衣原体激活的B细胞平台及其方法技术

本文公开了一种衣原体激活的B细胞(CAB)平台。还公开了一种增强B细胞群的方法，所述方法包括在适合增强所述B细胞群的条件下将所述B细胞暴露于衣原体属，使得所述B细胞发生扩增和分化，并且将所述B细胞暴露于或交联到抗原。还公开了制备所述CAB以及用所述CAB治疗有需要的受试者的方法。

Chlamydia activated B cell platform and method thereof

A Chlamydia activated B cell (CAB) platform is disclosed herein. Also disclosed is a method to enhance B cells, the method includes the conditions for enhancement of B cells in the B cells exposed to Chlamydia, the proliferation and differentiation of the B cells and the B cells were exposed to or linked to the antigen. Also disclosed are methods for preparing the CAB and for treating subjects in need with the CAB.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】衣原体激活的B细胞平台及其方法相关专利申请的交叉引用本申请要求提交于2015年2月10日的美国临时申请No.62/114,349和提交于2015年10月29日的美国临时申请No.62/247,827的权益，这两篇申请全文以引用方式并入本文中。
技术介绍
树突状细胞(DC)被认为是有效的抗原呈递细胞(APC)，并且是对感染性疾病和癌症的保护性免疫的有效诱导物。这些引发了对使用DC作为细胞疫苗，尤其是分化形成外周血单核细胞的DC的强烈兴趣。然而，使用DC的临床试验所表现的总体临床反应率非常低，从而强调了需要改进基于DC的疫苗。这些细胞疗法成功的具体限制是可以从单核细胞产生的DC数目有限，因为DC不能离体扩增，从而使得其难以产生大量的这些细胞来用于长期、多重施用方案。此外，DC在冷冻保存后引发免疫应答的能力具有显著程度的变化性。这些限制变得尤其重要，因为更大的DC数量和治疗已经表现为引发更强健的抗肿瘤免疫并且改善临床反应。B细胞代表大量有效的APC，并且可能是替代DC、可以离体产生用于免疫治疗目的的唯一自体同源APC。虽然B细胞已经被描述为诱导T细胞耐受或甚至阻断体内抗肿瘤免疫应答，但是这些报道仅限于缺乏重要辅助和共刺激分子表达的静息B细胞。另一方面，B细胞可以由表达CD40L的细胞以及细胞因子或Toll样受体(TLR)配体的组合激活成为有效的APC，然而这些方法并未诱导最佳的B细胞激活(TLR配体)或需要使用细胞系(CD40L)，并且这些限制使它们不适用于临床应用。激活的B细胞具有增强的MHC和共刺激分子表达，并且表现出极大改善的抗原呈递能力以完全激活初始和记忆T细胞。同样重要的是，激活的B细胞可以通过分泌趋化因子来募集T细胞并且迁移到次级淋巴器官；这是体内诱导有效抗肿瘤免疫应答的关键要求。因为B细胞可以容易地离体获得，所以它们代表了用于免疫治疗应用的自体同源APC的有吸引力的来源。此外，激活的B细胞表达I类和II类MHC，因此与广泛的抗原一起使用。因此，在本领域中需要诱导B细胞的激活和增殖的实用方法来提供靶向多种类型的肿瘤和感染性疾病的细胞疫苗。
技术实现思路
本文公开了一种用于产生激活的抗原呈递细胞(APC)的平台，其中该平台包括：a)衣原体(Chlamydia)属(包括沙眼衣原体(C.trachomatis)、鹦鹉热衣原体(C.psittaci)和鼠型衣原体(C.muridarum))，或激活蛋白、肽或其片段；b)B细胞群；以及c)抗原，其中该抗原不是来源于衣原体属(包括沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和鼠型衣原体)或者不是来源于蛋白、肽或其片段。还公开了一种用于在受试者中产生激活的、抗原呈递衣原体激活的B细胞的方法，该方法包括：a)从受试者获得B细胞；b)将来自步骤a)的B细胞暴露于衣原体属(包括沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和鼠型衣原体)或蛋白、肽或其片段；c)将步骤b)的B细胞暴露于所需的抗原，其中该抗原不是来源于衣原体属(包括沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和鼠型衣原体)或者不是来源于激活蛋白、肽或其片段，从而获得激活的、抗原呈递衣原体激活的B细胞(CAB)。还公开了一种治疗有需要的受试者的方法，该方法包括：a)从受试者获得B细胞；b)将来自步骤a)的B细胞暴露于衣原体属(包括沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和鼠型衣原体)或激活蛋白、肽或其片段；c)将步骤b)的B细胞暴露于抗原，其中该抗原不是来源于衣原体属(包括沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和鼠型衣原体)或者不是来源于蛋白、肽或其片段，从而获得激活的、抗原呈递衣原体激活的B细胞(CAB)；以及d)用步骤c)的激活的、抗原呈递衣原体激活的B细胞治疗受试者。在附图和下面的描述中阐述了本专利技术的一个或多个实施方案的细节。本专利技术的其他特征、目的和优点将根据说明书和附图以及权利要求书而变得显而易见。附图说明图1示出了沙眼衣原体激活小鼠、恒河猴和人B细胞的示意图。CAB还已经在狗和猫中产生。图2示出了描绘用于证明CAB能够交叉致敏(cross-prime)可溶性抗原并激活抗原特异性CD8+T细胞的实验设计的示意图。转基因OT-I小鼠的T细胞受体(TCR)特异于卵清蛋白(OVA)，并且这些细胞是从脾脏获取的，标记有用于确定细胞增殖的荧光标记物，然后在用负载有OVA的CAB治疗野生型小鼠的前1天转移到野生型小鼠中。三天后通过流式细胞术测定OT-I细胞的增殖。图3示出CAB能够以剂量依赖性方式在体内交叉致敏抗原特异性CD8+T细胞。图4示出，在共培养7天后，人CAB促进人初始CD4+和CD8+T细胞两者的稳健异源初始T细胞增殖。流式细胞术用于评估CAB诱导T细胞增殖的能力。图5示出了在指定的时间点用负载特异性抗原的CAB体内治疗的恒河猴。然后使用来自这些动物的PBMC来评估抗原特异性T细胞应答。CAB治疗大大增加了T细胞的干扰素-γ分泌。此外，这些治疗没有可识别的不良反应。图6示出C57BL/6J小鼠用无负载的CAB(CAB)或负载有B16黑素瘤特异性肽(Trp-2和gp100)的CAB(即CAB-B16)接种。然后用20万个B16-F10细胞静脉内刺激小鼠。18天后，计算肺肿瘤结节。左图示出了可用无负载CAB或用CAB-B16治疗的小鼠中肺肿瘤结节的数目；右图示出了来自两组受治疗小鼠的代表性结果。图7示出CAB引发具有强健抗肿瘤活性的内源性CTL反应。在皮下注射E.G7-OVA肿瘤之前的OVA特异性CAB治疗可以预防肿瘤发展。图8示出CAB引发具有强健抗病毒活性的内源性CTL反应。在致死性眼部HSV-2刺激之前使用负载有HSV-1的免疫显性表位(gB498-505)的CAB拯救动物免受致死性感染。图9示出负载有OVA的CAB通过促进CTL免疫来控制早期形成的肿瘤。直到肿瘤注射开始5天后，才施用CAB治疗。如显示的那样，抗原特异性CAB治疗显著限制了肿瘤发展，并且当用耗减内源性CD8T细胞的抗体处理小鼠时，这种效应被消除。蓝色箭头指示CAB治疗。图10示出负载有OVA的CAB控制早期形成的肿瘤。这伴随有随时间推移的肿瘤生长结果，如图9所示。图11示出αGC增强CAB的治疗效果。CAB在注射前负载αGC以试图优化CAB功效。因为用CAB而不是αGC来治疗小鼠，这避免了与体内αGC施用相关的毒性。蓝色箭头指示CAB治疗。图12示出OVA的免疫显性肽(SIINFEKL)与CAB的交联增加了其治疗功效的一致性。使用水溶性1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺进行零长交联。蓝色箭头指示CAB治疗。图13示出了将抗原(OVA)交联至CAB的示例。左侧的峰指示经历模拟交联的CAB，而右侧的峰指示与OVA交联的CAB。用抗OVA单克隆抗体进行对CAB细胞表面上的交联OVA的检测。具体实施方式定义本文中使用的冠词“一”和“一个”是指该冠词的一个或多于一个(即，至少一个)语法宾语。例如，“一个要素”是指一个要素或多于一个要素。当关于可测量的值(诸如量、持续时间等)时，如本文所用的“约”旨在涵盖相对于指定值变化±20％或±10％、更优选±0.5％、甚至更优选±1％、并且还更优选±0.1％，因为这些变化适用于执行所公开的方法。术语“抗原组合物”是指包含刺激免疫系统并引发宿主或受试者免疫应答的材料的组合物。术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于产生激活的抗原呈递细胞(APC)的平台，其中所述平台包括：a.衣原体(Chlamydia)属，或激活蛋白、肽或其片段；b.B细胞群；以及c.抗原，其中所述抗原不是来源于衣原体属。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.02.10 US 62/114,349;2015.10.29 US 62/247,8271.一种用于产生激活的抗原呈递细胞(APC)的平台，其中所述平台包括：a.衣原体(Chlamydia)属，或激活蛋白、肽或其片段；b.B细胞群；以及c.抗原，其中所述抗原不是来源于衣原体属。2.根据权利要求1所述的平台，其中所述APC是衣原体激活的B细胞(CAB)。3.根据权利要求1或权利要求2所述的平台，其中所述衣原体属包括沙眼衣原体(C.Trachomatis)、鹦鹉热衣原体(C.psittaci)或鼠型衣原体(C.muridarum)。4.根据权利要求1至3中任一项所述的平台，其中所述衣原体属是灭活的。5.根据权利要求1至4中任一项所述的平台，其中a)包括衣原体的主要外膜(MOMP)蛋白。6.根据权利要求1至5中任一项所述的平台，其中所述平台包括多于一种的抗原。7.根据权利要求6所述的平台，其中所述平台包括多于两种的抗原。8.根据权利要求1至7中任一项所述的平台，其中步骤c)的所述抗原包括肿瘤相关抗原。9.根据权利要求1至8中任一项所述的平台，其中步骤c)的所述抗原包括传染剂。10.根据权利要求1至9中任一项所述的平台，其中与无活性的B细胞相比，衣原体激活的B细胞扩增100％或更多。11.根据权利要求1至10中任一项所述的平台，其中与无活性的B细胞相比，衣原体激活的B细胞具有更高的主要组织相容性复合体(MHC)和共刺激分子表达水平。12.根据权利要求1至11中任一项所述的平台，其中与无活性的B细胞相比，衣原体(Chlamydia)激活的B细胞具有提高的呈递抗原和激活T细胞的能力。13.根据权利要求1至12中任一项所述的平台，其中与无活性的B细胞相比，所述B细胞群以更大的速率迁移到次级淋巴器官。14.根据权利要求1至13中任一项所述的平台，其中与无活性的B细胞相比，所述B细胞群以更大的速率分泌细胞因子以增强T细胞募集。15.根据权利要求1至14中任一项所述的平台，其中所述平台是离体的。16.根据权利要求1至15中任一项所述的平台，其中所述平台是体外的。17.一种使用根据权利要求1所述的平台产生的疫苗。18.一种通过根据权利要求1所述的平台制备的衣原体激活的B细胞。19.一种用于在受试者中制备激活的、抗原呈递衣原体激活的B细胞的方法，所述方法包括：a.从受试者获得B细胞；b.将来自步骤a)的所述B细胞暴露于衣原体属，或激活蛋白、肽或其片段；c.将步骤b)的所述B细胞暴露于所需抗原，其中所述抗原不是来源于衣原体属，从而获得激活的、抗原呈递衣原体激活的B细胞(CAB)。20.根据权利要求19所述的方法，其中所述衣原体属包括沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体或鼠型衣原体。21.根据权利要求19或20所述的方法，其中在将来自步骤a)的所述B细胞暴露于衣原体属之后，增加将蛋白质、肽、核酸、脂质、碳水化合物或其片段交联到所述CAB的步骤，其中所述蛋白质、肽、核酸、脂质、碳水化合物或其片段是抗原。22.根据权利要求19至21中任一项所述的方法，其中步骤a)的所述B细胞从血液获得。23.根据权利要求19至21中任一项所述的方法，其中步骤a)的所述B细胞从外周血单核细胞(PBMC)获得。24.根据权利要求19至21中任一项所述的方法，其中步骤a)的所述B细胞从骨髓获得。25.根据权利要求19至21中任一项所述的方法，其中步骤a)的所述B细胞从淋巴器官获得。26.根据权利要求19至25中任一项所述的方法，其中所述衣原体属是灭活的。27.根据权利要求19至26中任一项所述的方法，其中所述衣原体属蛋白包括主要外...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·凯尔佩斯，R·V·米格尔，
申请(专利权)人：俄亥俄州创新基金会，
类型：发明
国别省市：美国,US