具有经修饰的特异性的I-CreI大范围核酸酶变体、其制备方法及应用技术

制备具有经修饰的切割特异性的１－ＣｒｅＩ大范围核酸酶变体的方法，通过所述方法可获得的变体及其或者用于切割新ＤＮＡ靶标或者用于非治疗目的的遗传工程和基因组工程的应用。编码所述变体的核酸、包含所述核酸的表达盒、包含所述表达盒的载体、被所述载体转化的细胞或生物，植物或非人动物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

【技术保护点】
制备具有经修饰的切割特异性的Ⅰ－ＣｒｅＩ大范围核酸酶变体的方法，所述方法包括：　　　　（ａ）参照Ⅰ－ＣｒｅＩ　　ｐｄｂ登记码１ｇ９ｙ，将氨基酸Ｑ４４、Ｒ６８和／或Ｒ７０替换为选自Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ和Ｙ的氨基酸；　　　　（ｂ）选择步骤（ａ）中获得的针对双链ＤＮＡ靶标中－５至－３位而言具有至少一个下列Ｒ↓［３］三联体切割模式的Ⅰ－ＣｒｅＩ大范围核酸酶变体，所述－５至－３位对应于下式Ⅰ的Ｒ↓［３］：　　　　５’－Ｒ↓［１］ＣＡＡＡＲ↓［２］Ｒ↓［３］Ｒ↓［４］Ｒ’↓［４］Ｒ’↓［３］Ｒ’↓［２］ＴＴＴＧＲ’↓［１］－３’，　　　　其中：　　　　Ｒ↓［１］不存在或存在；并且当存在时代表包含１至９个核苷酸的核酸片段，所述核酸片段对应于随机核酸序列或对应于位于从－２０至－１２位（从５＇向３＇）的Ⅰ－ＣｒｅＩ大范围核酸酶归巢位点的片段，Ｒ↓［１］至少对应于所述归巢位点的－１２位，　　　　Ｒ↓［２］代表核酸双联体ａｃ或ｃｔ并且对应于所述归巢位点的－７至－６位，　　　　Ｒ↓［３］代表对应于所述－５至－３位的核酸三联体，选自ｇ、ｔ、ｃ和ａ，并排除以下的三联体：ｇｔｃ、ｇｃｃ、ｇｔｇ、ｇｔｔ和ｇｃｔ，　　　　Ｒ↓［４］代表核酸双联体ｇｔ或ｔｃ并且对应于所述归巢位点的－２至－１位，　　　　Ｒ’↓［１］不存在或存在；并且当存在时代表包含１至９个核苷酸的核酸片段，所述核酸片段对应于随机核酸序列或对应于位于从＋１２至＋２０位（从５’向３’）的Ⅰ－ＣｒｅＩ大范围核酸酶归巢位点的片段，Ｒ’↓［１］至少对应于所述归巢位点的＋１２位，　　　　Ｒ’↓［２］代表核酸双联体ａｇ或ｇｔ并且对应于所述归巢位点的＋６至＋７位，　　　　Ｒ’↓［３］代表对应于所述＋３至＋５位的核酸三联体，选自ｇ、ｔ、ｃ和ａ；当Ｒ↓［３］和Ｒ’↓［３］是非回文序列时，Ｒ’↓［３］不同于ｇａｃ、ｇｇｃ、ｃａｃ、ａａｃ以及ａｇｃ，　　　　Ｒ’↓［４］代表核酸双联体ｇａ或ａｃ并对应于所述归巢位点的＋１至＋２位。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：菲利普迪沙托，弗雷德里克帕克，
申请(专利权)人：赛莱克蒂斯公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]