The invention relates to a method for the determination of biological activity, SRB intends to extract Sonneratia steps are as follows: (1) the logarithm period of tumor cells, each hole of 200 L with 96 well plates, each hole sample solution with different concentrations of 2 L; (2) 37 degrees C culture 17h; (3) centrifugal suction to the supernatant; (4) per hole adding 80%TCA solution 50 L pre cooled, 4 degree C 1.5h fixed into the refrigerator, and then rinse with deionized water 5 times and dried at room temperature; (5) per hole adding 0.5%SRB dye 50 L, room temperature for 30min, washed 4 times with 1%TCA water, dried in room temperature the pre cooling solution; (6) 150 L per hole adding Tris solution and protein binding dye, measured per hole absorbance od in 520nm using elisa. By formula IR (%) = (OD
【技术实现步骤摘要】
拟海桑提取物的生物活性SRB测定方法
本专利技术属于海洋生物医药
,具体涉及一种拟海桑提取物的生物活性SRB测定方法。
技术介绍
拟海桑(Sonneratiaparacaseolaris)属于海桑科海桑属,为我国稀有濒危红树植物,仅天然分布于海南岛,分布范围狭窄,个体数量稀少。正处于濒危状态,被列入《中国生物多样性国情研究报告》中国被子植物濒危及稀有种名录。在前期的生物活性筛选实验中,拟海桑的甲醇提取物对小鼠白血病肿瘤细胞株P-388和人肝癌细胞株BEL-7402显示较强的细胞毒活性。因此,本项目选择拟海桑进行细致的化学成分研究,期望发现海洋来源活性先导化合物。拟海桑化学成分的研究只有一篇报道,2012年郭跃伟课题组对采自广东湛江的拟海桑进行化学成分研究,从中分离得到一个新骨架化合物ParacaseolideA(69)是一个二聚-烷基丁内酯类化合物内酯甲素,体外药理活性筛选显示该化合物对细胞周期分裂蛋白25B具有显著的抑制活性。
技术实现思路
本专利技术旨在为拟海桑的提取物提供一种方便可靠的生物活性测定方法。一种拟海桑提取物的生物活性SRB测定方法,步骤如下:(1)取对数期的肿瘤细胞,用新鲜的RPMI-1640培养基调整细胞悬液的浓度为2×105个/ml,每孔200μL加入96孔板中,每孔加入不同浓度的样品溶液2μL;(2)37ºC培养17h;(3)离心3min(4ºC、3000prm),吸去上清;(4)每孔加入50μL预冷的80%TCA溶液,移入4ºC冰箱中固定1.5h,再用去离子水冲洗5次,室温晾干;(5)每孔加入0.5%SRB染液(1%的TCA溶液 ...
【技术保护点】
一种拟海桑提取物的生物活性SRB测定方法,其特征在于,步骤如下:(1)取对数期的肿瘤细胞,用新鲜的RPMI‑1640培养基调整细胞悬液的浓度为2×10
【技术特征摘要】
1.一种拟海桑提取物的生物活性SRB测定方法,其特征在于,步骤如下:(1)取对数期的肿瘤细胞,用新鲜的RPMI-1640培养基调整细胞悬液的浓度为2×105个/ml,每孔200μL加入96孔板中,每孔加入不同浓度的样品溶液2μL;(2)37ºC培养17h;(3)离心3min(4ºC、3000prm),吸去上清;(4)每孔加入50μL预冷的80%TCA溶液,移入4ºC冰箱中固定1.5h,再用去离子水冲洗5次,室温晾干;(5)每孔加入0.5%SRB染液(1%的TCA溶...
【专利技术属性】
技术研发人员:褚方强,
申请(专利权)人:青岛清泉生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:山东,37
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