环介导等温扩增方法检测蜡样芽胞杆菌的试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种运用环介导恒温ＰＣＲ技术检测食源性蜡样芽胞杆菌的方法，属于食品卫生领域，具体涉及一种运用环介导恒温ＰＣＲ技术检测食源性蜡样芽胞杆菌的方法。其技术方案是以蜡样芽胞杆菌１６Ｓ－２３Ｓ间区为目的检测序列，设计涵盖整个间区序列的四条特异性引物。本发明专利技术包括四条蜡样芽胞杆菌１６Ｓ－２３Ｓ间区特异性引物、食源蜡样芽胞杆菌的提取以及环介导恒温ＰＣＲ扩增的检测方法以及结果的判断。本发明专利技术填补了食源蜡样芽胞杆菌环介导恒温ＰＣＲ扩增技术检测方法的空白，用于检验进出口食品中蜡样芽胞杆菌。该方法具有低成本、高效率、操作简单、快速便捷的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细菌检验技术，具体地说是运用环介导恒温扩增反应来检测蜡样芽胞杆菌， 特别是食源性蜡样芽胞杆菌的检测方法。
技术介绍
蜡样芽胞杆菌在自然界分布广泛，常存在于土壤、灰尘和污水中，植物和许多生熟食品 中常见。己从多种食品中分离出该菌，包括肉、乳制品、蔬菜、鱼、土豆、糊、酱油、布丁、 炒米饭以及各种甜点等。在美国，炒米饭是引发蜡样芽胞杆菌呕吐型食物中毒的主要原因； 在欧洲大都由甜点、肉饼、色拉和奶、肉类食品引起；在我国主要与受污染的米饭或淀粉类 制品有关。蜡样芽胞杆菌作为一种食源性疾病的报导较多，在各种食品中的检出率也较高，如1982 年犬饲等对闩本名古屋所采1641份食品样品中，有193份检出了该菌、阳性率为11.8%; 1984 年我国有关单位对南京市所采211份食品样品中，有81份检出了该菌，阳性率为38.4%。蜡样芽胞杆菌食物中毒通常以夏秋季(6-10月)最高。引起中毒的食品常于食前由于保 存温度不当，放置时间较长或食品经加热而残存的芽胞以生长繁殖的条件，因而导致中毒。 中毒的发病率较高， 一般为60-100%。但也有在可疑食品中找不到蜡样芽胞杆菌而引起食物 中毒的情本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检验食品中蜡样芽胞杆菌的引物，其特征在于：正向引物Ｆ３的３’末端位于如序列引物序列一所示的１６Ｓ－２３Ｓ间区基因编码区上游约５０ｂｐ处，正向成环引物ＦＩＰ的３’末端位于如序列引物序列二所示的１６Ｓ－２３Ｓ间区３５ｂｐ处，反向成环引物ＢＩＰ的３’末端位于如序列引物序列四所示的１６Ｓ－２３Ｓ间区２０４ｂｐ处，反向引物Ｂ３的３’末端位于如序列引物序列三所示的１６Ｓ－２３Ｓ间区下游５０ｂｐ处。正向引物序列Ｆ３、正向成环引物ＦＩＰ和反向引物序列Ｂ３、反向成环引物ＢＩＰ的长度范围在１６－４０ｂｐ，并能完全扩增蜡样芽胞杆菌１６Ｓ－２３Ｓ间区编码序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郑文杰，张宏伟，刘伟，张霞，赵良娟，张海滨，张海英，阎煜，
申请(专利权)人：中华人民共和国天津出入境检验检疫局，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]