一种沉默T细胞抗原受体的T淋巴细胞的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种沉默T细胞抗原受体的T细胞制备方法，本发明专利技术是一种RNA干扰技术，特别是双靶点干扰技术沉默T细胞抗原受体，本发明专利技术还涉及表达shRNA的T细胞，所述T细胞可沉默自身的T细胞抗原受体，对异体来源的组织降低排斥作用。

【技术实现步骤摘要】
一种沉默T细胞抗原受体的T淋巴细胞的制备方法
本专利技术涉及生物与新医药
，更具体的说，是一种沉默T细胞抗原受体的T淋巴细胞的制备方法。
技术介绍
T淋巴细胞是在胸腺中分化成熟的淋巴细胞，故称胸腺依赖性淋巴细胞(Thymus-dependentlymphocyte)，简称T细胞。T细胞是由胸腺内的淋巴干细胞分化而成，是淋巴细胞中数量最多，功能最复杂的一类细胞。T细胞膜表面分子与T细胞的功能相关，也是T细胞的表面标志，可以用以分离、鉴定不同亚群的T细胞。TCR为所有T细胞表面的特征性标志，以非共价键与CD3结合，形成TCR-CD3复合物。TCR的作用是识别抗原。TCR是由两条不同肽链构成的异二聚体，由α、β两条肽链组成，每条肽链又可分为胞外区、跨膜区和胞质区等几部分；其特点是胞质区很短。TCR分子属于免疫球蛋白超家族，其抗原特异性存在于胞外区。RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-strandedRNA，dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种沉默T细胞抗原受体的T细胞制备方法，其特征在于：在TCR的α链和β链基因中分别选取连续的21个核苷酸，并与相应的启动子序列依次连接起来，得到转录形成TCR‑RNAi的融合基因片段，将所构建的融合基因片段插入慢病毒表达载体，包装成携带TCR‑RNAi融合基因的慢病毒，将所述携带TCR‑RNAi融合基因的慢病毒感染单核细胞诱导的异质T淋巴细胞，得到沉默T细胞抗原受体的T淋巴细胞。

【技术特征摘要】
1.一种沉默T细胞抗原受体的T细胞制备方法，其特征在于：在TCR的α链和β链基因中分别选取连续的21个核苷酸，并与相应的启动子序列依次连接起来，得到转录形成TCR-RNAi的融合基因片段，将所构建的融合基因片段插入慢病毒表达载体，包装成携带TCR-RNAi融合基因的慢病毒，将所述携带TCR-RNAi融合基因的慢病毒感染单核细胞诱导的异质T淋巴细胞，得到沉默T细胞抗原受体的T淋巴细胞。2.如权利要求1所述的一种沉默T细胞抗原受体的T细胞的制备方法，其特征在于：所述的转录TCR-RNAi的融合基因片段为序列表SEQ.ID.NO.1所示的核苷酸序列。3.如权利要求1所述的一种沉默T细胞抗原受体的T细胞的制备方法，其特征在于，所述单核细胞诱导的异质T淋巴细胞如下制备：取脐带血，分离单核细胞，用含有重组干扰素的培养基诱导培养24小时后，加入重组白细胞介素、OKT-3和5％的患者自体血浆诱导继续培养24小时；每...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘明录，金海峰，强邦明，万磊，韩庆梅，冯建海，张传鹏，马洪华，
申请(专利权)人：山东兴瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37