心肌细胞特异启动子及其应用制造技术

本发明专利技术公开了心肌细胞特异启动子及其应用。本发明专利技术公开的心肌细胞特异启动子，是下述a)或b)或c)的DNA片段：a)3′端至少含有序列表中序列1的第927‑1501位核苷酸序列，并且从序列1的第927位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为575至1501bp的任意一个DNA片段；所述DNA分子具有启动子功能；b)与a)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有启动子功能的DNA片段；c)在严格条件下与a)或b)限定的核苷酸序列杂交，且具有启动子功能的DNA片段。实验证明，本发明专利技术的启动子具有心肌组织特异性和心脏特异性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
中心肌细胞特异启动子及其应用。
技术介绍
进入21世纪以来，心血管疾病已经成为了威胁人类健康的重要疾病。在全球范围内，心血管疾病的发病率呈现逐年升高的趋势，在我国，心血管病患者大约有2.3亿人，每年死于心血管病的约300万人，可以说，心血管疾病已经成为威胁人类健康的第一杀手。心力衰竭是心血管疾病导致死亡的主要原因之一，约有40％的心血管疾病发展成为心力衰竭，因此，探明心衰发病的原因，机理，以及找到恰当的治疗心衰靶位点的意义十分重大。心力衰竭的发病机制非常复杂，已经有很多的研究者从不同的角度出发来阐明心力衰竭的发展过程。研究证明，有大量的细胞内分子信号通路参与了这一过程，例如：压力负荷是引起心力衰竭的一个重要因素，病理性的压力通过G蛋白耦联受体，钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CAMKII)，丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)，蛋白质磷酸酶钙调磷酸酶，和转录因子心肌细胞增强因子2(MEF2)，活性T细胞核因子(NFAT)这一信号通路，最终引起心衰相关基因的表达的变化，从而引起心肌细胞的肥大，衰竭。这些复杂的信号通路有相当一部分是相互重叠与相互影响的，在不同信号通路相互重叠的节点，例如GSK3β，HDACs极可能成为心衰治疗的重要靶点。在对心脏疾病进行基因治疗时，如何对完成对心脏靶向作用成为其中的重要一环，目前急需一种具有心脏或心肌细胞特异性的启动子。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供具有心肌细胞特异性启动子功能DNA分子。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了来源于大鼠(Rattusnorvegicus)的DNA分子，该DNA分子的名称为CMRP，CMRP具有心肌细胞特异性启动子功能，CMRP是下述a)或b)或c)的DNA片段：a)3′端至少含有序列表中序列1的第927-1501位核苷酸序列，并且从序列1的第927位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为575至1501bp的任意一个DNA片段；所述DNA片段具有启动子功能；b)与a)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有启动子功能的DNA片段；c)在严格条件下与a)或b)限定的核苷酸序列杂交，且具有启动子功能的DNA片段。其中，序列1由1501个核苷酸组成。上述DNA分子中，所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次。每次5min0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次。每次15min。上述75％或75％以上同一性，可为80％、85％、90％、95％以上的同一性。本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本专利技术的启动子核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本专利技术分离得到的启动子核苷酸序列70％或者更高同一性的核苷酸，只要保持了表达靶基因的启动子活性，均是衍生于本专利技术的核苷酸序列并且等同于本专利技术的序列。这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本专利技术的启动子核苷酸序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。上述DNA分子中，CMRP的最后一位核苷酸是序列1的第1501位。上述DNA分子中，CMRP还可为下述A1)-A8)中的任一种DNA片段：A1)核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第913-1501位核苷酸序列，并且从序列1的第913位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为589至1501bp的任意一个DNA片段；A2)核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第888-1501位核苷酸序列，并且从序列1的第888位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为614至1501bp的任意一个DNA片段；A3)核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第870-1501位核苷酸序列，并且从序列1的第870位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为632至1501bp的任意一个DNA片段；A4)核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第848-1501位核苷酸序列，并且从序列1的第848位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为654至1501bp的任意一个DNA片段；A5)核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第827-1501位核苷酸序列，并且从序列1的第827位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为675至1501bp的任意一个DNA片段；A6)核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第789-1501位核苷酸序列，并且从序列1的第789位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为713至1501bp的任意一个DNA片段；A7)核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第819-1501位核苷酸序列，并且从序列1的第819位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为683至1501bp的任意一个DNA片段；A8)核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第1051-1501位核苷酸序列，并且从序列1的第1051位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为451至1501bp的任意一个DNA片段。上述DNA分子中，CMRP可为下述1)-10)中任意一种：1)序列表中序列1的第927-1051位核苷酸所示的DNA分子；2)序列表中序列1的第913-1051位核苷酸所示的DNA分子；3)序列表中序列1的第888-1051位核苷酸所示的DNA分子；4)序列表中序列1的第870-1051位核苷酸所示的DNA分子；5)序列表中序列1的第848-1051位核苷酸所示的DNA分子；6)序列表中序列1的第827-1051位核苷酸所示的DNA分子；7)序列表中序列1的第713-1051位核苷酸所示的DNA分子；8)序列表中序列1的第683-1051位核苷酸所示的DNA分子；9)序列表中序列1的第451-1051位核苷酸所示的DNA分子；10)序列表中序列1的第1-1051位核苷酸所示的DNA分子。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了含有CMRP的生物材料，所述生物材料为下述B本文档来自技高网...

【技术保护点】
DNA分子，是下述a)或b)或c)的DNA片段：a)3′端至少含有序列表中序列1的第927‑1501位核苷酸序列，并且从序列1的第927位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为575至1501bp的任意一个DNA片段；所述DNA分子具有启动子功能；b)与a)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有启动子功能的DNA片段；c)在严格条件下与a)或b)限定的核苷酸序列杂交，且具有启动子功能的DNA片段。

【技术特征摘要】
1.DNA分子，是下述a)或b)或c)的DNA片段：
a)3′端至少含有序列表中序列1的第927-1501位核苷酸序列，并且从序列1
的第927位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为575
至1501bp的任意一个DNA片段；所述DNA分子具有启动子功能；
b)与a)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有启动子功能的DNA
片段；
c)在严格条件下与a)或b)限定的核苷酸序列杂交，且具有启动子功能的DNA
片段。
2.根据权利要求1所述的DNA分子，其特征在于：所述DNA分子的最后一位核苷
酸是序列1的第1501位。
3.根据权利要求1或2所述的DNA分子，其特征在于：所述DNA分子是下述A1)
-A8)中的任一种DNA片段：
A1)核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第913-1501位核苷酸序列，
并且从序列1的第913位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得
到长度为589至1501bp的任意一个DNA片段；
A2)核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第888-1501位核苷酸序列，
并且从序列1的第888位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得
到长度为614至1501bp的任意一个DNA片段；
A3)核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第870-1501位核苷酸序列，
并且从序列1的第870位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得
到长度为632至1501bp的任意一个DNA片段；
A4)核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第848-1501位核苷酸序列，
并且从序列1的第848位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得
到长度为654至1501bp的任意一个DNA片段；
A5)核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第827-1501位核苷酸序列，
并且从序列1的第827位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得
到长度为675至1501bp的任意一个DNA片段；
A6)核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第789-1501位核苷酸序列，
并且从序列1的第789位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得
到长度为713至1501bp的任意一个DNA片段；
A7)核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第819-1501位核苷酸序列，
并且从序列1的第819位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得

\t到长度为683至1501bp的任意一个DNA片段；
A8)核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第1051-1501位核苷酸序列，
并且从序列1的第1051位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得
到长度为451至1501bp的任意一个DNA片段。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨磊，王世强，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京;11