丝氨酸蛋白酶抑制剂融合多肽和其使用方法技术

本发明专利技术涉及分子，特别是多肽，更特别是融合蛋白，其包含丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽或自丝氨酸蛋白酶抑制剂衍生的氨基酸序列和包含至少一种以下多肽的第二多肽：Fc多肽或自Fc多肽衍生的氨基酸序列；细胞因子靶向多肽或自细胞因子靶向多肽衍生的序列；包含WAP结构域的多肽或自包含WAP的多肽衍生的序列；和白蛋白多肽或自血清白蛋白多肽衍生的氨基酸序列。本发明专利技术还涉及在各种治疗性和诊断性适应症中使用这样的分子的方法，以及产生这样的分子的方法。

Serine protease inhibitor fusion polypeptides and methods of use thereof

The present invention relates to polypeptide molecules, in particular, more particularly a fusion protein comprising a serine protease inhibitor peptide or amino acid sequence of the serine protease inhibitor derivative and contains at least one of the following more than 2 polypeptides: Fc peptide or peptide derived from the amino acid sequence of Fc peptide; cytokine targeting peptide or cytokines the target sequence to the derived polypeptide; contains the peptide of WAP domain containing WAP or derived from the polypeptide sequence; and albumin polypeptide or derived from serum albumin polypeptide amino acid sequence. The present invention also relates to methods for using such molecules in various therapeutic and diagnostic indications, as well as methods for producing such molecules.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】丝氨酸蛋白酶抑制剂融合多肽和其使用方法相关申请本申请要求2014年10月27日提交的美国专利申请号14/524,832的权益，其内容通过引用以其整体结合到本文中。序列表的并入创建于2015年10月26日和大小为228KB的名为“INHI002002WO_SeqList.txt”的文本文件的内容，通过引用以其整体结合到本文中。专利
本专利技术涉及分子，特别是多肽，更特别是融合蛋白，其包含丝氨酸蛋白酶(serpin)抑制剂多肽或自丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽衍生的氨基酸序列和第二多肽。另外，本专利技术涉及融合蛋白，其包含丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽或自丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽衍生的氨基酸序列、第二多肽和第三多肽。特别是，本专利技术涉及包含至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽和第二多肽的融合蛋白，或包含至少一种丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽、第二多肽和第三多肽的融合蛋白，其中本专利技术的融合蛋白的第二和第三多肽可以是以下的至少一种：Fc多肽或自Fc多肽衍生的氨基酸序列；细胞因子靶向多肽或自细胞因子靶向多肽衍生的序列；包含WAP结构域的多肽或自包含WAP的多肽衍生的序列；或白蛋白多肽或自血清白蛋白多肽衍生的氨基酸序列。本专利技术还涉及在各种治疗性和诊断性适应症中使用这样的分子的方法，以及产生这样的分子的方法。专利技术背景异常丝氨酸蛋白酶活性或蛋白酶与蛋白酶抑制剂的失衡可导致蛋白酶-介导的组织破坏和炎性反应。因此，对靶向异常丝氨酸蛋白酶活性和/或蛋白酶与蛋白酶抑制剂的失衡的治疗剂和疗法存在需要。此外，通过削弱异常细胞因子信号传导和丝氨酸蛋白酶活性，可获得提高的治疗效果。此外，丝氨酸蛋白酶抑制剂蛋白已经证实了抗感染活性，而靶向炎性细胞因子已表明增加感染风险。本专利技术的融合蛋白具有抑制炎性细胞因子活性和限制感染风险的潜力。专利技术简述本文所述的融合蛋白包含至少丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽或自丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽衍生的氨基酸序列(多肽1)和第二多肽(多肽2)。另外，本文所述的融合蛋白包含丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽或自丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽衍生的氨基酸序列(多肽1)、第二多肽(多肽2)和第三多肽(多肽3)。如本文可互换使用的，术语“融合蛋白”和“融合多肽”是指可操作连接至至少第二多肽或自至少第二多肽衍生的氨基酸序列的丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽或自丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽衍生的氨基酸序列。融合蛋白的单个元件可以各种方式的任一种连接，包括例如，直接连接、使用中间肽或间隔肽、使用接头区、使用铰链区或使用接头和铰链区二者。在一些实施方案中，接头区可落入铰链区的序列内，或者铰链区可落入接头区的序列内。优选地，接头区是肽序列。例如，接头肽大约包括0-40个氨基酸，例如0-35个氨基酸，0-30个氨基酸，0-25个氨基酸或0-20个氨基酸。优选地，铰链区是肽序列。例如，铰链肽大约包括0-75个氨基酸，例如0-70个氨基酸，0-65个氨基酸或0-62个氨基酸。在其中融合蛋白包括接头区和铰链区二者的实施方案中，优选地，接头区和铰链区各自是肽序列。在这些实施方案中，铰链肽和接头肽一起大约包括0-90个氨基酸，例如0-85个氨基酸或0-82个氨基酸。在一些实施方案中，丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽和第二多肽可通过中间结合蛋白连接。在一些实施方案中，融合蛋白的基于丝氨酸蛋白酶抑制剂的部分和第二多肽部分可经非共价连接。在一些实施方案中，根据本专利技术的融合蛋白在N-末端至C-末端方向上或在C-末端至N-末端方向上可具有以下各式之一：多肽1(a)–铰链m–多肽2(b)多肽1(a)–接头n–多肽2(b)多肽1(a)–接头n–铰链m–多肽2(b)多肽1(a)–铰链m–接头n–多肽2(b)多肽1(a)–多肽2(b)–多肽3(c)多肽1(a)–铰链m–多肽2(b)–铰链m–多肽3(c)多肽1(a)–接头n–多肽2(b)–接头n–多肽3(c)多肽1(a)–铰链m–接头n–多肽2(b)–铰链m–接头n–多肽3(c)多肽1(a)–接头n–铰链m–多肽2(b)–接头n–铰链m–多肽3(c)其中n是0-20的整数，其中m是1-62的整数和其中a、b和c是至少1的整数。这些实施方案包括上式和其任何变体或组合。例如，式中多肽的顺序还包括多肽3(c)–多肽1(a)–多肽2(b)、多肽2(b)–多肽3(c)–多肽1(a)、或其任何变体或组合。在一些实施方案中，多肽1序列包括丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽。丝氨酸蛋白酶抑制剂是一组具有类似结构的蛋白，其最初作为一组能够抑制蛋白酶的蛋白被鉴定。适合用于本文提供的融合蛋白的丝氨酸蛋白酶抑制剂蛋白，以非限制性实例的方式，包括α-1抗胰蛋白酶(AAT)、抗胰蛋白酶-相关蛋白(丝氨酸蛋白酶抑制剂A2)、α1-抗胰凝乳蛋白酶(丝氨酸蛋白酶抑制剂A3)、kallistatin(丝氨酸蛋白酶抑制剂A4)、单核细胞中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂(丝氨酸蛋白酶抑制剂B1)、PI-6(丝氨酸蛋白酶抑制剂B6)、抗凝血酶(丝氨酸蛋白酶抑制剂C1)、纤溶酶原激活物抑制剂1(丝氨酸蛋白酶抑制剂E1)、α2-抗血纤维蛋白酶(丝氨酸蛋白酶抑制剂F2)、补体1-抑制剂(丝氨酸蛋白酶抑制剂G1)和神经丝氨酸蛋白酶抑制剂(丝氨酸蛋白酶抑制剂I1)。在一些实施方案中，多肽1序列包括α-1抗胰蛋白酶(AAT)多肽序列或自AAT衍生的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽1序列包括AAT蛋白的一部分。在一些实施方案中，多肽1序列包括至少AAT蛋白的反应位点环部分。在一些实施方案中，AAT蛋白的反应位点环部分包括至少氨基酸序列：GTEAAGAMFLEAIPMSIPPEVKFNKSEQIDNO:1)。在优选的实施方案中，AAT多肽序列或自AAT衍生的氨基酸序列是人AAT多肽序列或衍生自人AAT多肽序列。在一些实施方案中，融合蛋白包括具有以下氨基酸序列的全长人AAT多肽序列：1EDPQGDAAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEFAFSLYRQLAHQSNSTNIFFSPVSIATA61FAMLSLGTKADTHDEILEGLNFNLTEIPEAQIHEGFQELLRTLNQPDSQLQLTTGNGLFL121SEGLKLVDKFLEDVKKLYHSEAFTVNFGDTEEAKKQINDYVEKGTQGKIVDLVKELDRDT181VFALVNYIFFKGKWERPFEVKDTEEEDFHVDQVTTVKVPMMKRLGMFNIQHCKKLSSWVL241LMKYLGNATAIFFLPDEGKLQHLENELTHDIITKFLENEDRRSASLHLPKLSITGTYDLK301SVLGQLGITKVFSNGADLSGVTEEAPLKLSKAVHKAVLTIDEKGTEAAGAMFLEAIPMSI361PPEVKFNKPFVFLMIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK(SEQIDNO:2)在一些实施方案中，融合蛋白包括与SEQIDNO:2的氨基酸序列具有至少50%,60%,65%,70%,75%,80%,85%,90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%或99%同一性的人AAT多肽序列。在一些实施方案中，AAT多肽序列是GenBank检索号AAB59495.1,CAJ15161.1,P01009.3,AAB59本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的融合蛋白，其包含可操作连接至人免疫球蛋白Fc多肽或自免疫球蛋白Fc多肽衍生的氨基酸序列的至少一种人丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽，所述人免疫球蛋白Fc多肽或自免疫球蛋白Fc多肽衍生的氨基酸序列包含选自SEQ ID NO: 43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64和65的氨基酸序列，其中所述免疫球蛋白Fc多肽包含在选自S228、L235、M252、M258、M428和其组合的位置处的一个或多个突变。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.27 US 14/5248321.分离的融合蛋白，其包含可操作连接至人免疫球蛋白Fc多肽或自免疫球蛋白Fc多肽衍生的氨基酸序列的至少一种人丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽，所述人免疫球蛋白Fc多肽或自免疫球蛋白Fc多肽衍生的氨基酸序列包含选自SEQIDNO:43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64和65的氨基酸序列，其中所述免疫球蛋白Fc多肽包含在选自S228、L235、M252、M258、M428和其组合的位置处的一个或多个突变。2.权利要求1的分离的融合蛋白，其中所述融合蛋白还包含选自以下的另外的多肽：细胞因子靶向多肽或自细胞因子靶向多肽衍生的序列；包含WAP结构域的多肽或自包含WAP结构域的多肽衍生的序列；或白蛋白多肽或自血清白蛋白多肽衍生的氨基酸序列。3.权利要求1的融合蛋白，其中所述人丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽是人α-1抗胰蛋白酶(AAT)多肽或自人AAT多肽衍生。4.权利要求3的分离的融合蛋白，其中AAT多肽包含SEQIDNO:2或SEQIDNO:80的氨基酸序列。5.权利要求3的分离的融合蛋白，其中AAT多肽包含AAT的反应位点环，其包含SEQIDNO:1的氨基酸序列。6.权利要求3的分离的融合蛋白，其中AAT多肽包含AAT的突变的反应位点环，其包含SEQIDNO:32或33的氨基酸序列。7.权利要求1的分离的融合蛋白，其中免疫球蛋白Fc多肽包含SEQIDNO:53的氨基酸序列。8.权利要求1的分离的融合蛋白，其中免疫球蛋白Fc多肽包含SEQIDNO:73的氨基酸序列。9.权利要求1或权利要求3的分离的融合蛋白，其中丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽和免疫球蛋白Fc多肽通过铰链区、接头区或铰链区和接头区二者可操作连接。10.权利要求9的分离的融合蛋白，其中铰链区、接头区或铰链区和接头区二者包含肽序列。11.权利要求1的分离的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含SEQIDNO:78或79的氨基酸序列。12.分离的融合蛋白，其包含可操作连接至修饰的人IgG4Fc多肽的至少一种人丝氨酸蛋白酶抑制剂多肽，其中所述修饰的人IgG4Fc多肽包含选自SEQIDNO:6、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72和73的氨基酸序列。13.权利要求12的分离的融合蛋白，其中所述修饰的人IgG4Fc多肽包含SEQIDNO:60、SEQIDNO:69或SEQIDNO:70的氨基酸序列。14.权利要求13的分离的融合蛋白，其中所述修饰的人IgG4Fc多肽包含在选自M25...

【专利技术属性】
技术研发人员：BP埃克尔曼，JC蒂默，Q德夫劳克瓦，
申请(专利权)人：英伊布里克斯有限合伙公司，
类型：发明
国别省市：美国,US