切割来自小鼠ＲＯＳＡ２６基因座之ＤＮＡ靶序列的大范围核酸酶变体及其用途制造技术

Ｉ－ＣｒｅＩ变体，其中两个Ｉ－ＣｒｅＩ单体之一具有至少两个替换，在ＬＡＧＬＩＤＡＤＧ核心结构域的两个功能性亚结构域（分别位于Ｉ－ＣｒｅＩ的２６～４０位以及４４～７７位）中各含一个，所述变体能够切割来自小鼠ＲＯＳＡ２６基因座的ＤＮＡ靶序列。所述变体及其衍生产物用于改造表达异源目的蛋白之转基因小鼠和重组小鼠细胞系的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

【技术保护点】
Ｉ－ＣｒｅＩ变体，其特征在于两个Ｉ－ＣｒｅＩ单体之一具有至少两个替换，其中ＬＡＧＬＩＤＡＤＧ核心结构域的两个功能性亚结构域中各含一个，所述亚结构域分别位于Ｉ－ＣｒｅＩ的２６～４０位和４４～７７位，所述变体能够切割来自小鼠ＲＯＳＡ２６基因座的ＤＮＡ靶序列，并可通过至少包括下述步骤的方法获得：　　（ａ）构建第一系列Ｉ－ＣｒｅＩ变体，其在ＬＡＧＬＩＤＡＤＧ核心结构域的第一功能性亚结构域中具有至少一个替换，所述第一功能性亚结构域位于Ｉ－ＣｒｅＩ的２６～４０位，　　（ｂ）构建第二系列ＩＡ靶序列中－１０～－８位的核苷酸三联体相同，（ｉｉ）＋８～＋１０位的核苷酸三联体与存在于所述来自小鼠ＲＯＳＡ２６基因座之ＤＮＡ靶序列中－１０～－８位的核苷酸三联体的反向互补序列相同，（ｉｉｉ）－５～－３位的核苷酸三联体与存在于所述来自小鼠ＲＯＳＡ２６基因座之ＤＮＡ靶序列中－５～－３位的核苷酸三联体相同，和（ｉｖ）＋３～＋５位的核苷酸三联体与存在于所述来自小鼠ＲＯＳＡ２６基因座之ＤＮＡ靶序列中－５～－３位的核苷酸三联体的反向互补序列相同，和／或　　（ｈ）将来自步骤（ｅ）和步骤（ｆ）的两种变体中２６～４０位和４４～７７位的突变组合在单个变体中，以获得切割以下序列的新同二聚体Ｉ－ＣｒｅＩ变体，所述序列（ｉ）＋３～＋５位的核苷酸三联体与存在于所述来自小鼠ＲＯＳＡ２６基因座之ＤＮＡ靶序列中＋３～＋５位的核苷酸三联体相同，（ｉｉ）－５～－３位的核苷酸三联体与存在于所述来自小鼠ＲＯＳＡ２６基因座之ＤＮＡ靶序列中＋３～＋５位的核苷酸三联体的反向互补序列相同，（ｉｉｉ）Ｉ－ＣｒｅＩ位点的＋８～＋１０位的核苷酸三联体与存在于所述来自小鼠ＲＯＳＡ２６基因座之ＤＮＡ靶序列中＋８～＋１０位的核苷酸三联体相同，和（ｉｖ）－１０～－８位的核苷酸三联体与存在于所述来自小鼠ＲＯＳＡ２６基因座之ＤＮＡ靶序列中＋８～＋１０位的核苷酸三联体的反向互补序列相同，　　（ｉ）将步骤（ｇ）和／或（ｈ）中获得的变体相组合，以形成异二聚体，和　　（ｊ）选择和／或筛选来自步骤（ｉ）的能够切割来自小鼠ＲＯＳＡ２６基因座之所述ＤＮＡ靶序列的异二聚体。－ＣｒｅＩ变体，其在ＬＡＧＬＩＤＡＤＧ核心结构域的第二功能性亚结构域中具有至少一个替换，所述第二功能性亚结构域位于Ｉ－ＣｒｅＩ的４４～７７位，　　（ｃ）从来自步骤（ａ）的第一系列中选择和／或筛选能够切割突变体Ｉ－ＣｒｅＩ位点的变体，其中至少（ｉ）所述Ｉ...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿格内斯古布勒，
申请(专利权)人：赛莱克蒂斯公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]