个细胞/ml至7xl05个细胞/ml，更优选3xl05个细胞/ml至6xl05个细胞/ml ;培养基中加入3% -15%胎牛血清或小牛血清；生物反应器的培养条件设置为:温度36.5-37.5摄氏度，溶氧DO 30% -80%, PH值7.0-7.2，转速 80-120rpm。6.按权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾馨丹，
申请(专利权)人：杭州国牧生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：