一种重组载体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种重组载体及其制备方法和应用，所述重组载体包含膜固定白介素15的基因和膜固定白介素21的基因；本发明专利技术通过设计膜固定白介素15和膜固定白介素21，将分泌蛋白改为跨膜蛋白，与包括41BBL、CD64、CD86和CD19的共刺激信号传导结构域协同激活并长期保持NK细胞的增殖和功能发挥，提高扩增效率，在体外诱导NK细胞的分化成熟，膜固定白介素15和膜固定白介素21相互搭配，协助增强对NK细胞的激活功能，并辅以共刺激信号结构域，全面稳定保持对NK细胞的激活及诱导分化成熟功能；本发明专利技术提供的制备方法简洁高效，便于操作，应用于NK细胞扩增领域，能实现NK细胞的高效扩增，具有广阔的应用前景。

A recombinant vector and its preparation method and Application

The present invention provides a recombinant vector and its preparation method and application. The recombinant vector contains a gene of a membrane immobilized interleukin 15 and a membrane that immobilize IL-21. The invention changes the secreted protein into a transmembrane protein by immobilize the interleukins 15 and the membrane by a design membrane, and cooperates with the 41BBL, CD64, CD86, and CD19. The stimulation signal conduction domain co activates and maintains the proliferation and function of NK cells for a long time, improves the amplification efficiency, induces the differentiation and maturation of NK cells in vitro. Membrane immobilization of interleukin 15 and membrane immobilized interleukin 21 complement each other to assist in enhancing the activation of NK cells, supplemented by a costimulatory signal domain. The activation of NK cells and the induction of differentiation and maturation are maintained. The preparation method provided by the invention is simple, efficient and easy to operate. It can be applied to the field of NK cell amplification, and can achieve the efficient amplification of NK cells. It has a broad application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种重组载体及其制备方法和应用
本专利技术涉及基因工程领域，尤其涉及一种重组载体及其制备方法和应用。
技术介绍
自然杀伤细胞(Naturekillercell,NK细胞)是一种机体内重要的天然免疫系统淋巴细胞，其主要来源于骨髓CD34+淋巴细胞，表型一般为CD3-CD16+CD56+。NK细胞的生物学意义在于其无需抗原致敏和MHC的限制即可以识别并且杀伤肿瘤细胞，与此同时，NK细胞又可以分泌多种细胞因子和趋化因子，调节获得性免疫应答，是连接固有免疫应答和获得性免疫应答的桥梁。NK细胞在抗病毒、抗肿瘤中扮演了重要的角色，因其作用不需初次免疫活化，因此在过继免疫治疗中有很大的应用前景，但NK细胞在外周血淋巴细胞中所占的比例较低，限制了其在各领域的应用。γ链细胞因子在NK细胞增殖及功能发挥上均发挥了重要作用。该家族成员包括IL2、IL4、IL7、IL9、IL15和IL21。在NK细胞分化过程中，不同的细胞因子都具有不同的作用。在这些不同种细胞因子中，IL2、IL15、IL21被认为是NK功能有力激活剂。IL-15在NK细胞的生长成熟中发挥重要作用，同时，IL15分子还能调节NK细胞平衡。I本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组载体，其特征在于，所述重组载体包含膜固定白介素15的基因和膜固定白介素21的基因。

【技术特征摘要】
1.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体包含膜固定白介素15的基因和膜固定白介素21的基因。2.根据权利要求1所述的重组载体，其特征在于，所述膜固定白介素15的核酸序列如SEQIDNO:1所示，所述膜固定白介素21的核酸序列如SEQIDNO:2所示。3.根据权利要求1或2所述的重组载体，其特征在于，所述膜固定白介素15由CD86信号肽、白介素15和CD86跨膜区组成。4.根据权利要求1-3中任一项所述的重组载体，其特征在于，所述膜固定白介素21由CD86信号肽、白介素21和CD86跨膜区组成。5.根据权利要求1-4中任一项所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体还包括共刺激信号传导结构域；优选地，所述共刺激信号传导结构域包括41BBL、CD64、CD86或CD19中的任意一种或至少两种的组合，优选为41BBL、CD64、CD86和CD19的组合；优选地，所述41BBL基因的核酸序列如SEQIDNO:3所示；优选地，所述CD64基因的核酸序列如SEQIDNO:4所示；优选地，所述CD86基因的核酸序列如SEQIDNO:5所示；优选地，所述CD19基因的核酸序列如SEQIDNO:6所示。6.根据权利要求1-5中任一项所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体沿着真核表达载体的转录方向依次可操作地连接有膜固定白介素15基因、膜固定白介素21基因、41BBL基因、CD64基因、CD86基因和CD19基因。7.根据权利要求1-6中任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦丹，秦志华，连杰，马亚锋，范宇清，皇甫晶晶，
申请(专利权)人：河南省华隆生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41