高水平人二倍体细胞培养水痘-带状疱疹疫苗病毒方法技术

本发明专利技术公开了一种高水平人二倍体细胞培养水痘-带状疱疹疫苗病毒方法，包括建立主体细胞库：按照美国FDA标准，取ATCC（CCL171）细胞株，起始为第17代，经过20天左右共3-5次传代培养，收获的细胞用冷冻管在液氮保存；工作细胞库细胞培养；进行二倍体细胞群体倍增水平同步监测，选用二倍体细胞群体倍增水平2.5以上的细胞株生产疫苗；本发明专利技术可以得到较高的减毒水痘-带状疱疹病毒疫苗产量，该方法便于带状疱疹疫苗的大量制备，适用于规模化生产。本方法也可以用作其它活体疫苗，如：甲肝疫苗、狂犬病疫苗、麻疹、天花等工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种。
技术介绍
现有水痘-带状疱疹病毒疫苗生产产量低，不能适用于规模化生产。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种可以得到较高的减毒水痘-带状疱疹病毒疫苗产量，便于带状疱疹疫苗的大量制备，适用于规模化生产的。本专利技术的技术解决方案是: 一种，其特征是:包括下列步骤: (I)建立主体细胞库(MCB)，按照美国FDA标准(21CFR211和21CFR600)。取ATCC(CCL171)细胞株(来自美国权威的细胞保存机构ATCC，细胞株由美国FDA专门指定，交由美国ATCC管理)，起始为第17代，经过20天左右共3-5次传代培养，收获大约20亿多个细胞，每支冷冻管大约I千万细胞，93-96%成活率，约200支在液氮保存。(2)工作细胞库(W·CB)细胞培养，经过12-15天共3_5次传代培养，传代在GLP实验室中进行，按照准备临床实验材料(CTM)要求(21CFR58)进行和实验数据记录，液氮和深冻(-80°C )保存(即部分用液氮保存、部分深冻保存)。(3)为保证疫苗病毒的高滴度，同时进行二倍体细胞群体倍增水平(PDL)同步监测，疫苗生产选用二倍体细胞群体倍增水平(PDL) 2.5以上的细胞株，正常二倍体细胞I3DL值为2.0左右。约20%细胞株符合达到倍增水平(PDL) 2.5以上要求(图1)。上述步骤中的传代培养采用下列二倍体细胞培养液:采用MEM细胞培养基，加有相当于二倍体细胞培养液体积8-15%的小牛血清，每升二倍体细胞培养液中含有1-5 mM的L-谷氨酰胺，每毫升二倍体细胞培养液中含100-200单位青霉素、50-100微克链霉素及20-40纳克两性霉素，二倍体细胞培养液中含有12种非必需氨基酸。12种非必需氨基酸采用GIBCO BRL生产的100倍浓缩液，且在每升二倍体细胞培养液中的加入量为10ml。本专利技术可以得到较高的减毒水痘-带状疱疹病毒疫苗产量，该方法便于带状疱疹疫苗的大量制备，适用于规模化生产。本方法也可以用作其它活体疫苗，如:甲肝疫苗、狂犬病疫苗、麻疹、天花等工业化生产。附图说明下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。图1是工作细胞库二倍体细胞群体倍增水平测定示意图；其中X轴:工作细胞(WCB)编号(1-50)，Y轴:细胞群体倍增水平(DPL)； 图2是二倍体细胞群体倍增水平不同的工作细胞所收获的疫苗病毒的滴度比较示意图；其中X轴:工作细胞名(LD1-2，MD1-2，HD1-2)，Y轴:疫苗病毒的滴度(噬菌斑/毫升)，黑斜线为疫苗病毒的滴度的增长趋势直线。具体实施例方式一种高水平PDL人二倍体细胞培养水痘-带状疱疹疫苗病毒方法，包括下列步骤: (I)建立主体细胞库(MCB)，按照美国FDA标准(21CFR211和21CFR600):取ATCC(CCL171)细胞株(来自美国权威的细胞保存机构ATCC，细胞株由美国FDA专门指定，交由美国ATCC管理)，起始为第17代，经过20天左右共3-5次传代培养，收获大约20亿多个细胞，每支冷冻管大约I千万细胞，93-96%成活率，约200支在液氮保存。(2)工作细胞库(WCB)细胞培养，经过12-15天共3_5次传代培养，传代在GLP实验室中进行，按照准备临床实验材料(CTM)要求(21CFR58)进行和实验数据记录，液氮和深冻(-80°C )保存(即部分用液氮保存、部分深冻保存)。(3)为保证疫苗病毒的高滴度，同时进行二倍体细胞群体倍增水平(PDL)同步监测，疫苗生产选用二倍体细胞群体倍增水平(PDL) 2.5以上的细胞株，正常二倍体细胞I3DL值为2.0左右。约20%细胞株符合达到倍增水平(PDL) 2.5以上要求(图1)。上述步骤中的传代培养采用下列二倍体细胞培养液:采用MEM细胞培养基，加有相当于二倍体细胞培养液体积8-15%的小牛血清，每升二倍体细胞培养液中含有1-5 mM的L-谷氨酰胺，每毫升二倍体细胞培养液中含100-200单位青霉素、50-100微克链霉素及20-40纳克两性霉素，二倍体细胞培养液中含有12种非必需氨基酸。 12种非必需氨基酸采用GIBCO BRL生产的100倍浓缩液，且在每升二倍体细胞培养液中的加入量为10ml。12种非必需氨基酸的用量(体积)相等或不等。二倍体细胞群体倍增水平不同的工作细胞LD1，LD2 (PDL值为1.7-2.0)，MD1，MD2(PDL值为2.1-2.4)，HDl，HD2 (PDL值为2.5-2.7)用来培养VZV疫苗病毒，收获的疫苗病毒的滴度高低与PDL值成正比(图2)。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高水平人二倍体细胞培养水痘?带状疱疹疫苗病毒方法，其特征是：包括下列步骤：（1）建立主体细胞库：按照美国FDA标准，取ATCC（CCL171）细胞株，起始为第17代，经过20天左右共3?5次传代培养，收获的细胞用冷冻管在液氮保存；（2）工作细胞库细胞培养：将步骤（1）得到的细胞再经过12?15天共3?5次传代培养，按照准备临床实验材料要求进行和实验数据记录，液氮和深冻保存；（3）为保证疫苗病毒的高滴度，同时进行二倍体细胞群体倍增水平同步监测，选用二倍体细胞群体倍增水平2.5以上的细胞株生产疫苗；上述步骤中的传代培养采用下列二倍体细胞培养液：采用MEM细胞培养基，加有相当于二倍体细胞培养液体积8?15%的小牛血清,?每升二倍体细胞培养液中含有1?5?mM的L?谷氨酰胺,?每毫升二倍体细胞培养液中含100?200单位青霉素、50?100?微克链霉素及20?40?纳克两性霉素，二倍体细胞培养液中含有12种非必需氨基酸。

【技术特征摘要】
1.一种高水平人二倍体细胞培养水痘-带状疱疹疫苗病毒方法，其特征是:包括下列步骤: (1)建立主体细胞库:按照美国FDA标准，取ATCC(CCL171)细胞株，起始为第17代，经过20天左右共3-5次传代培养，收获的细胞用冷冻管在液氮保存； (2)工作细胞库细胞培养:将步骤(I)得到的细胞再经过12-15天共3-5次传代培养，按照准备临床实验材料要求进行和实验数据记录，液氮和深冻保存； (3)为保证疫苗病毒的高滴度，同时进行二倍体细胞群体倍增水平同步监测，选用二倍体细胞群体倍增水平2.5以上的细胞株生产疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：莫呈钧，
申请(专利权)人：江苏健安生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：