【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞培养
,具体地说,是一种裸鼹鼠心肌细胞的培养方法。
技术介绍
裸鼹鼠(Heterocephalusglaber,Nakedmole-rat)是一种极具研究价值的新型实验动物,它具有耐低氧、抗衰老和抗肿瘤等诸多奇特的生物学特性,在老年病学、肿瘤学、免疫学等医学和生命科学研究领域中发挥着重大作用,具有不可替代的地位。尤其是在耐低氧研究方面,为缺氧相关的心血管疾病等研究提供了理想的研究载体和科研工具。心肌细胞是心脏的基本组成单位,是进行生理、药理、病理、毒理及能量代谢等方面研究的主要细胞来源,同时也是心肌组织工程种子细胞的主要来源之一。目前,由于裸鼹鼠动物来源珍贵、稀有,且生物学特性独特,国内尚无针对裸鼹鼠心肌细胞培养方法的研究,这极大地影响和限制了新型实验动物裸鼹鼠在生命科学研究尤其是在心血管疾病研究中的推广应用。因此,亟需开展培养裸鼹鼠心肌细胞的相关技术研究。中国专利文献CN104087550A公开了一种大鼠心肌细胞的培养方法,其特征在于,其包括如下步骤:(1)将大鼠心肌组织浸于消化酶混合液中进行分次消化至心肌组织松软后弃去消化液,然后加入DMEM培养基,吹打松软的心肌组织,取上清进行离心收获细胞沉淀,所述的消化酶混合液包括0.7~1.0g/L胰蛋白酶和0.5~0.8g/LII型胶原酶;(2)以DMEM培养基重悬步骤(1)所得的细胞沉淀,将细胞悬液过180~220目筛后转移至培养瓶中 ...
【技术保护点】
一种裸鼹鼠心肌细胞的培养方法,包括以下步骤:(A)向裸鼹鼠心肌组织中加入胰蛋白酶进行消化1‑2次,弃去上清液;(B)在步骤(A)中所得的细胞沉淀中,加入混合消化液,轻轻吹打心肌组织悬液进行消化后,静置;(C)收集步骤(B)中的上清液,用200目细胞筛过滤后,立即加入等量终止液终止消化,并于冷冻离心机中4℃、1000rpm、离心5min;(D)步骤(C)中所得的细胞沉淀,依次重复操作步骤B、步骤C两次以上;(E)收集所有细胞于同一离心管中,用终止液重悬细胞,并于冷冻离心机中4℃、1000rpm、离心5min,弃去上清液,于细胞沉淀中加入终止液重悬细胞,再次于冷冻离心机中4℃、1000rpm、离心5min,弃去上清液,于细胞沉淀中加入终止液重悬、混匀细胞;(F)将步骤(E)中所得细胞悬液接种于培养容器中,置于培养箱内培养,通过差速贴壁法分离心脏成纤维细胞与心肌细胞;(G)收集步骤(F)中未贴壁的心肌细胞悬液,于冷冻离心机中4℃、1000rpm、离心5min,所得细胞沉淀用培养基混悬后,置于培养箱内培养;所述的步骤(F)和步骤(G)中培养箱的环境温度为35~37℃,O2体积浓度为5%、CO2 ...
【技术特征摘要】
1.一种裸鼹鼠心肌细胞的培养方法,包括以下步骤:
(A)向裸鼹鼠心肌组织中加入胰蛋白酶进行消化1-2次,弃去上清液;
(B)在步骤(A)中所得的细胞沉淀中,加入混合消化液,轻轻吹打心肌组织
悬液进行消化后,静置;
(C)收集步骤(B)中的上清液,用200目细胞筛过滤后,立即加入等量终止
液终止消化,并于冷冻离心机中4℃、1000rpm、离心5min;
(D)步骤(C)中所得的细胞沉淀,依次重复操作步骤B、步骤C两次以上;
(E)收集所有细胞于同一离心管中,用终止液重悬细胞,并于冷冻离心机
中4℃、1000rpm、离心5min,弃去上清液,于细胞沉淀中加入终止液重悬细
胞,再次于冷冻离心机中4℃、1000rpm、离心5min,弃去上清液,于细胞沉
淀中加入终止液重悬、混匀细胞;
(F)将步骤(E)中所得细胞悬液接种于培养容器中,置于培养箱内培养,通
过差速贴壁法分离心脏成纤维细胞与心肌细胞;
(G)收集步骤(F)中未贴壁的心肌细胞悬液,于冷冻离心机中4℃、1000rpm、
离心5min,所得细胞沉淀用培养基混悬后,置于培养箱内培养;
所述的步骤(F)和步骤(G)中培养箱的环境温度为35~37℃,O2体积浓度为
5%、CO2体积浓度为5%。
2.根据权利要求1所述的裸鼹鼠心肌细胞的培养方法,其特征在于,所述
的步骤(A)中胰蛋白酶浓度为0.08%(...
【专利技术属性】
技术研发人员:崔淑芳,余琛琳,汤球,林丽芳,赵善民,丛薇,蔡丽萍,徐晨,
申请(专利权)人:中国人民解放军第二军医大学,
类型:发明
国别省市:上海;31
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